Drosofilia Quantificazione della giunzione neuromuscolare (NMJ): un metodo per valutare la morfologia e la funzione sinaptica
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Castells-Nobau, A., et al. J. Vis. Exp. (2017).
La giunzione neuromuscolare Drosophila (NMJ) è usata come modello per studiare la morfologia e la funzione delle sinapsi. Questo video descrive importanti caratteristiche che i ricercatori quantificano per caratterizzare la NMJ. Il protocollo di esempio illustra un software in grado di eseguire automaticamente la quantificazione.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Requisiti prima dell’elaborazione delle immagini Eseguire drosophila preparazioni di libri aperti di terze larve errante instar (L3), come descritto in precedenza. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminali usando una combinazione d…
Representative Results
Figura 1: Esempi di risultati di segmentazione macro inappropriati. Immagini dei risultati dopo aver eseguono “Drosophila NMJ Morphometrics” o “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Parti del terminale sinaptico non sono incluse nel contorno giallo (A). Parti dello sfondo sono incluse nel terminale sinaptico dal contorno giallo (B). La linea dello scheletro blu si estend…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
