In utero Elektroporatie gevolgd door primaire neuronale Cultuur voor het bestuderen van Gene Functie in subset van de corticale neuronen

In vitro onderzoek van primaire neuronale culturen zorgt voor kwantitatieve analyses van neurietuitgroei. Om te onderzoeken hoe genetische veranderingen neuronale proces uitgroei, shRNA of cDNA constructen kunnen worden geïntroduceerd in primaire neuronen via chemische transfectie of virale transductie beïnvloeden. Echter, met primaire corticale cellen zijn een heterogene pool van de cel-types (glutamaat neuronen uit verschillende lagen, remmende neuronen, gliacellen) getransfecteerd met behulp van deze methoden. Het gebruik van in utero electroporatie tot DNA-constructen te introduceren in de embryonale knaagdieren cortex zorgt voor bepaalde subsets van cellen worden gericht: terwijl elektroporatie van de vroege embryonale cortex doelstellingen diepe lagen van de cortex, elektroporatie in de late embryonale tijdstippen doelen meer oppervlakkige lagen. Verder, differentieel plaatsing van de elektroden in de hoofden van de individuele embryo's resultaten in de targeting van dorsale-mediale versus ventrale-laterale gebieden van de cortex. Na de elektroporatie, kan getransfecteerde cellen worden ontleed uit, los, en uitgeplaat in vitro voor kwantitatieve analyse van neurietuitgroei. Hier bieden wij een stap-voor-stap methode om neuronale proces uitgroei kwantitatief te meten in subsets van corticale cellen.

De basis voor het protocol in utero elektroporatie is in detail beschreven in twee andere Jupiter artikelen uit de Kriegstein lab ^{1, 2.} Zullen we een overzicht van onze protocol voor het in de baarmoeder elektroporatie, met de nadruk op de belangrijkste details, gevolgd door een beschrijving van onze protocol dat in utero elektroporatie van toepassing op de studie van gen-functie in neuronale proces uitgroei.