L'isolement, l'enrichissement et l'entretien des cellules souches Médulloblastome

Les tumeurs cérébrales ont été proposés à posséder une petite population de cellules souches qui sont à l'origine de la tumorigenèse. Dosages Neurosphère ont été généralement adoptée pour étudier la nature des cellules souches neurales, y compris ceux issus de tissus normaux et tumoraux. Cependant, des quantités appréciables de différenciation et mort cellulaire sont communs dans neurosphères culture probablement en raison de sous-optimale état tels que l'accessibilité de toutes les cellules dans les agrégats sphère au milieu de culture.

Médulloblastome, la plus fréquente des tumeurs pédiatriques du SNC, est caractérisé par sa progression rapide et tendance à se propager le long de la totalité du cerveau-rachidien axe avec le résultat clinique lamentable. Le médulloblastome est une tumeur neuro-du cervelet, comptant pour 20% et 40% des tumeurs intracrâniennes et la fosse postérieure dans l'enfance, respectivement ^1. Il est maintenant bien établi que la signalisation de Shh stimule la prolifération des précurseurs de neurones du cervelet granules (CGNPs) pendant le développement du cervelet ^2-4. De nombreuses études utilisant des modèles de souris, dans lequel la voie Shh est constitutivement activé, ont lié la signalisation de Shh avec médulloblastome ^5-9.

Un récent rapport a montré que sous-ensemble de cellules provenant de souris médulloblastome ^LacZ Patched1 ^{/ +} sont des cellules souches cancéreuses, qui sont capables d'initier et propogating tumeurs ^10. Nous décrivons ici une méthode efficace pour isoler, d'enrichir et de maintenir les cellules souches tumorales dérivées de plusieurs modèles murins de médulloblastome, avec voie Shh constitutivement activé en raison d'une mutation dans Smoothened ^(11, Héraion mentionné que SmoM2), un RCPG qui est essentiel pour Shh activation de la voie. Dans tous les tissus médulloblastome isolés, nous avons été en mesure d'établir de nombreuses colonies très prolifératives. Ces cellules robuste exprimé plusieurs marqueurs des cellules souches neurales telles que Nestin et Sox2, peuvent subir des passages en série (plus de 20) et ont été clonogénique. Bien que ces cellules souches tumorales en culture ont été relativement faibles, souvent avec des armes nucléaires bipoar élevé par rapport au cytoplasme lorsqu'elles sont cultivées dans des conditions favorisant la croissance des cellules souches, ils radicalement modifié leur morphologie, prolongée de plusieurs processus cellulaires, aplatie et se retire du cycle cellulaire lors de la commutation d'une cellule milieu de culture supplémenté avec 10% de sérum de veau foetal. Plus important encore, ces cellules souches tumorales différenciées en Tuj1 + ou + NeuN neurones, les astrocytes et GFAP + + CNPase oligodendrocytes, soulignant ainsi leur multi-puissance. En outre, ces cellules ont été capables de propager des médulloblastomes secondaire lorsque orthotopique transplantées chez des souris hôte.