Isolamento, di arricchimento e manutenzione delle cellule staminali Medulloblastoma

Tumori del cervello sono state proposte di possedere una piccola popolazione di cellule staminali che sono la causa principale di tumorigenesi. Saggi neurosfere sono state generalmente adottate per studiare la natura delle cellule staminali neurali, compresi quelli derivati ​​da tessuti normali e tumorali. Tuttavia, quantità apprezzabili di differenziazione e morte cellulare sono comuni nelle neurosfere colto probabilmente dovuto alla non ottimale condizione come l'accessibilità di tutte le cellule all'interno degli aggregati sfera di terreno di coltura.

Medulloblastoma, il più comune tumore pediatrico sistema nervoso centrale, è caratterizzata da rapida progressione e la tendenza a diffondersi lungo l'intero cervello-spinale, con triste risultato clinico. Medulloblastoma è un tumore neuroepiteliale del cervelletto, che rappresentano il 20% e il 40% dei tumori intracranici e fossa posteriore durante l'infanzia, rispettivamente ^1. E 'ormai noto che Shh segnalazione stimola la proliferazione dei precursori neuronali dei granuli cerebellari (CGNPs) durante lo sviluppo del cervelletto ^2-4. Numerosi studi utilizzando modelli del mouse, in cui il percorso Shh è costitutivamente attivata, hanno collegato segnalazione Shh con medulloblastoma ^5-9.

Un recente rapporto ha mostrato che un sottogruppo di cellule derivate da medulloblastoma Patched1 topi ^{LacZ / +} sono le cellule staminali tumorali, che sono in grado di avviare e propogating tumori ^10. Qui si descrive un metodo efficace per isolare, arricchire e mantenere le cellule staminali tumorali derivanti da alcuni modelli murini di medulloblastoma, con costitutivamente attivato percorso Shh a causa di una mutazione in Smoothened ^(11, di cui esso contenute come SmoM2), un GPCR, che è fondamentale per Shh percorso di attivazione. In ogni tessuto medulloblastoma isolato, siamo stati in grado di stabilire numerose colonie altamente proliferative. Queste cellule robustamente espresso diversi marcatori di cellule staminali neurali come Nestin e Sox2, possono subire passaggi consecutivi (maggiore di 20) e sono stati clonogenica. Mentre queste colture di cellule staminali tumorali sono relativamente piccole, spesso bipoar nucleare con elevato rapporto citoplasmatico quando coltivate in condizioni favoriscono la crescita delle cellule staminali, hanno drasticamente modificato la loro morfologia, esteso più processi cellulari, appiattite e si ritirò dal ciclo cellulare dopo il passaggio a una cella mezzo di coltura supplementato con 10% di siero fetale bovino. Ancora più importante, queste cellule staminali tumorali differenziate in Tuj1 NeuN + + o neuroni, astrociti GFAP + e + CNPase oligodendrociti, evidenziando la loro multi-potenza. Inoltre, queste cellule erano in grado di propagare medulloblastomi secondario quando ortotopicamente trapiantate in topi di accoglienza.