Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto

MCAO Rat Modello Preparativi prechirurgica Una tecnica asettica deve essere utilizzato per tutte le procedure chirurgiche sopravvivenza. Disinfettare la superficie di lavoro con disinfettante chirurgico commerciali e preparare confezioni sterili di strumenti chirurgici, tendaggi, garze, tamponi, suture e lame di bisturi in autoclave. Una mascherina chirurgica, cofano capelli e guanti sterili devono essere indossati. Un Germinator secco tallone sterilizzatore è anche usato per sterilizzare gli strumenti chirurgici tra le procedure di se ambulatori topo più sarà fatto durante una sessione. Preriscaldare un acqua con camicia coperta homeothermic e posto sotto un tampone assorbente in modo da prevenire l'ipotermia del ratto durante l'intervento chirurgico. Luogo ratto spontaneamente iperteso (o ceppo ratto altro mezzo a scelta) in una camera di induzione e di indurre l'anestesia con il 5% isoflurano (macchina per anestesia deve essere impostato a 1,0 L / min O 2 e 1,0 L / min N 2 O). Inferiore al 1-2% isoflurano per mantenere l'anestesia. Applicare Artificial Tears unguento in entrambi gli occhi. Radersi la gola e regione del collo sinistro al di là del sito di incisione prospettico con tagliaunghie (Oster A5 con lama # 10). Applicare Betadine a una garza e disinfettare la pelle partendo dal centro della regione chirurgici, a spirale verso l'esterno. Risciacquare con garza sterile contenente etanolo al 70%, passando pad in un modello simile. Ripetere i due passaggi per un totale di tre cicli. Iniettare 0,2 ml di bupivacaina 0,5% per via sottocutanea lungo il sito di incisione futuri. Ratto posto in stockinette sterile o coprire con una garza sterile chirurgico. Occlusione transitoria di MCA Sotto un microscopio operatorio, una incisione mediana ventrale viene eseguita e la fascia superficiale è sezionato. Sotto la fascia superficiale, non c'è tessuto ghiandolare ai muscoli a sinistra e tre che formano un triangolo: la sterno, che si trova sulla linea mediana della trachea, il digastrico (facilmente identificabile con le sue lucide parte bianca tendinee) e, infine, il muscolo sternocleidomastoideo. Attenta dissezione tagliente e smussa viene effettuata all'interno del triangolo di identificare l'arteria carotidea (esclusivo dissezione può essere preferito da alcuni per minimizzare i danni accidentali dei tessuti). Le arterie esterni, interni e carotide comune (ECA, ICA, CCA) sono esposti. L'arteria carotide è grande e visibilmente impulsi. Il nervo vago è visto che scorre lungo la superficie laterale di entrambe le arterie carotide comune e interna, ed è nettamente sezionato fuori dal comune e arterie della carotide interna. Due rami della Corte dei conti sono poi sezionati nettamente, il primo ramo voce medialmente e il secondo ramo voce lateralmente. Entrambi i rami sono cauterizzato e tagliate, che consente una maggiore facilità nel mobilitare le navi più grandi. L'ECA è ora sezionato più rostralmente. L'osso ioide si possono incontrare e questo limiterà l'estensione della dissezione rostrale. L'arteria carotide esterna è legato fuori come distalmente possibile con una sutura di seta 6-0. Un altro 6-0 sutura seta è posto liberamente intorno alla Corte dei conti nei pressi della biforcazione con la ICA. Fare attenzione a non occludere il vaso, come la sutura intraluminale da utilizzare per l'occlusione andranno di qui a un passaggio successivo. Clip microchirurgia sono posti sulle arterie carotide comune e interna vicino alla biforcazione. Un arteriotomia iniziale parziale si crea tra i due cravatte di seta di sutura sulla carotide esterna. Introdurre un 2,2 -3,0 cm di lunghezza di sutura 4-0 nylon monofilo, con un 2,0 cm kink dalla sua arrotondati, siliconato punta, nel lume della Corte dei conti verso il CCA in cui si trova la clip microchirurgico. Questi punti di sutura sono disponibili in commercio (Doccol Corp., Redlands, California, USA). Tagliate la parte restante della Corte dei conti (presso il sito del arteriotomia parziale) per liberare il tronco e la posizione del moncone di sotto della biforcazione della Corte dei conti e ICA, questo sarà più facilmente permettere la sutura intraluminale di scivolare nella ICA. Stringere la sutura di seta intorno al ceppo della Corte dei conti per assicurare la sutura intraluminale nylon e prevenire le emorragie, e quindi rimuovere la clip microvascolare dalla ICA. Aprire il clip prima di rimuoverla per controllare il sanguinamento. Continuare ad avanzare la sutura di nylon dalla Corte dei conti a lume di ICA l'arteria cerebrale media (MCA). Questa lunghezza è tipicamente 18-20 mm ed è la ragione per l'immissione una piegatura nella sutura prima dell'inserimento. Dopo un intervallo variabile della sutura in nylon è inserita, la resistenza può essere sentito. Se questo si verifica con gran parte della sutura in nylon ancora presenti al di fuori della nave, indica che la sutura è probabile che entrano l'arteria pterigopalatina (vedi nota sotto). Tirare indietro la sutura e la curva un po 'di proseguire lungo la ICA, che si svolgerà più medialmente. Inoltre, la dissezione delle origini della PPA può essere fatto per visualizzare meglio il percorsodel filamento intraluminale. Continuare a inserire la sutura in nylon fino ad avvertire resistenza durante e dopo la posizione di 2 centimetri piegato. A questo punto, la sutura intraluminale ha bloccato l'origine del MCA. MCA occlusione può essere confermato attraverso il monitoraggio della riduzione del flusso ematico cerebrale regionale mediante un misuratore laser Doppler (vedi tabella Materiali per una sorgente attrezzature). Si noti inoltre che l'origine dell'arteria pterigopalatina off della ICA può essere direttamente legato al largo, se si preferisce, al fine di evitare l'intubazione accidentale di questa nave con la sutura intraluminale. Avviare il timer e occlusione tempo di record di avvio. Rimuovere il microclip dal CCA. Chiudere l'incisione (derma, pannicolo carnosus, strati di tessuto sottocutaneo) rapidamente con 3-0 sutura seta (un semplice modello continuo faciliterà la riapertura di riperfusione) e con attenzione luogo il topo in una gabbia di recupero. Controllare che il pavimento della gabbia intorno al naso e la bocca sono privi di lettiera e di recupero monitor da anestesia. Ripristino del flusso sanguigno MCA (riperfusione) Poco prima del periodo di occlusione dovrebbe terminare, ri-anestetizzare il topo, disinfettare il sito di incisione con Betadine e il 70% di etanolo (3 cicli, come prima) e riaprire l'incisione, eliminando i punti di sutura di chiusura. Posizionare un microclip sul CCA, come prima. Ritirare la sutura occlude parzialmente dalla ICA, fino alla fine sutura è visibile attraverso l'ICA. NON rimuovere completamente la sutura dalla ICA / Corte dei conti! Posizionare un microclip sul ICA sopra l'estremità della sutura intraluminale. Rimuovere completamente la sutura occlusione e strettamente legare il moncherino della Corte dei conti. Fine record di occlusione (inizio riperfusione) tempo. Rimuovere il microclip dalla ICA. Rimuovere il microclip dal CCA. Inumidire la regione con alcune gocce di soluzione fisiologica sterile e chiudere gli strati incisione (derma, pannicolo carnosus, tessuto sottocutaneo) con 3-0 sutura in seta con un semplice schema interrotto. Somministrare 0,05 mg / kg buprenorfina (o altro adeguato analgesico post-operatorio dopo le vostre linee guida istituzionali) nello spazio peritoneale. Preriscaldata iniettare 5 cc di soluzione fisiologica per via intraperitoneale. Ciò fornirà l'idratazione durante la fase di recupero. Monitorare il recupero di ratto dall'anestesia. Dopo il ratto ha recuperato, test per l'indicazione del comportamento di infarto tenendo il topo per la coda e osservando se il topo può girare su entrambi i lati. Leggendo solo da una parte ci si aspetta. Scale di punteggio semplice può essere usato per registrare iniziale post-infartuale funzionamento Behavorial (vedi Discussione). Ulteriori iniezioni di buprenorfina (dosaggio come sopra) dovrebbe essere data ogni 6 a 8 ore per 24 ore di sollievo dal dolore. Estendere l'analgesia se l'animale sta mostrando segni di disagio. Rappresentante Risultati Figura 1. Occlusione dell'arteria cerebrale media di sutura endovascolare. Uno schema semplificato del sistema circolatorio craniale del ratto è mostrato con un siliconato sutura intraluminale occludere l'origine della MCA. L'OA e rami ST off della Corte dei conti sinistra sono stati legati e un pareggio sutura intorno al ceppo della Corte dei conti tiene la sutura intraluminale in posizione. ACA, dell'arteria cerebrale anteriore, BA, arteria basilare; CCA, arteria carotide comune, della Corte dei conti, arteria carotide esterna, ICA, arteria carotide interna, MCA, arteria cerebrale media, OA, arteria occipitale; PCA, cerebrale posteriore; PComA, comunicante posteriore arteria, PPA, arteria pterigopalatina, ST, arteria tiroidea superiore. Figura adattata da Sasaki et al. 4 e Lee 3. Figura 2. Rappresentante di imaging a risonanza magnetica di sezioni coronali di cervello di ratto 24 ore dopo 1 ora MCAO transitori. Edema cerebrale che accompagnano l'ischemia focale viene visualizzato nelle immagini MRI pesata in T2. La zona dell'infarto appare iperintensa (chiaro) sulle immagini T2. Modelli di infarto simile può essere visto con tecniche più avanzate come la risonanza magnetica per immagini pesata in diffusione e coefficiente di diffusione apparente mappatura 5. Figura 3. Rappresentante sezioni coronali di cervello di ratto colorati con TTC 24 ore dopo 1 ora MCAO transitori. Colorazione TTC rivela bianco (senza macchia) infartuata regioni della corteccia cerebrale e striato nel ratto come quello mostrato nella Figura 2. Si noti che il modello generale di lesioni focali ischemiche è simile a quello visto nel MRI-T2 pesate, anche se l'area infartuale finale definito istologicamente può essere leggermente più piccola della lesione T2.