हम ज़ेब्राफिश भ्रूण कंपन चौंका प्रतिक्रिया के आधार पर रासायनिक यौगिक विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए एक स्क्रीनिंग सिस्टम के वर्कफ़्लो और डेटा विश्लेषण का वर्णन करते हैं। प्रणाली एक कंपन उत्तेजना के संपर्क में आने पर जेब्राफिश भ्रूण के आंदोलनों को रिकॉर्ड करती है और सामान्य विषाक्तता / घातकता और न्यूरोमस्कुलर विषाक्तता के एकीकृत मूल्यांकन की अनुमति देती है।
हमने ज़ेब्राफिश भ्रूण में न्यूरोमस्कुलर और सामान्य विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए एक सरल स्क्रीनिंग प्रणाली विकसित की है। मॉड्यूलर प्रणाली में इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर होते हैं जिनके ऊपर भ्रूण के साथ टिशू कल्चर व्यंजन रखे जा सकते हैं। ऐसे कई लाउडस्पीकर-टिशू कल्चर डिश जोड़े को जोड़ा जा सकता है। इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर द्वारा उत्पन्न कंपन उत्तेजनाएं भ्रूण में एक विशेषता स्टार्टल और एस्केप प्रतिक्रिया को प्रेरित करती हैं। एक बेल्ट चालित रैखिक ड्राइव क्रमिक रूप से भ्रूण के आंदोलन को रिकॉर्ड करने के लिए प्रत्येक लाउडस्पीकर के ऊपर एक कैमरा रखता है। इस तरह, रासायनिक यौगिकों की घातकता या न्यूरोमस्कुलर विषाक्तता के कारण चौंका देने वाली प्रतिक्रिया में परिवर्तन की कल्पना और मात्रा निर्धारित की जा सकती है। हम इस प्रणाली का उपयोग करके रासायनिक यौगिक स्क्रीनिंग के लिए वर्कफ़्लो का एक उदाहरण प्रस्तुत करते हैं, जिसमें भ्रूण और उपचार समाधान तैयार करना, रिकॉर्डिंग सिस्टम का संचालन और परख में सक्रिय यौगिकों के बेंचमार्क एकाग्रता मूल्यों की गणना करने के लिए डेटा विश्लेषण शामिल है। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सरल घटकों पर आधारित मॉड्यूलर असेंबली इस प्रणाली को विशेष प्रयोगशाला सेटअप और स्क्रीनिंग उद्देश्यों की जरूरतों के लिए किफायती और लचीले ढंग से अनुकूल बनाती है।
हाल के वर्षों में, ज़ेब्राफिश रासायनिक यौगिक प्रभावों के मूल्यांकन के लिए अत्यधिक लोकप्रिय मॉडल जीव बन गए हैं, जिसमें दवा विकास से पर्यावरण विष विज्ञान1 तक अनुसंधान क्षेत्र शामिल हैं। कशेरुक के रूप में, ज़ेब्राफिशउनके आनुवंशिक श्रृंगार और मनुष्यों 2,3 के साथ समग्र शरीर विज्ञान के कई पहलुओं को साझा. इसलिए, इस मॉडल में प्राप्त परिणाम अक्सर मानव स्वास्थ्य के लिए सीधे प्रासंगिक होते हैं। वर्तमान में नैदानिक परीक्षणों में कई दवा उम्मीदवारों को जेब्राफिश4 का उपयोग करके यौगिक स्क्रीन में पहचाना गया है।
