Isolatie, Verrijking, en onderhoud van Medulloblastoom Stem Cells

Hersentumoren zijn voorgesteld om een ​​kleine populatie van stamcellen die zijn de oorzaak van het ontstaan ​​van tumoren bezitten. Neurosphere assays zijn over het algemeen genomen de aard van neurale stamcellen, waaronder die zijn afgeleid van normale en tumor weefsel te bestuderen. Echter, aanzienlijke hoeveelheden van differentiatie en celdood komen vaak voor bij gekweekte neurospheres waarschijnlijk te wijten aan sub-optimale conditie, zoals de toegankelijkheid van alle cellen binnen het werkingsgebied van aggregaten kweekmedium.

Medulloblastoom, de meest voorkomende tumor bij kinderen CNS, wordt gekenmerkt door zijn snelle progressie en de neiging zich te verspreiden langs de gehele hersen-spinale as met sombere klinische uitkomst. Medulloblastoom is een neuro-epitheliale tumor van het cerebellum, goed voor 20% en 40% van de intracraniële en posterior fossa tumor in de kindertijd, respectievelijk ^1. Het is nu bekend dat Shh signalering de proliferatie van cerebellaire granule neuron precursoren (CGNPs) stimuleert tijdens de ontwikkeling van het cerebellum ^2-4. Tal van studies met behulp van muismodellen, waarin de Shh pad constitutief geactiveerd is, zijn gekoppeld Shh signalering met medulloblastoom ^5-9.

Een recent rapport heeft aangetoond dat een subset van medulloblastoom cellen afkomstig van Patched1 ^{LacZ / +} muizen zijn kanker stamcellen, die in staat zijn het initiëren en propogating tumoren ^10. Hier beschrijven we een efficiënte methode te isoleren, te verrijken en te onderhouden tumor stamcellen afkomstig van verschillende muismodellen van medulloblastoom, met constitutief geactiveerde Shh weg als gevolg van een mutatie in gladgestreken ^(11, hierop aangeduid als SmoM2), een GPCR dat essentieel is voor Shh weg activering. In elke geïsoleerde medulloblastoom weefsel, waren we in staat om een ​​groot aantal zeer proliferatieve kolonies vast te stellen. Deze cellen robuust uitgedrukt verschillende neurale stamcellen merkers zoals Nestin en Sox2, kunnen ondergaan seriële passages (groter dan 20) en werden Monogene. Hoewel deze gekweekte tumorcellen stamcellen waren relatief kleine, vaak bipoar met een hoge nucleair cytoplasma-ratio indien gekweekt onder omstandigheden gunste van stamcellen groei, zien zij dramatisch veranderd hun morfologie, uitgebreid met meerdere cellulaire processen, afgeplat en trok zich terug uit de celcyclus bij overschakelen naar een cel kweekmedium aangevuld met 10% foetaal runderserum. Wat nog belangrijker is, deze tumor stamcellen gedifferentieerd in Tuj1 + of Neun + neuronen, GFAP + astrocyten en oligodendrocyten CNPase +, waardoor de nadruk leggend op multi-potentie. Bovendien zijn deze cellen in staat waren van teeltmateriaal secundaire medulloblastomen wanneer orthotopically getransplanteerd in muizen gastheer.