Enriquecimento de isolamento, e Manutenção de Células-Tronco Meduloblastoma

Tumores cerebrais têm sido sugeridos para possuir uma pequena população de células-tronco que são a causa raiz de tumorigênese. Neurosphere ensaios têm sido geralmente adotado para estudar a natureza das células-tronco neurais, incluindo aquelas derivadas de tecidos normais e tumorais. No entanto, quantidades apreciáveis ​​de diferenciação e morte celular são comuns na cultura neurospheres provavelmente devido ao sub-ótimas condições tais como a acessibilidade de todas as células dentro de agregados esfera para meio de cultura.

Meduloblastoma, o tumor mais comum do SNC pediátrica, é caracterizada pela sua rápida progressão e tendência a se espalhar ao longo do eixo cérebro-espinhal inteira com o resultado clínico sombrio. Meduloblastoma é um tumor neuroepiteliais do cerebelo, responsável por 20% e 40% dos tumores intracranianos e fossa posterior na infância, respectivamente ^1. É agora bem estabelecido que a sinalização Shh estimula a proliferação de precursores granulares do cerebelo neurônio (CGNPs) durante o desenvolvimento do cerebelo ^2-4. Numerosos estudos utilizando modelos de ratos, em que a via de Shh é constitutivamente ativado, ligaram sinalização Shh com meduloblastoma ^5-9.

Um relatório recente mostrou que um subconjunto de células derivadas de meduloblastoma Patched1 ratos ^{LacZ / +} são as células-tronco cancerosas, que são capazes de iniciar e propogating tumores ^10. Aqui nós descrevemos um método eficiente para isolar, enriquecer e manter células-tronco tumorais derivados de modelos do rato várias meduloblastoma, com constitutivamente ativado via de Shh devido a uma mutação no Smoothened ^(11, doravante referida como SmoM2), um GPCR, que é fundamental para Shh ativação da via. Em todos os tecidos meduloblastoma isoladas, foram capazes de estabelecer numerosas colônias altamente proliferativa. Estas células robustamente expressa vários marcadores de células-tronco neurais, tais como nestina e Sox2, pode sofrer passagens em série (maior que 20) e foram clonogênica. Embora essas células-tronco cultivadas tumor eram relativamente pequenos, muitas vezes com bipoar nuclear elevada relação entre citoplasmática quando cultivadas em condições favorecendo o crescimento de células-tronco, que alterou drasticamente sua morfologia, estendida vários processos celulares, achatada e retirou-se do ciclo celular após a mudança para uma célula meio de cultura suplementado com 10% de soro fetal bovino. Mais importante, estas células-tronco tumorais diferenciado em Tuj1 + ou + NeuN neurônios, astrócitos GFAP + e + CNPase oligodendrócitos, ressaltando assim a sua potência multi-. Além disso, essas células eram capazes de propagar meduloblastomas secundário quando ortotopicamente transplantadas em camundongos host.