वर्तमान प्रोटोकॉल पिछले प्रोटोकॉल को अपडेट करता है और उच्च गुणवत्ता वाले कॉक्लियर खोजों के संवर्धन के लिए अपेक्षाकृत सरल दृष्टिकोण शामिल करता है। यह जीवित और निश्चित कोशिकाओं में विश्वसनीय डेटा अधिग्रहण और उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग प्रदान करता है। यह प्रोटोकॉल आंतरिक कान कोशिकाओं के अध्ययन की चल रही प्रवृत्ति का समर्थन करता है।
अनुपचारित श्रवण हानि वैश्विक स्वास्थ्य सेवा प्रणाली पर महत्वपूर्ण लागत लगाती है और व्यक्तियों के जीवन की गुणवत्ता को खराब करती है। सेंसरिन्यूरल हियरिंग लॉस को कोक्लेया में संवेदी बाल कोशिकाओं और श्रवण नसों के संचयी और अपरिवर्तनीय नुकसान की विशेषता है। संपूर्ण और महत्वपूर्ण कॉक्लियर खोज बाल कोशिका के नुकसान का पता लगाने और आंतरिक कान कोशिकाओं के आणविक तंत्र को चिह्नित करने के लिए श्रवण अनुसंधान में मौलिक उपकरणों में से एक हैं। कई साल पहले, नवजात कॉक्लियर अलगाव के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया गया था, और हालांकि इसे समय के साथ संशोधित किया गया है, फिर भी इसमें सुधार की संभावना है।
यह पेपर मल्टी-वेल कल्चर चैंबरों में पूरे नवजात कॉक्लियर खोजों को अलग करने और संवर्धन करने के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है जो कोक्लेया की पूरी लंबाई के साथ बाल कोशिकाओं और सर्पिल गैंग्लियन न्यूरॉन कोशिकाओं के अध्ययन को सक्षम बनाता है। प्रोटोकॉल का परीक्षण चूहों और चूहों से कॉक्लियर एक्सप्लेंट का उपयोग करके किया गया था। बालों की कोशिकाओं, सर्पिल गैंग्लियन न्यूरॉन कोशिकाओं और आसपास की सहायक कोशिकाओं के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए स्वस्थ कॉक्लियर एक्सप्लेंट प्राप्त किए गए थे।
इस विधि के मुख्य लाभों में से एक यह है कि यह खोजों की गुणवत्ता से समझौता किए बिना अंग संस्कृति चरणों को सरल बनाता है। कोर्टी के अंग के सभी तीन मोड़ कक्ष के तल से जुड़े होते हैं, जो इन विट्रो प्रयोगों और खोजों के व्यापक विश्लेषण की सुविधा प्रदान करता है। हम जीवित और निश्चित खोजों के साथ विभिन्न प्रयोगों से कॉक्लियर छवियों के कुछ उदाहरण प्रदान करते हैं, यह दर्शाते हुए कि ओटोटॉक्सिक दवाओं के संपर्क में आने के बावजूद खोज अपनी संरचना को बनाए रखते हैं। इस अनुकूलित प्रोटोकॉल का व्यापक रूप से स्तनधारी कोक्लेया के एकीकृत विश्लेषण के लिए उपयोग किया जा सकता है।
सेंसरिन्यूरल सुनवाई हानि के अधिकांश मामले संवेदी बाल कोशिकाओं, श्रवण तंत्रिका कोशिकाओं और / या श्रवण सिनैप्स1 के अध: पतन के कारण होते हैं। संवेदी कोशिकाओं में यह अपक्षयी प्रक्रिया प्रगतिशील और आमतौर पर अपरिवर्तनीय होती है, जिसके परिणामस्वरूप सुनवाईहानि होती है। इसलिए, संवेदी कोशिकाओं की व्यवहार्यता और तनाव की स्थिति के तहत सिग्नलिंग मार्गों में परिवर्तन के बारे में जानकारी कोशिकाओं को