विषाक्तता मूल्यांकन एक प्रमुख अनुप्रयोग है जहां ज़ेब्राफिश भ्रूण चरणों का उपयोग करके परीक्षण रुचि रखते हैं। आर्थिक सहयोग और विकास के लिए विभिन्न संगठन (ओईसीडी) परीक्षण दिशानिर्देश पर्यावरण विषाक्ततापरीक्षण 5,6 में जेब्राफिश के उपयोग के लिए मौजूद हैं। छोटे आकार और ज़ेब्राफिश भ्रूण का तेजी से विकास उन्हें मध्यम से उच्च थ्रूपुटपैमाने 1,3,4 पर स्क्रीनिंग दृष्टिकोण के लिए अत्यधिक उपयुक्त बनाता है। इस तरह के स्क्रीन द्वारा लक्षित विष संबंधी समापन बिंदुओं भ्रूण विकृतियों और घातकता7, अंतःस्रावी व्यवधान8, अंग विषाक्तता9, और तंत्रिका विषाक्तता10,11 के संकेत व्यवहार आकलन शामिल हैं. व्यवहार परख संभव है क्योंकि ज़ेब्राफिश भ्रूण विकास के अपने चरण के आधार पर विभिन्न उत्तेजनाओं के लिए विभिन्न प्रकार की हरकत प्रतिक्रियाएं दिखाते हैं। उदाहरण के लिए, 1 दिन पोस्ट निषेचन (डीपीएफ) भ्रूण सहज पूंछcoiling 12 दिखाने के लिए और आंदोलनों का एक ठेठ अनुक्रम के साथ प्रकाश दालों का एक अनुक्रम का जवाब, तथाकथित फोटोमोटर प्रतिक्रिया (पीएमआर)10. हैचिंग के बाद, आमतौर पर निषेचन (एचपीएफ) के बाद 48-72 घंटे के आसपास होने वाली, स्वतंत्र रूप से तैरने वाले एलुथेरोएम्ब्रायो13 धीरे-धीरे 4 डीपीएफ14 के आसपास शुरू होने वाली कंपन उत्तेजनाओं के लिए चौंका देने और प्रतिक्रियाओं से बचने का विकास करते हैं। इन प्रतिक्रियाओं को उत्तेजना की दिशा (तथाकथित सी-मोड़ या सी-स्टार्ट) के विपरीत दिशा में एक विशिष्ट मोड़ की विशेषता है, जिसके बाद एक छोटा काउंटर मोड़ और तैराकी व्यवहार 14,15,16,17होता है। विशेष रूप से, भ्रूण के व्यवहार विभिन्न न्यूरोट्रांसमीटर प्रणालियों का उपयोग करके तंत्रिका सर्किट द्वारा शासित होते हैं, जिससे इन प्रणालियों को लक्षित करने वाले रासायनिक यौगिक प्रभावों की जांच करने की अनुमति मिलती है। उदाहरण के लिए, पीएमआर परख कोलीनर्जिक, एड्रीनर्जिक, और डोपामिनर्जिक सिग्नलिंग10 के साथ हस्तक्षेप यौगिकों के प्रभाव का पता चला, जबकि चौंका प्रतिक्रिया कोलीनर्जिक, ग्लूटामेटेरिजिक, और glycinergic न्यूरॉन्स 16,18 शामिल है. इसके अलावा, यौगिकों है कि मांसपेशियों या न्यूरो पेशी इंटरफ़ेस को नुकसान भी इन व्यवहारों को प्रभावित करेगा, के रूप में यौगिकों आंतरिक कान / पार्श्व रेखा बाल कोशिकाओं19,20 के लिए विषाक्त होगा. एक उत्तेजना के जवाब में जेब्राफिश लोकोमोटर व्यवहार का अवलोकन करना इस प्रकार न केवल न्यूरोटॉक्सिसिटी बल्कि समान रूप से ओटोटॉक्सिसिटी और मायोटॉक्सिसिटी का आकलन करने का एक उपयुक्त साधन है। स्कोरिंग लोकोमोटर व्यवहार भी सामान्य विषाक्तता / घातकता मूल्यांकन के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में कार्य करता है क्योंकि मृत भ्रूण नहीं चलते हैं। इस प्रकार, भ्रूण हरकत व्यवहार एक प्रथम स्तरीय विषाक्तता स्क्रीनिंग दृष्टिकोण के लिए एक एकीकृत रीडआउट का प्रतिनिधित्व करते हैं, जो एक सेटअप में घातक और न्यूरोमस्कुलर यौगिक प्रभाव को इंगित करता है। यह देखते हुए कि eleutheroembryos पहले से ही यौगिकों metabolizing करने में सक्षम हैं, दृष्टिकोण भी चयापचय परिवर्तन उत्पादों 7,21,22 के प्रभाव का पता लगा सकते हैं. महत्वपूर्ण बात, जेब्राफिश भ्रूण 120 एचपीएफ13 के बाद मुक्त खिला के चरण तक कुछ पशु संरक्षण कानूनों के तहत संरक्षित जीवन चरण के रूप में नहीं माना जाता है. इसलिए, उन्हें पशु विषाक्तता परीक्षण के विकल्प के रूप में माना जाता है।
