概要

의 연결을 부상을 검사에 대한 Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 모델

Published: October 28, 2010
doi:

概要

organoptypic hippocampal 슬라이스 문화 모델입니다<em> 체외에서</em> 모델 패러다임의 다양한 부상의 연결을 검사하는 데 사용됩니다. 이 문서에서는, 우리는 슬라이스 문화를 생성하고의 연결 부상을 quantifying위한 방법을 설명합니다.

Abstract

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화의 기본 아키텍처와 해마의 구성이 상대적으로 1 보존되어있는 부상의 연결 메커니즘을 검토에서 체외 방식입니다. organotypic 문화 시스템은 astrocytic의 연결 및 microglial 효과 시험은 가능하지만, 전직 생체내 준비로 주변 염증 세포의 혈액 흐름, 또는 모집의 효과를 해결하지 않습니다. 이를 위해,이 문화 방법은 자주 해마의 피라미드 뉴런에 excitotoxic 및 hypoxic 부상을 확인하는 데 사용됩니다뿐만 아니라 염증 반응을 검사하는 데 사용되었습니다. 여기에 우리는 출생 후의 쥐 두뇌에서 hippocampal 슬라이스 문화를 생성의 연결 부상을 유발하는 유해 자극을 관리하고, 시금 및 hippocampal의 연결을 죽음을 quantifying위한 방법을 설명합니다.

Protocol

1. 준비 시작하기 전에, 필요한 수술 도구, 해부, 문화 미디어, 그리고 칠일 늙은 쥐 또는 마우스 새끼를 조립. 프로토콜은 마우스 및 쥐 준비에 대해 동일합니다. (I) 재료 및 장비 운영 가위 (직선 길이 6 ", 고양이 # RS6818, Roboz, 게이 더 스버그, MD) 마이크로 가위, 해부 (길이 4 ', "고양이 # RS5910합니다. Roboz, 게이 더 스버그, MD)는 <…

Discussion

실험을 복제하면 재현할하고 일관된 결과를 보장하기 위해 수행하는 두 가지 중요한 포인트가 있습니다. 첫째, 실험 전에 12-14일에 대한 hippocampal 조각의 시대를하게하는 것이 중요합니다. 슬라이스 절연을 통해 상당한 microglial 응답이 있으며, microglia는 체외에서 3,6 일 10 가지를내는 발생 휴식 상태로 돌아와, 일정 기간 동안 활성 상태로 유지됩니다. 둘째, PI 형광 강도가 부상 세포…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

NINDS, 미국 심장 협회, 노화 연구에 대한 미국 연방, 천 년 3 월에 의해 투자

参考文献

  1. Stoppin, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods. 37 (2), 173-173 (1991).
  2. McCullough, L., Wu, L., Haughey, N. Neuroprotective Function of the PGE2 EP2 Receptor in Cerebral Ischemia. J Neurosci. 24 (1), 257-257 (2004).
  3. Czapiga, M., Colton, C. A. Function of microglia in organotypic slice cultures. J Neurosci Res. 56, 644-644 (1999).
  4. Newell, D. W., Barth, A., Papermaster, V. Glutamate and non-glutamate receptor mediated toxicity caused by oxygen and glucose deprivation in organotypic hippocampal cultures. J Neurosci. 15, 7702-7702 (1995).
  5. Wu, L., Wang, Q., Liang, X. Divergent Effects of prostaglandin recetor signaling on neuronal survival. Neuroscience letter. 421, 253-253 (2007).
  6. Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R., R, . Resting microglial cells in vitro: Analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures. Glia. 18, 319-319 (1996).

Play Video

記事を引用
Wang, Q., Andreasson, K. The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury. J. Vis. Exp. (44), e2106, doi:10.3791/2106 (2010).

View Video