Montage d’agar : une méthode de base pour monter des embryons vivants de poisson zèbre pour l’imagerie à long terme
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Hagedorn E. J., et coll. Génération d’embryons de poisson zèbre parabiotic par fusion chirurgicale de blastulae en développement. J. Vis. Exp. (2016).
Cette vidéo décrit les instructions étape par étape sur le montage d’embryons vivants de poisson zèbre sur 6 plaques de puits à l’aide d’agarose à faible fonte. Il fournit également le processus d’acquisition d’images d’embryons vivants et de l’analyser à l’aide d’un logiciel.
Protocol
1. Configuration du microscope, acquisition d’images, traitement et analyse Préparer un point de fusion faible (LMP) de 0,8 % : Ajouter 0,8 g d’agarose LMP à 100 ml d’E3 et chauffer jusqu’à dissolution complète. Bien que chaud, aliquot 1 ml de LMP agarose dans 1,5 ml de tubes de microfuge dans un bloc de chauffage de 37 °C. L’agarose LMP restera fondu à 37 °C. Ajouter 40 μl de 4 mg/ml (25x), pH 7,0 tricaine à chaque aliquot de 1 ml d’agarose LMP à 37 °C. NOTE :</…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