चित्र 1: कंपन चौंका प्रतिक्रिया प्रणाली सेटअप। (ए) सिस्टम का अवलोकन। परीक्षण यौगिकों के संपर्क में भ्रूण के साथ प्लेट्स इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर सरणी (“लाउडस्पीकर”) पर रखा जाता है। कैमरा क्रमिक रूप से बेल्ट चालित रैखिक ड्राइव द्वारा लक्षित ट्रांसड्यूसर के ऊपर रिकॉर्डिंग स्थिति में ले जाया जाता है। (बी) शीर्ष पर डाली गई टिशू कल्चर डिश के साथ ट्रांसड्यूसर/लाउडस्पीकर का विस्तृत दृश्य। प्लेटों को 4000-5000 लक्स पर एक एलईडी लाइट शीट द्वारा नीचे से रोशन किया जाता है। स्पीकर के बगल में एक एलईडी लाइट रोशनी करती है जबकि उत्तेजना दी जाती है। (सी)भ्रूण की उत्तेजना पर कैमरे द्वारा रिकॉर्ड किए गए वीडियो की अभी भी छवि। (डी) कॉन्फ़िगरेशन फ़ाइल का स्क्रीनशॉट। (ई) रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर इंटरफेस का स्क्रीनशॉट। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
यहां, हम एक टिशू कल्चर डिश23 में कई स्वतंत्र रूप से चलती भ्रूण की एक स्वचालित वीडियो रिकॉर्डिंग के साथ युग्मित इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर द्वारा उत्पन्न कंपन उत्तेजनाओं के आधार पर एक इन-हाउस बिल्ड सरल परीक्षण डिवाइस का उपयोग करके कंपन स्टार्टल प्रतिक्रिया पर यौगिक प्रभावों के मूल्यांकन के लिए एक परीक्षण प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। प्रणाली मॉड्यूलर है और समानांतर में कई टिशू कल्चर व्यंजन से अनुक्रमिक रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है. वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले सेटअप में, पांच इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर टिशू कल्चर व्यंजन के लिए एक कंपन उत्तेजना (500 हर्ट्ज, अवधि 1 एमएस) प्रदान करते हैं जिसमें उनके ऊपर रखे 20 भ्रूण होते हैं (चित्र 1)। प्लेटों को एलईडी लाइट शीट के साथ 4000-5000 लक्स पर नीचे से रोशन किया जाता है। प्रत्येक ट्रांसड्यूसर के बगल में एक एलईडी लाइट उत्तेजना आवेदन की अवधि को इंगित करता है, और एक आस्टसीलस्कप तरंगों और लागू उत्तेजना की आवृत्ति को इंगित करता है (विवरण के लिए, रेफरी 23 देखें)। भ्रूण का व्यवहार एक उच्च गति वाले कैमरे (सामग्री की तालिका) द्वारा 1000 फ्रेम प्रति सेकंड (एफपीएस) पर दर्ज किया जाता है, जिसे बेल्ट-चालित रैखिक ड्राइव द्वारा लक्षित स्पीकर से ऊपर ले जाया जाता है। इस रिकॉर्डिंग गति मज़बूती से चौंका प्रतिक्रिया को हल करने के लिए आवश्यक है. प्रणाली वर्तमान वाणिज्यिक प्रणालियों के लिए कम लागत वाली, व्यक्तिगत रूप से अनुकूलनीय विकल्प प्रदान करती है। नीचे विस्तृत सटीक वर्कफ़्लो वर्तमान में प्रेसिजन विष विज्ञान पहल24 के ढांचे में किया जाता है ताकि विषाक्त पदार्थों के चयनित सेट के साथ इलाज किए गए ज़ेब्राफिश भ्रूण से ओएमआईसीएस डेटा अधिग्रहण के लिए उपयुक्त जोखिम की स्थिति निर्धारित की जा सके।