नुकसान और इस प्रकार, नुकसान से बचाने के लिए महत्वपूर्ण है। संस्कृति में कॉक्लियर खोजों की जांच ऊतक परिसर के पुनर्मूल्यांकन और एक सामान्य सेल-सेल नेटवर्क के रखरखाव की अनुमति देती है, जो सिग्नलिंग प्रक्रियाओं के बेहतर विवरण को सक्षम बनाती है। ओटोटॉक्सिसिटी के प्रयोगात्मक मॉडल स्थापित करने के लिए, एंटीबायोटिक जेंटामाइसिन और केमोथेरेपीटिक एजेंट सिस्प्लाटिन का अक्सर उपयोग किया जाता है, क्योंकि उन्हें ओटोटॉक्सिक साइड इफेक्ट्स3 के लिए जाना जाता है।
कॉक्लियर एक्सप्लेंट की इन विट्रो कल्चर सिस्टम को समय के साथ विकसित और संशोधित किया गया है; हालांकि, पूरे कॉक्लियर खोजों की संस्कृति के लिए चरणबद्ध प्रोटोकॉल का विवरण अक्सर कई प्रकाशनों में गायब होता है। कॉर्टी के मुराइन अंग की प्राथमिक संस्कृति के लिए पहले वीडियो प्रोटोकॉल में से एक पार्कर एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था, जिसमें लेखकों ने संवेदी उपकला के अलगाव, ग्लास कवरलिप्स पर संवर्धन और अभिकर्मकप्रयोगों के लिए खोजों के विद्युतीकरण के लिए चरणों का वर्णन किया था। ग्लास कवरलिप्स का उपयोग करने वाला एक अन्य प्रोटोकॉल भी पहले प्रकाशित किया गया था, जिसमें आंतरिक कान में सेलुलर संरचना के संगठन को5 माना जाता था। कॉर्टी और वेस्टिबुलर अंग के अंग के माउस खोजों की संस्कृति के लिए मिलीसेल झिल्ली का उपयोग करने वाला एक वैकल्पिकप्रोटोकॉल बताया गया है। इन वीडियो रिपोर्टों ने विधि को बढ़ाने में योगदान दिया है, लेकिन अभी भी चुनौतियां हैं जिन्हें हल करने की आवश्यकता है। ग्लास कवरलिप्स और इंसर्ट के उपयोग से उत्पन्न होने वाले कई मुद्दों को संबोधित करने के लिए, वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य अंग संस्कृति चरणों को सुव्यवस्थित करना और विश्वसनीय डेटा के लिए उच्च गुणवत्ता वाले अंगों को कल्चर करना है। यह प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के दौरान अंग के प्रत्यक्ष हैंडलिंग को कम करके और जीवित और निश्चित कोशिकाओं की उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवियों को प्राप्त करने से पहले अंग हस्तांतरण से बचकर प्राप्त किया जाता है।
वर्तमान प्रोटोकॉल पहले विट्रो कल्चर सिस्टम में प्रकाशित होता है और कोर्टी के अंग के अलगाव में कई अनुकूलन पेश करता है और संस्कृति कक्षों में स्थानांतरित होता है, साथ ही संस्कृति की स्थिति और आगे के विश्लेषण में सुधार के लिए एक नए स्लाइड चैंबर का एकीकरण भी करता है। यह अनुकूलित प्रोटोकॉल अंग को नुकसान पहुंचाने के जोखिम को कम करता है, जो मध्यम परिवर्तन के दौरान ग्लास कवरलिप्स का उपयोग करते समय या आगेके विश्लेषण के लिए कवरलिप्स या झिल्ली से अंग के हस्तांतरण के दौरान हो सकता है। ग्लास कवरलिप्स में प्लास्टिक वालों की तुलना में बेहतर रिफ्लेक्टिव इंडेक्स होता है; हालांकि, वे नाजुक हैं और अधिक आसानी