Preparación de muestras de microscopía de hoja de luz: Montaje de embriones de pez cebra vivo para imágenes a largo plazo
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Icha J., et al. Uso de la microscopía de fluorescencia de la hoja de luz para la imagen desarrollo de ojos de pez cebra. J. Vis. Exp. (2016).
Este artículo describe la preparación de muestras para la microscopía de fluorescencia de hoja de luz. También demuestra un método para montar embriones de pez cebra vivos para imágenes a largo plazo, lo que permite la grabación de películas de larga duración de embriones vivos en condiciones casi fisiológicas.
Protocol
1. Preparación de muestras Preparación de la mezcla de Agarose 15 minutos antes de hacer de la mezcla de agarose, derretir una alícuota de 1 ml de agarose de punto de fusión bajo (disuelto en medio E3) en un bloque de calentamiento establecido en 70 °C. Una vez que la agarose esté completamente fundida, transfiera 600 μl a un tubo fresco de 1,5 ml, agregue 250 μl de medio E3, 50 μl del 0,4% MS-222 y 25 μl de solución de material de cuentas vórcidas.NOTA:</strong…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