हम एक कस्टम-निर्मित जेब्राफिश भ्रूण कंपन चौंका परख सेटअप का उपयोग करके रासायनिक यौगिक मूल्यांकन के लिए वर्कफ़्लो और डेटा विश्लेषण प्रस्तुत करते हैं। वर्कफ़्लो मजबूत डेटा उत्पन्न करता है जो यौगिक विषाक्तता को निर्दिष्ट करने वाले विशिष्ट मापदंडों की गणना की अनुमति देता है, जैसे बेंचमार्क एकाग्रता / खुराक (बीएमसी / बीएमडी)। सेटअप की प्रतिरूपकता थ्रूपुट और अंतरिक्ष आवश्यकताओं के लिए विभिन्न आवश्यकताओं के अनुकूलन की अनुमति देती है। चूंकि सिस्टम कम लागत वाले बेसल घटकों से बना है, अपेक्षाकृत सरल सेटअप के बाद, यह मौजूदा वाणिज्यिक प्रणालियों के लिए एक सस्ता विकल्प प्रदान करता है, जो आम तौर पर एक साथ कई परख प्रकारों के लिए डिज़ाइन किए जाते हैं, मालिकाना सॉफ्टवेयर पर भरोसा करते हैं, और अपेक्षाकृत महंगे रहते हैं।
इन दोनों वाणिज्यिक प्रणालियों और अन्य कस्टम-निर्मित सिस्टम मल्टीवेल प्लेटों में एकल भ्रूण या लार्वा के आकलन की अनुमति देते हैं (जैसे, 12-अच्छी तरह से34, 16-अच्छी तरह से32,35, 24-अच्छी तरह से 20,33,36, 48-अच्छी तरह से 37, 96-अच्छी तरह से 38,39,40,41,42 और यहां तक कि 384-अच्छी तरह से [4×96 अच्छी तरह से]43), लेकिन कुओं में स्थानिक प्रतिबंध भागने की प्रतिक्रिया (जैसे, दूरी की यात्रा) के कुछ डेटा मापदंडों के विश्लेषण को और अधिक चुनौतीपूर्ण बनाता है। इसके अलावा, इन सेटअपों में से कुछ में, इमेजिंग थाली के कुओं के एक सबसेट के लिए प्रतिबंधित है, थ्रूपुट36,39 को कम करने. व्यंजनों में इमेजिंग भ्रूण भागने प्रतिक्रिया मापदंडों के बेहतर मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है और एक बार में कई भ्रूणों के व्यवहार रिकॉर्डिंग सक्षम बनाता है (उदाहरण के लिए, एक 6 सेमी पकवान में 30 तक). आमतौर पर, डिश-आधारित इमेजिंग प्रति रन 44,45,46,47,48 प्रति डिश तक सीमित होती है (अपवाद 6 व्यंजनों पर समानांतर में इमेजिंग करते हैं, जिसमें एक लार्वा प्रत्येक49 या 2 विभाजित व्यंजन50 में 4 लार्वा होते हैं), एक खामी जिसे समानांतर डिजाइनों द्वारा हल किया जा सकता है जैसे कि हमारे मामले में। हमने इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली प्रणाली की कुछ विशेषताओं और तालिका 2 20,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43 में अन्य वाणिज्यिक और कस्टम-निर्मित समाधानों को संक्षेप में प्रस्तुत किया है, 44,45,46,47,48,49,50,
51,52.
