Elaborazione delle gambe degli insetti per microscopia a fluorescenza: un metodo per preservare le strutture neuromuscolari per l'imaging
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Guan, W., et al. J. Vis. Exp. (2018).
Questo video descrive un metodo per sezionare, fissare e montare la gamba adulta Drosophila preservando la sua neuromuscolatura intatta per l’analisi dell’imaging.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Guan et al., Visualizza gli assoni dei motoneuroni delle gambe Drosophila attraverso la cuticola adulta, J. Vis. Exp. 1. Dissezione e fissazione delle gambe Prendi una piastra multi-pozzo di vetro e riempi il numero appropriato di pozzi con il 70% di etanolo. Aggiungere 15-20 mosche anestetizzate di CO2(di entrambi i sessi e di qualsiasi età) ad ogni pozzo e, usando un pennello, tamponare delicatamente le mosc…
Representative Results
Figura 1: Procedura per montare le gambe su vetrini al microscopio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
