쥐 비장 조직 형성을 조사하기 위한 Basement Membrane Matrix Encapsulated Cell Aggregation

비장의 외상성 파열과 신체에 다발성 비장 결절의 출현은 비장 조직이 재생 능력을 가지고 있다는 첫 번째 징후^{중 하나였습니다 1,2}. 이후 응급 비장 절제술이 필요한 환자의 비장 조직을 보존하기 위해 비장 자가이식술이 임상에 도입되었다³. 그러나 수십 년 동안 임상 진료의 일부였음에도 불구하고 비장이 어떻게 재생되는지에 대해서는 알려진 바가 거의 없습니다. 동물 이식 모델은 비장 재생 및 면역 기능의 여러 매개변수에 대한 통찰력을 제공했습니다 ^4,5. 특히, 이식편 전처리 방법에 대한 실험적 변형을 통해 조직 재생을 세포 및 분자 수준에서 더 자세히 연구할 수 있게 되었습니다.

전체 비장 절편을 포함하는 이식은 새로운 비장 구조가 재건되기 전에 대량 괴사 단계를 거친다⁶. 이식편 괴사의 초기 단계는 이식된 조직의 대부분이 적혈구와 백혈구로 구성되어 있으며 비장 재생에 필요하지 않다는 것을 시사합니다. 이것은 쥐 신장 캡슐 아래에 이식하기 전에 비장 이식편에서 조혈 세포를 배제하여 실험적으로 조사되었습니다. 여기서, 기질 및 내피 세포를 포함하는 비장의 비-백혈구/비-적혈구 분획은 새로운 조직 형성을 유도하기에 충분한 것으로 나타났다⁷. 비장 기질 조직은 단일 세포 현탁액으로 추가 처리될 수 있어 세포 분류 기술을 사용하여 세포 이식편 조성을 조작할 수 있습니다. 후보 세포 유형을 선택적으로 제거함으로써 이식편 발달에 필수적인 두 개의 CD45-TER-119^– 기질 세포 집단, 즉 내피 유사 CD31⁺CD105⁺MAdCAM-1⁺ 세포 집단과 보다 광범위하게 정의된 PDGFRβ⁺ 중간엽 세포 집단⁸을 식별했습니다.

비장 세포에서 이식편을 만드는 것은 지지 재료와 세포 로딩 과정 측면에서 다양합니다. 조직 공학적 비장은 이전에 비장 단위를 폴리글리콜산/폴리-L 젖산 중합체 스캐폴드 ^5,9에 로딩하여 제조되었습니다. 흥미롭게도, 콜라겐 스펀지에 흡수된 비장 기질 세포는 생착에 실패한 반면, 콜라겐 시트 위에 응집되어 로드된 기질 세포는 비장 재생을 촉진했다⁸. Matrigel 매트릭스 내부의 비장 기질 세포의 재부유는 또한 3차원 배양 조건 하에서 세포 응집을 유도하는 것으로 입증되었다¹⁰. 그러나 이 방법은 이식 모델에 사용하기 위해 테스트되지 않았습니다. 현재 프로토콜의 전반적인 목표는 기저막 매트릭스 내에서 직접 비장 기질 세포를 강제로 응집하고 캡슐화하는 것이며, 이후 3차원 체외 조직 배양 시스템으로 옮기거나 동물 모델 이식을 위한 수단으로 사용할 수 있습니다(보충 그림 1).