Détection des anticorps antirabiques IgG et IgM à l’aide du test d’anticorps fluorescents indirects contre la rage
Summary
L’objectif de ce manuscrit est d’examiner l’utilisation du test d’anticorps fluorescents indirects contre la rage pour la détection des anticorps IgG et IgM spécifiques de la rage.
Abstract
Le test d’anticorps fluorescents indirects (IFA) contre la rage a été mis au point pour détecter divers isotypes d’anticorps spécifiques de la rage dans les sérums ou le liquide céphalo-rachidien. Ce test fournit des résultats rapides et peut être utilisé pour détecter les anticorps antirabiques dans plusieurs scénarios différents. Le test IFA de la rage est particulièrement utile pour la détection rapide et précoce des anticorps afin d’évaluer la réponse immunitaire chez un patient qui a développé la rage. Bien que d’autres méthodes de diagnostic de la rage ante-mortem aient la priorité, ce test peut être utilisé pour démontrer l’exposition récente au virus de la rage par la détection d’anticorps. Le test IFA ne fournit pas de titre d’anticorps neutralisant le virus (VNA), mais la réponse à la prophylaxie pré-exposition (PrEP) peut être évaluée par la présence d’anticorps positifs ou négatifs. Ce test peut être utilisé dans diverses situations et peut fournir des résultats pour un certain nombre de cibles différentes. Dans cette étude, nous avons utilisé plusieurs échantillons de sérum appariés provenant de personnes ayant reçu la PrEP et démontré leur présence d’anticorps antirabiques au fil du temps à l’aide du test IFA.
Introduction
Le test d’anticorps fluorescents indirects (IFA) antirabiques est utilisé pour détecter divers isotypes d’anticorps spécifiques de la rage dans le sérum ou le liquide céphalo-rachidien. Il fait partie d’un arsenal de tests disponibles pour le suivi d’un patient ante mortem de la rage. Il est particulièrement utile pour la détection précoce des anticorps afin d’évaluer la réponse immunitaire d’un patient à l’infection par la rage. Lorsqu’il est utilisé en conjonction avec d’autres tests, les antécédents et le statut vaccinal du patient, le test IFA peut aider à déterminer l’exposition au virus de la rage ou à un vaccin1. Comme le test IFA mesure les IgM et/ou les IgG, les valeurs de l’anticorps spécifique peuvent indiquer un laps de temps approximatif à partir de l’exposition à l’antigène1. Ce test peut être utile dans les applications répertoriées ou d’autres qui n’ont pas encore été explorées.
Il existe plusieurs tests sérologiques de la rage. Le test rapide d’inhibition de la focalisation fluorescente (RFFIT), le test de neutralisation du virus par anticorps fluorescents (FAVN) ou des modifications de ceux-ci sont les principales méthodes de mesure des anticorps neutralisants du virus de la rage (ARNV)1. Cependant, ces tests ne différencient pas les anticorps IgM et IgG. Lorsque la différenciation de l’isotype de l’anticorps est importante dans la surveillance de la réponse immunitaire de la rage, les tests IFA de la rage et ELISA (test immuno-enzymatique lié à la rage) sont utilisés, mais ils ne mesurent pas les ARNV. Bien que les tests IFA et ELISA puissent être utilisés pour déterminer la présence d’anticorps spécifiques de la rage dans un échantillon, il existe certaines différences dans la façon dont ils sont exécutés. Le test IFA utilise un virus vivant cultivé en cellule comme substrat antigène, alors qu’un test ELISA typique pour la détection de la rage utilise une ou plusieurs des protéines virales. Dans un laboratoire où le virus de la rage peut être cultivé, le test IFA peut être plus facile à effectuer au lieu d’acheter ou de cultiver des protéines virales individuelles pour le test ELISA. L’objectif du test et l’information recueillie à partir des résultats de tout test sérologique de la rage doivent être pris en compte pour déterminer lequel choisir2.
Les IgM sont les premières à réagir, augmentant jusqu’à ce que l’on observe un changement de classe vers le 28e jour, moment où les IgG deviennent l’anticorps circulant prédominant3. Par conséquent, on ne s’attendrait à ce que les IgM durent une période limitée après l’exposition au virus de la rage ou la vaccination. L’analyse du sérum et du liquide céphalorachidien (LCR) peut indiquer si l’exposition a été faite par la vaccination, dans laquelle les anticorps ne seraient visibles que dans les sérums, ou par une infection virale, qui montrerait potentiellement des anticorps dans le LCR1.
Il a été établi que les anticorps antirabiques persistent pendant plusieurs années après la prophylaxie pré-exposition (PrEP)4. Le test IFA peut être un outil utile pour le démontrer à différents moments après la vaccination ou l’exposition.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le test IFA tire parti d’un complexe antigène-anticorps, ce qui permet à un site de marquage de visualiser les anticorps spécifiques de la rage. Les cellules de neuroblastome ou BHK sont ensemencées sur des lames de microscope à plusieurs puits recouvertes de PTFE et inoculées avec la souche de laboratoire CVS-11 du virus de la rage. Une fois que la monocouche est confluente et que les cellules atteignent l’infectivité souhaitée d’environ 50 %, les lames sont stockées jusqu’à ce qu’elles soient prête…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous sommes reconnaissants au Wadsworth Center du Département de la santé de l’État de New York d’avoir soutenu ce projet.
Materials
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Riferimenti
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