Light Sheet Microscopy Sample Preparation: Montage von lebenden Zebrafisch-Embryonen für Langzeitaufnahmen
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Icha J., et al. Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development. J. Vis. Exp. (2016).
Dieser Artikel beschreibt die Probenvorbereitung für die Lichtbogenfluoreszenzmikroskopie. Es zeigt auch eine Methode, um lebende Zebrafisch-Embryonen für die Langzeitbildgebung zu montieren, die die Aufzeichnung von langzeitzeitlichen Filmen von lebenden Embryonen unter nahezu physiologischen Bedingungen ermöglicht.
Protocol
1. Probenvorbereitung Vorbereitung des Agarose Mix 15 min vor der Herstellung der Agarosemischung, schmelzen Sie ein 1 ml Aliquot von 1% niedrig schmelzendem Schmelzpunkt Agarose (in E3 medium gelöst) in einem Heizblock auf 70 °C eingestellt. Sobald die Agarose vollständig geschmolzen ist, übertragen Sie 600 l in eine frische 1,5 ml-Röhre, fügen Sie 250 l E3-Medium, 50 l 0,4% MS-222 und 25 l Wirbelperlenlagerlösung hinzu.HINWEIS: Dies macht 925 l der Mischun…
Materials
| Lightsheet Z.1 microscope | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Low melting point agarose | Roth | 6351.1 | |
| Low melting point agarose | Sigma | A4018 or A9414 | |
| Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MESAB/ MS-222/Tricaine) | Sigma | E10521 | |
| 20 μl (1 mm inner diameter, marked black) capilllaries | Brand | 701904 | sold as spare part for transferpettor |
| Teflon tip plungers for 20 μl capillarie | Brand | 701932 | sold as spare part for transferpettor |
