このプロトコルは、分離、濃縮、および異所性ソニックヘッジホッグ経路の活性をもつ変異マウス由来の髄芽腫の腫瘍幹細胞の維持を説明します。
脳腫瘍は、腫瘍形成の根本原因である幹細胞の小集団を持つことが示唆されている。ニューロスフェアのアッセイは、一般的に、正常および腫瘍組織由来のものを含む神経幹細胞の性質を研究するために採用されています。しかし、分化と細胞死のかなりの量は、培地への球の集合内のすべてのセルのアクセシビリティなど次善の状態に可能性が高いため、培養ニューロスフェアでは一般的です。
髄芽腫、最も一般的な小児中枢神経系の腫瘍は、その急速な進行や全体の脳脊髄陰気な臨床転帰との軸に沿って広がる傾向によって特徴づけられる。髄芽腫は、それぞれ小脳の神経上皮腫瘍、20%を占めると小児期の頭蓋内および後頭蓋窩腫瘍の40%、1です。それは今もソニックヘッジホッグシグナル伝達が小脳発達2月4日中に小脳顆粒神経前駆細胞(CGNPs)の増殖を刺激することが確立されている。マウスモデルを用いて多くの研究では、Shhの経路が構成的に活性化されている、髄芽腫5月9日とソニックヘッジホッグシグナル伝達をリンクされています。
最近の報告では、Patched1 のLacZ / +マウス由来の髄芽腫細胞のサブセットは、腫瘍の10を開始し、伝播することが可能ながん幹細胞が、あることが示されている。ここでは、平滑化の変異(11、ここに至ってはSmoM2と呼ばれる)のために構成的に活性化さShhの経路で、Shhのために重要なGPCRの髄芽腫のいくつかのモデルマウス由来の腫瘍幹細胞を、分離豊かにし、維持するために効率的な方法を記述する経路の活性化。すべての孤立した髄芽腫の組織では、我々は数々の高度に増殖したコロニーを確立することができた。確実にネスチンとSox2などのいくつかの神経幹細胞マーカーを発現するこれらの細胞は、連続継代を経て(20以上)とクローン原性であったこともできます。これらの培養腫瘍幹細胞は、幹細胞の増殖に有利な条件下で培養すると細胞質比が高いの核としばしばbipoar比較的小規模でしたが、彼らは劇的に、その形態を変化させた複数の細胞プロセスを拡張し、平らにし、セルへの切り替え時に細胞周期から撤退培地は10%ウシ胎児血清を補充した。さらに重要なことは、これらの腫瘍幹細胞は、このように、そのマルチ効力を強調、Tuj1 +またはNeuN +の神経細胞、GFAP +アストロサイトとCNPase +オリゴデンドロサイトに分化した。さらに、これらの細胞は、同所宿主マウスに移植すると、二次髄芽腫を伝播することができた。
我々は、構成的に活性なヘッジホッグシグナル伝達と変異マウスから取得した原発腫瘍組織からの髄芽腫の幹細胞を、分離豊かにし、維持するための効率的な方法を説明します。私たちは正常に健康な腫瘍の幹細胞株を確立する上でひとつの重要なステップは、原発腫瘍の組織の解離の際に使用Accutase治療法であることがわかった。我々の経験では、ときに小脳からの最初の解離腫瘍組織、37…
The authors have nothing to disclose.
この研究は、ヴァンダービルト – イングラムがんセンターサポート助成金(P30 CA068485)、小児脳腫瘍財団と米国立衛生研究所(NS042205)からの補助金によって支えられている。