Preparação da amostra de microscopia da folha de luz: montagem de embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Icha J., et al. Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz para Desenvolvimento de Olhos de Zebrafish image. J. Vis. Exp. (2016).
Este artigo descreve a preparação da amostra para microscopia de fluorescência de folha de luz. Também demonstra um método para montar embriões de zebrafish vivos para imagens de longo prazo, o que permite a gravação de filmes de longo tempo de embriões vivos em condições quase fisiológicas.
Protocol
1. Preparação da amostra Preparando o Mix Agarose 15 min antes de fazer a mistura de agarose, derreta uma alíquota de 1 ml de 1% de ponto de fusão baixo (dissolvida em média E3) em um bloco de aquecimento definido para 70 °C. Uma vez que a agarose esteja completamente derretida, transfira 600 μl em um tubo fresco de 1,5 ml, adicione 250 μl de média E3, 50 μl de 0,4% MS-222 e 25 μl de solução de estoque de contas vórtices.NOTA: Isso faz com que 925 μl…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