से टूट सकते हैं। यहां उपयोग किए जाने वाले मल्टी-वेल कक्ष एक माइक्रोस्कोप स्लाइड से जुड़े होते हैं, जो अंग संस्कृति और उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग के लिए अच्छी तरह से अनुकूल होते हैं। पृथक अंगों का स्थानांतरण एक स्पैटुला के साथ किया जाता है, जो अंग को सही अभिविन्यास में लाने और कक्ष में फिसलने की अनुमति देता है, बजाय इसके कि पहले अनुशंसित 4,5,6 के रूप में पिपेट के साथ बल लागू किया जाए।
पॉली-डी-लाइसिन-लेपित मल्टी-वेल कक्ष, जिसमें पर्याप्त माध्यम होना चाहिए, चिपकने वाला दबाव लागू किए बिना और अंग ओवरलैप से बचने के दौरान अंग हस्तांतरण और खोजों की उचित स्थिति की सुविधा प्रदान करता है, जैसा कि पहले उल्लेख किया गयाहै। इसके अलावा, आकस्मिक अंग अतिव्यापी और असमान संरचनाओं को एक कॉन्फोकल जेड-स्टैक का उपयोग करके हल किया जाता है। इस प्रोटोकॉल को विभिन्न अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलित किया गया है, जैसे माउस और चूहा खोज, कोर्टी और कोक्लेया के अंग की खोज, सीरम युक्त और सीरम-मुक्त माध्यम में संस्कृति, ओटोटॉक्सिक आकलन, और सामान्य दवा प्रतिक्रिया प्रयोग। कॉक्लियर एक्सप्लेंट को कवरस्लिप बॉटम के साथ कक्षों में लगाया और इनक्यूबेट किया जाता है, जो इन विट्रो प्रयोगों के दौरान इष्टतम हैंडलिंग, खोजों के पोस्टप्रोसेसिंग और लाइव और फिक्स्ड कॉक्लियर एक्सप्लेंट की इमेजिंग के लिए कक्षों में कॉक्लियर एक्सप्लेंट के आसंजन की सुविधा प्रदान करता है। कॉर्टी के अंग की पूरी लंबाई का दृश्य और बाल कोशिकाओं की मात्रा का ठहराव सुव्यवस्थित है। इसके अलावा, सहायक कोशिकाओं, सर्पिल गैंग्लियन न्यूरॉन कोशिकाओं और न्यूरॉइट्स के आकलन सटीक हैं। इसलिए, इस प्रोटोकॉल का उपयोग स्तनधारी कॉक्लियर कोशिकाओं के व्यापक विश्लेषण के लिए किया जा सकता है।
इस प्रोटोकॉल को अपडेट करने का उद्देश्य खोजों के अलगाव से लेकर जीवित और निश्चित कॉक्लियर कोशिकाओं की इमेजिंग तक के चरणों को सुव्यवस्थित करना था। हमने अलगाव के दौरान कुछ कदमों में सुधार किया और उच्च गुणवत्ता वाले खोजों को प्राप्त करने के लिए एक कुशल और सुचारू रूप से चलने वाले प्रोटोकॉल को स्थापित करने के उद्देश्य से कुछ अभिनव उपकरण पेश किए। वर्णित विधि पिछली रिपोर्ट 4,5 से एक अनुकूलित प्रोटोकॉल है। इसके अलावा, कुछ वर्तमान अध्ययनों में चरणबद्ध अद्यतन प्रोटोकॉल की कमी है। सरलीकृत खोज संस्कृति चरणों के साथ, यह प्रोटोकॉल अच्छी तरह से संरक्षित खोजों की आसान हैंडलिंग प्रदान करता है, जो प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य डेटा के लिए आवश्यक है। आंतरिक कान की खोज के लिए एक बहुलक कवरस्लिप के साथ बहु-वेल कक्षों की शुरूआत अंग लगाव और बरकरार खोजों के संरक्षण में सुधार करती है। यहां, हम यह प्रदर्शित करने के लिए तनाव की स्थिति के तहत प्रयोगों के कई उदाहरण प्रस्तुत करते हैं कि संस्कृति में अंग बाल कोशिकाओं के नुकसान और न्यूरॉइट्स को नुकसान के बावजूद अपने सेलुलर संगठन को बनाए रखते हैं।