विधि का एक फायदा घातकता और व्यवहार परिवर्तन दोनों को कैप्चर करने वाला एक रीडआउट है, जो विषाक्तता आकलन के प्रदर्शन को बढ़ा सकता है। उदाहरण के लिए, जबकि जेब्राफिश मछली भ्रूण तीव्र विषाक्तता परीक्षण (एफईटी)5 वयस्क मछली तीव्र विषाक्तता परीक्षण53 में विषाक्तता की भविष्यवाणी करने के लिए दिखाया गया है, इसकी भविष्यवाणी सटीकता व्यवहार रीडआउट54 सहित सुधार किया गया था। इसका कारण मछली भ्रूण में देखे जाने वाले न्यूरोएक्टिव यौगिकों द्वारा प्रेरित कमजोर मृत्यु दर है, संभवतः श्वसन विफलता सिंड्रोम की कमी के कारण किशोर या वयस्क मछली में विषाक्तता बढ़ जाती है। हालांकि, व्यवहार के आकलन से न्यूरोएक्टिविटी की पहचान की जा सकती है। इसके अलावा, व्यवहार रीडआउट मायोटॉक्सिक और ओटोटॉक्सिक प्रभावों के साथ-साथ शरीर विज्ञान पर अन्य, अधिक सूक्ष्म विषाक्त प्रभावों को भी पकड़ सकते हैं, जो कि सबलेथल हैं फिर भी जीव के व्यवहार प्रदर्शन को प्रभावित करते हैं।
परख का संचालन करते समय, यौगिकों की उचित हैंडलिंग सुनिश्चित करने के साथ-साथ ज़ेब्राफिश भ्रूण के एक समरूप रूप रूप से विकासशील बैच का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। इस प्रकार, यौगिक भंडारण के लिए कांच की शीशियों का उपयोग प्लास्टिक सामग्री के अवशोषण के कारण रसायनों, विशेष रूप से हाइड्रोफोबिक यौगिकों की सांद्रता में गिरावट को कम करना चाहिए। “प्लास्टिक” पॉलीस्टाइनिन के लिए उच्च अवशोषक क्षमता के यौगिकों के मामले में, ग्लास प्लेटों का उपयोग इनक्यूबेशन के लिए भी किया जा सकता है। मृत भ्रूणों के संग्रह और हटाने के लिए उपयोग किए जाने वाले टिशू कल्चर व्यंजनों में अंडों की सफाई मानक विकास सुनिश्चित करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। विकास की सामान्य गति महत्वपूर्ण है, क्योंकि विकासात्मक देरी मूल्यांकन किए गए व्यवहार 14,33के अंतर्निहित तंत्रिका नेटवर्क की परिपक्वता को प्रभावित कर सकती है। इसके अलावा, यौगिक प्रभाव की तुलना को सक्षम करने के लिए, अंडे एक ही तनाव से प्राप्त किया जाना चाहिए क्योंकि विभिन्न उपभेदों अलग व्यवहार प्रोफाइल 38,55,56,57पेश करने के लिए सूचित किया गया है. एक्सपोजर के दौरान, E3 माध्यम के अत्यधिक वाष्पीकरण से बचने के लिए एक आर्द्र कक्ष में भ्रूण को इनक्यूबेट करना महत्वपूर्ण है, जो परीक्षण की गई सांद्रता को बदल देगा।
परीक्षण श्रृंखला में उपयोग किए जाने वाले भ्रूण के विशेष बैच के आधारभूत प्रतिक्रिया स्तर को निर्धारित करने के लिए ई 3 नियंत्रण को प्रत्येक रन में शामिल किया जाना चाहिए। आमतौर पर, हम 5 मापों के प्रत्येक सेट के साथ नियंत्रण की एक प्लेट चलाते हैं। जैसा कि चित्रा 2 डी में दिखाया गया है, यह दृष्टिकोण विलंबित विकास के कारण या आनुवंशिक पृष्ठभूमि प्रभाव जैसे अन्य कारणों से उप-इष्टतम प्रतिक्रियाओं के साथ बैचों का पता लगाने की भी अनुमति देता है। उत्तेजना के प्रति