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Evaluación de la ubiquitilación del sustrato por E3 Ubiquitina-ligasa en lisados de células de mamíferos
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Evaluación de la ubiquitilación del sustrato por E3 Ubiquitina-ligasa en lisados de células de mamíferos
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May 10, 2022
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Proporcionamos un protocolo detallado para un ensayo de ubiquitilación de un sustrato específico y una ubiquitina ligasa E3 en células de mamíferos. Se utilizaron líneas celulares HEK293T para la sobreexpresión de proteínas, el sustrato poliubiquitilado se purificó a partir de lisados celulares por inmunoprecipitación y se resolvió en SDS-PAGE. Se utilizó immunoblotting para visualizar esta modificación post-traduccional.
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Keyword Extraction:Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
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dos Passos, P. M. S., Spagnol, V., de Correia, C. R., Teixeira, F. R. Evaluation of Substrate Ubiquitylation by E3 Ubiquitin-ligase in Mammalian Cell Lysates. J. Vis. Exp. (183), e63561, doi:10.3791/63561 (2022).
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