Işık Tabakası MikroskopiSi Numune Hazırlama: Uzun Süreli Görüntüleme için Canlı Zebra Balığı Embriyolarının Montajı
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Icha J., vd. Zebra Balığı Göz Gelişimine Işık Tabakası Floresan Mikroskopisi Kullanma. J. Vis. Exp. (2016).
Bu makalede, ışık tabakası floresan mikroskopisi için örnek hazırlık açıklanmaktadır. Ayrıca, canlı embriyoların fizyolojik koşullara yakın koşullarda uzun süreli filmlerinin kaydedilmesini sağlayan uzun süreli görüntüleme için canlı zebra balığı embriyoları monte etmek için bir yöntem göstermektedir.
Protocol
1. Numune Hazırlama Agarose Karışımını Hazırlama Agarose karışımını yapmadan 15 dakika önce, % 1 düşük erime noktası agarose (E3 ortamında çözünmüş) bir 1 ml aliquot’unu 70 ° C’ye ayarlanmış bir ısıtma bloğunda eritin. Agarose tamamen eridikten sonra, 600 μl’yi taze 1,5 ml’lik bir tüpe aktarın, 250 μl E3 ortamı, 50 μl% 0,4 MS-222 ve 25 μl girdaplı boncuk stok çözeltisi ekleyin.NOT: Bu, karışımın 925 μl’si olurken, daha so…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