प्रतिक्रिया की अप्रत्याशित कमी के मामले में, संभावित ट्रांसड्यूसर विफलता के लिए भी देखें। आमतौर पर, चौंका देने वाली प्रतिक्रियाएं एक सिग्मोइडल एकाग्रता-प्रतिक्रिया व्यवहार दिखाती हैं जो लॉग-लॉजिस्टिक मॉडल का उपयोग करके वक्र फिटिंग की अनुमति देती है। हालांकि, द्विध्रुवीय प्रतिक्रियाओं के साथ दुर्लभ मामलों में, अन्य मॉडलों को नियोजित करना पड़ सकता है, जैसे कि गाऊसी या सीडरग्रीन मॉडल। वे आर पैकेज डीआरसी और बीडीएम27,28 के भीतर उपलब्ध हैं।
कंपन उत्तेजना के लिए प्रतिक्रिया की कमी बस सामान्य साइटोटॉक्सिसिटी के कारण भ्रूण या गंभीर रूप से बिगड़ा जीवन कार्यों की मृत्यु का संकेत हो सकता है, लेकिन यह भी उत्तेजना धारणा, एकीकरण, और हरकत उत्पादन के तंत्रिका सर्किट को लक्षित अधिक विशिष्ट विषाक्तता को प्रतिबिंबित कर सकते हैं. अन्य संभावित यौगिक प्रभाव न्यूरोमस्कुलर इंटरफ़ेस या मांसपेशियों की संरचना और कार्य के साथ हस्तक्षेप हैं। इन संभावनाओं के बीच अंतर करने के लिए, आगे परख आवश्यक हैं। उदाहरण के लिए, मांसपेशियों की संरचनात्मक अखंडता का मूल्यांकन एक बायरफ्रिंटेंसी परख58,59 के साथ किया जा सकता है, और ट्रांसजेनिक लाइनें मांसपेशियों और तंत्रिका समारोह60,61की गड़बड़ी का आकलन करने के लिए उपलब्ध हैं। हालांकि, रिकॉर्ड किए गए वीडियो डेटा पहले से ही आकृति विज्ञान के अधिक विस्तृत विश्लेषण और भ्रूण की व्यवहार प्रतिक्रिया के लिए अनुमति देते हैं जो पहले अतिरिक्त जानकारी प्रदान कर सकते हैं। क्या केवल सी-मोड़ बिगड़ा हुआ है, या सभी गतिशीलता? क्या अभी भी न्यूरोमस्कुलर गतिविधि के अवशेष मौजूद हैं, जैसा कि कमजोर या कांपने वाली पूंछ आंदोलनों से संकेत मिलता है? क्या इस तरह के परिवर्तित व्यवहार आकृति विज्ञान में परिवर्तन के साथ जाते हैं, जैसे एडिमा या शरीर की वक्रता में वृद्धि? इसके अतिरिक्त, सी-मोड़ तक विलंबता समय या भागने की प्रतिक्रिया के दौरान तय की गई दूरी जैसे मापदंडों का मूल्यांकन किया जा सकता है (देखें, उदाहरण के लिए, रेफरी 44)।
यहां वर्णित स्क्रीनिंग प्रोटोकॉल तेजी से और मजबूत यौगिक विषाक्तता मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है, विशेष रूप से गैर-घातक न्यूरोटॉक्सिक, ओटोटॉक्सिक और मायोटॉक्सिक यौगिकों का पता लगाने के अतिरिक्त मूल्य के साथ। प्रदान किए गए विश्लेषण वर्कफ़्लो को लागू करना आसान है और एक मजबूत रीडआउट प्रदान करता है। कंपन स्टार्टल परख में उपयोग किए जाने वाले उत्तेजना प्रोटोकॉल के संशोधनों का उपयोग स्टार्टल व्यवहार के अधिक जटिल पहलुओं पर यौगिक प्रभावों को संबोधित करने के लिए किया गया है, जैसे कि प्रीपल्स निषेध (पीपीआई)39,44 और आदत32,33, और इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले इलेक्ट्रोडायनामिक ट्रांसड्यूसर-आधारित उत्तेजना सेटअप के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
