Drosophila Cuantificación de unión neuromuscular (NMJ): un método para evaluar la morfología sináptica y la función
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Castells-Nobau, A., et al. Dos algoritmos para el alto rendimiento y cuantificación multi-paramétrica de la morfología de unión neuromuscular De Drosophila . J. Vis. (2017).
La unión neuromuscular Drosophila (NMJ) se utiliza como modelo para estudiar la morfología y la función de las sinapsis. Este video describe características importantes que los investigadores cuantifican para caracterizar el NMJ. El protocolo de ejemplo muestra un software capaz de realizar la cuantificación automáticamente.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput y Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Requisitos antes del procesamiento de imágenes Realiza Drosophila preparaciones de libros abiertos de terceras larvas errantes instar (L3), como se describió anteriormente. Co-inmunoetiqueta Drosophila NMJ terminales utilizando una …
Representative Results
Figura 1: Ejemplos de resultados de segmentación de macros inapropiados. Imágenes de resultados después de ejecutar”Drosophila NMJ Morphometrics” o”Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Las partes del terminal sináptico no están incluidas en el contorno amarillo (A). Partes del fondo se incluyen en el terminal sináptico por el contorno amarillo (B). La línea de es…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
