Drosophila Nöromüsküler Kavşak (NMJ) Nicelemesi: Sinaptik Morfoloji ve fonksiyonu değerlendirmek için bir yöntem
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Castells-Nobau, A., vd. Drosophila Nöromüsküler Kavşak Morfolojisinin Yüksek Verim ve Çok Parametrik Nicelemesi için İki Algoritma. J. Vis. Exp. (2017).
Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ), sinapsların morfolojisini ve işlevini incelemek için bir model olarak kullanılır. Bu video, araştırmacıların NMJ’yi karakterize etmek için ölçtüklerine dair önemli özellikleri açıklar. Örnek protokol, nicelemeyi otomatik olarak gerçekleştirebilen bir yazılımı gösterir.
Protocol
Bu protokol Castells-Nobau ve ark., Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp’inYüksek verimli ve Çok parametrik Nicelemesi için İki Algoritma’dan bir alıntıdır. (2017). 1. Görüntü İşlemeden Önceki Gereksinimler Daha önce açıklandığı gibi, üçüncü instar gezgin larvalarının (L3) Drosophila açık kitap hazırlıklarını gerçekleştirin. İki işaretleyicinin birleşimini kullanarak eş-immünolab…
Representative Results
Şekil 1: Uygunsuz Makro Segmentasyon Sonuçları Örnekleri. “Drosophila NMJ Morphometrics” veya”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics” çalıştırarak sonuç görüntüleri. Sinaptik terminalin parçaları sarı anahatta (A) yer almaz. Arka planın bazı bölümleri sinaptik terminale sarı anahat (B) ile dahil edilir. Mavi iskelet çizgisi sinaptik terminalin(C…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