चौंका प्रतिक्रिया आधारित स्क्रीनिंग सिस्टम का एक मुख्य अनुप्रयोग रासायनिक स्क्रीन, जो मानव विषाक्तता मूल्यांकन और दवा विकास 1,4,62 दोनों के लिए प्रासंगिकता की है में यौगिक प्रभाव का आकलन है. इसी समय, एक जलीय जीव के प्रारंभिक जीवन चरणों का परीक्षण करके, प्राप्त परिणामों में इकोटॉक्सिकोलॉजिकल जोखिम मूल्यांकन63,64के लिए प्रत्यक्ष प्रासंगिकता है। इसके अलावा, चौंका प्रतिक्रिया प्रणाली आनुवंशिक स्क्रीन 65,66,67,68,69 में व्यवहार phenotyping के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हमारी आसानी से लागू करने योग्य और अनुकूलनीय प्रणाली आवेदन के इन विभिन्न डोमेन में अपनी विशिष्ट स्क्रीनिंग परियोजनाओं का संचालन करने के इच्छुक छोटे प्रयोगशालाओं को एक किफायती सेटअप प्रदान करती है।
The authors have nothing to disclose.
हम IBCS-BIP मछली सुविधा और स्क्रीनिंग सेंटर में सहायक कर्मचारियों की उत्कृष्ट तकनीकी सहायता को धन्यवाद देते हैं। इस काम को यूरोपीय संघ के क्षितिज 2020 अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम से ग्रांट एग्रीमेंट नंबर 965406 (प्रिसिजनटॉक्स) के तहत धन प्राप्त हुआ है। यह आउटपुट केवल लेखकों के दृष्टिकोण को दर्शाता है, और यूरोपीय संघ को इसमें निहित जानकारी के किसी भी उपयोग के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता है।
Fine test sieves, Brass frame, pore size 250 μm | Sigma-Aldrich | Z289744-1EA | Or comparable material |
High-speed camera | XIMEA | MQ013MG-ON USB 3 | |
Laboratory Bottles, Narrow Neck, with Screw Cap | VWR | 215-3261 | Reference number for 50 mL, available up to 20 L. Or comparable material |
Pipette tip, working volume: 10 µL | SARSTEDT | 70.3010.210 | Or comparable material |
Pipette tip, working volume: 1000 µL | SARSTEDT | 70.3050.100 | Or comparable material |
Pipette tip, working volume: 20 µL | SARSTEDT | 70.3020.210 | Or comparable material |
Pipette tip, working volume: 200 µL | SARSTEDT | 70.3030.100 | Or comparable material |
Serological pipette 10 mL | SARSTEDT | 86.1254.001 | Or comparable material |
Serological pipette 25 mL | SARSTEDT | 86.1685.001 | Or comparable material |
Serological pipette 5 mL | SARSTEDT | 86.1253.001 | Or comparable material |
Tissue culture dish 60,0 mm/15,0 mm vented (Polystyrene) | Greiner bio-one | 628102 | Or comparable material |
Tissue culture dish 100, suspension (Polystyrene) | SARSTEDT | 83.3902.500 | Or comparable material |
Transfer pipette 6 mL | SARSTEDT | 86.1175 | Or comparable material |
Tube 15 mL 120 mm x 17 mm PP | SARSTEDT | 62.554.502 | Or comparable material |
Tube 50 mL 114mm x 28 mm PP | SARSTEDT | 62.5472.54 | Or comparable material |