Aislamiento, enriquecimiento y mantenimiento de las células madre meduloblastoma

Los tumores cerebrales se ha sugerido que posee una pequeña población de células madre que son la causa principal de la tumorogénesis. Neuroesfera ensayos han sido generalmente adoptado para estudiar la naturaleza de las células madre neuronales, incluyendo los derivados de los tejidos normales y tumorales. Sin embargo, cantidades apreciables de diferenciación y muerte celular son comunes en neuroesferas cultivadas probablemente debido a la sub-óptimas condiciones tales como la accesibilidad de todas las células dentro de los agregados ámbito de medio de cultivo.

Meduloblastoma, el tumor infantil más común del SNC, se caracteriza por su rápida progresión y tendencia a expandirse por todo el cerebro-espinal eje con el resultado clínico deprimente. El meduloblastoma es un tumor neuroepitelial del cerebelo, que representan el 20% y 40% de los tumores de fosa intracraneal y posterior en la infancia, respectivamente ^1. Es bien sabido ahora que la señalización de Shh estimula la proliferación de los precursores del cerebelo gránulo neurona (CGNPs) durante el desarrollo del cerebelo ^2-4. Numerosos estudios utilizando modelos de ratón, en el que es constitutivamente la vía de Shh activa, han relacionado la señalización de Shh con meduloblastoma ^5-9.

Un informe reciente ha demostrado que un subgrupo de células derivadas de meduloblastoma Patched1 ratones ^{LacZ / +} son las células madre del cáncer, que son capaces de iniciar y propogating tumores ^10. A continuación se describe un método eficiente para aislar, enriquecer y mantener las células madre tumorales derivadas de varios modelos de ratones de meduloblastoma, con la vía activada constitutivamente Shh debido a una mutación en el alisado ^(11, en ​​adelante nos referiremos como SmoM2), un GPCR que es fundamental para Shh vía de activación. En todos los tejidos meduloblastoma aislados, hemos sido capaces de establecer numerosas colonias que se reproducen más. Estas células expresan varios marcadores con firmeza las células madre neurales, como Nestin y Sox2, pueden someterse a los pases en serie (más de 20) y se clonación. Mientras que estas células madre tumorales cultivadas eran relativamente pequeñas, a menudo con bipoar nucleares de alta relación núcleo: citoplasma cuando se cultivan en condiciones que favorecen el crecimiento de células madre, que alteró dramáticamente su morfología, extendió múltiples procesos celulares, aplanado y se retiró del ciclo celular al cambiar a una celda medio de cultivo suplementado con suero fetal bovino al 10%. Más importante aún, estas células madre tumorales diferenciadas en Tuj1 + o + NeuN neuronas, GFAP + astrocitos y oligodendrocitos CNPase +, destacando así sus múltiples potencia. Además, estas células eran capaces de propagar meduloblastomas secundaria cuando ortotópicamente trasplantadas a ratones de acogida.