드로소필라 신경 근육 정션 (NMJ) 정량화: 시냅스 형태와 기능을 평가하는 방법

Published: April 30, 2023

Abstract

출처: Castells-Nobau, A., 외. Drosophila 신경 근육 정션 형태학의 높은 처리량 및 다중 파라메트릭 정량화를 위한 두 개의 알고리즘. J. 비스 익스펙. (2017).

Drosophila 신경 근육 접합 (NMJ) 시 냅 스의 형태와 기능을 연구 하는 모델로 사용 됩니다. 이 비디오는 연구원이 NMJ의 특성화를 정량화하는 중요한 특징을 설명합니다. 예제 프로토콜은 정량화를 자동으로 수행할 수 있는 소프트웨어를 보여 줍니다.

Protocol

이 프로토콜은 Castells-Nobau 등에서발췌한 것으로, Drosophila N유로근육 정션 형태학의 고처리량 및 다중 파라메트릭 정량화를 위한 두 가지 알고리즘, J. Vis. Exp. (2017). 1. 이미지 처리 전에 요구 사항 이전에 설명한 대로 세 번째 인스타 방황 애벌레(L3)의 드로소필라 오픈 북 준비를 수행하십시오. “Drosophila NMJ Morphometrics”와 분석을 위해 Brp?…

Representative Results

그림 1: 부적절한 매크로 세분화 결과의 예입니다. “Drosophila NMJ Morphometrics” 또는”Drosophila NMJ 부톤 모포메트릭”을 실행 한 후 결과 이미지. 시냅스 단말의 일부는 노란색윤곽선(A)에포함되지 않습니다. 배경의 일부는 노란색윤곽선(B)에의해 시냅스 단자안에 포함된다. 파란색 골격 선은 …

Materials

Immunostaining Dilution
Mouse anti-discs large 1 Developmental Studies Hybridoma Bank AFFN-DLG1-4D6 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Rabbit anti-horseradish peroxidase Jackson IR 323-005-021 1/500
Rabbit anti-Synaptotagmin Gift from Hugo Bellen Jan-00
Mouse anti-Cysteine string protein Developmental Studies Hybridoma Bank DCSP-1(ab49) 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit)
Mouse anti-Bruchpilot Developmental Studies Hybridoma Bank nc82 Jan-50
Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 Life technologies A11029 1/200
Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 Life technologies A11011 1/500
Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit ThermoFisher Z25006
ProLong Gold Antifade Mountant ThermoFisher P36930
Equipment
Confocal microscope or fluorescence microscope Leica SP5
Zeiss Axio imager
Computer Mac or Pc
Software
FIJI

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記事を引用
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).

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