Isolation, Anreicherung und Pflege von Medulloblastom Stem Cells

Hirntumore sind vorgeschlagen worden, um eine kleine Population von Stammzellen, die die Ursache der Tumorentstehung sind, besitzen. Neurosphäre Assays wurden in der Regel angenommen, um die Natur der neuralen Stammzellen, einschließlich derjenigen von normalem und Tumorgewebe gewonnen zu studieren. Allerdings sind erhebliche Mengen an Differenzierung und Zelltod in kultivierten Neurosphären wahrscheinlich auf sub-optimalen Zustand wie Zugänglichkeit aller Zellen innerhalb Sphäre Aggregate Kulturmedium verbreitet.

Medulloblastom, der häufigste pädiatrische ZNS-Tumor, zeichnet sich durch seine schnelle Progression und die Tendenz, über die gesamte Gehirn-Rückenmark-Achse mit düsteren klinische Ergebnis Verbreitung aus. Medulloblastom ist ein neuro-Tumor des Kleinhirns, rund 20% und 40% der intrakraniellen und hinteren Schädelgrube Tumor in der Kindheit, bzw. ^1. Es ist inzwischen gut etabliert, dass Shh Signal Verbreitung von Kleinhirn Granulat Neuron Vorstufen (CGNPs) stimuliert während des Kleinhirns Entwicklung ^2-4. Zahlreiche Studien mit Maus-Modellen, in denen die Shh Weg konstitutiv aktiviert ist, haben Shh Signalisierung mit Medulloblastom ^5-9 verbunden.

Ein kürzlich veröffentlichter Bericht hat gezeigt, dass eine Untergruppe von Medulloblastom Zellen aus Patched1 ^{LacZ / +} Mäusen abgeleitet Krebsstammzellen, die in der Lage die Initiierung und propogating Tumoren ¹⁰ sind sind. Hier beschreiben wir eine effiziente Methode zu isolieren, zu bereichern und zu pflegen Tumorstammzellen aus mehreren Mausmodellen Medulloblastom abgeleitet, mit konstitutiv aktivierten Shh-Weg durch eine Mutation in Smoothened ^(11, Darüber entstand genannt SmoM2), ein GPCR, die kritisch für Shh ist Stoffwechselwegaktivierung. In jedem isolierten Medulloblastom Gewebe, konnten wir zahlreiche hoch proliferative Kolonien zu gründen. Diese Zellen robust äußerten mehrere neuronalen Stammzell-Marker wie Nestin und Sox2 erfahren können, serielle Passagen (größer als 20) und wurden klonogenen. Während diese kultivierten Tumor-Stammzellen waren relativ klein, oft bipoar mit hohen nuklearen auf Plasma-Relation, wenn unter Bedingungen, die Stammzellen zur Vermehrung kultiviert, sie dramatisch verändert ihre Morphologie, erweiterte mehrere zelluläre Prozesse, abgeflacht und zog sich aus dem Zellzyklus beim Umschalten auf eine Zelle Kulturmedium mit 10% fötalem Rinderserum ergänzt. Noch wichtiger ist, diese Tumorstammzellen in Tuj1 differenzierte + oder NeuN + Neuronen, Astrozyten GFAP + und + CNPase Oligodendrozyten, damit sie deren Multi-Potenz. Außerdem wurden diese Zellen in der Lage zu verbreiten sekundären Medulloblastome bei orthotop in Host-Mäuse transplantiert.