आंतरिक कान के अंगों की खेती में चुनौतियों में से एक अंगों की टुकड़ी और तैरने से बचना है, क्योंकि यह खोजकर्ताओं की अखंडता, उपचार की प्रतिक्रिया और बाद की परीक्षाओं को प्रभावित करता है। इससे पहले, खोजों को ग्लास कवरलिप्स 4,5 पर सुसंस्कृत किया गया था। यद्यपि कांच की सतहों पर संस्कृति एक अच्छा विकल्प प्रतीत होती है, ग्लास को कोटिंग समय लेने वाली होती है, और कवरलिप्स स्वयं नाजुक और नाजुक होते हैं। मिलीसेल सेल संस्कृति का उपयोग करने वाला एक वैकल्पिक प्रोटोकॉल इस समस्या को हल करने के प्रयास करताहै। हालांकि, खोजों के साथ झिल्ली को काटना और स्थानांतरित करना उस प्रोटोकॉल में एक नाजुक कदम प्रतीत होता है। इसके अलावा, कवरस्लिप के माउंटिंग और सीलिंग के दौरान एक्सप्लेंट क्षतिग्रस्त हो सकते हैं। हमारे प्रस्तावित दृष्टिकोण में, एक बार जब खोजों को पॉली-डी-लाइसिन लेपित कक्षों में स्थानांतरित कर दिया जाता है और सही स्थिति में रखा जाता है, तो आगे स्थानांतरण या कवरलिप्स के साथ कवर करने की आवश्यकता नहीं होती है। इस प्रोटोकॉल का एक और लाभ एक पतली गैस-पारगम्य बहुलक कवरस्लिप वाले कक्षों का उपयोग है जो अंग खोजों के लिए इष्टतम संस्कृति की स्थिति प्रदान करता है। इस बहुलक में ग्लास के समान एक ऑप्टिकल गुणवत्ता है, इस प्रकार यह उच्च-रिज़ॉल्यूशन माइक्रोस्कोपी में सेल इमेजिंग के लिए उपयुक्त है।
माध्यम में सीरम के अतिरिक्त का उपयोग सेल और ऊतक संस्कृति के लिए अधिकांश प्रोटोकॉल में किया जाता है, जिसमें 1% -10% एफबीएस 4,5,6,16 के साथ आंतरिक कान खोजों की संस्कृति शामिल है। सीरम की उपस्थिति प्रयोगों की संस्कृति स्थितियों को प्रभावित करती है; इस प्रकार, कुछ स्थितियों में, सीरम के बिना संस्कृति को प्राथमिकता दी जाती है। कॉक्लियर एक्सप्लेंट की संस्कृति में सीरम की अनुपस्थिति को या तो डीएमईएम में एन 2 को जोड़कर या न्यूरोबेसल-ए माध्यम 5,6 में एन 2 को जोड़कर प्रतिस्थापित किया गया था। इस संबंध में, हमने सीरम के साथ और बिना खोजों की संस्कृति स्थितियों का परीक्षण किया। दोनों स्थितियों के तहत, आंतरिक कान कोशिकाएं महत्वपूर्ण थीं और ओटोटॉक्सिक स्थितियों का जवाब देती थीं। हमने 72 घंटे के लिए इन स्थितियों का परीक्षण किया, लेकिन खोजों को संस्कृति में और भी लंबे समय तक बनाए रखा जा सकता है, खासकर जब एन 2, बी 27 और विकास कारकों के साथ सीरम-मुक्त माध्यम के साथ इनक्यूबेट किया जाता है, जैसा किअन्य अध्ययनों 5,16 में सुझाव दिया गया है।
आंतरिक कान खोजों के अलगाव में सामान्य महत्वपूर्ण चरणों के अलावा, जैसे कि अंग अलगाव की अवधि और एंटीबायोटिक का उपयोग किया जाता है, इस प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण कदम भी हैं, जो हालांकि, प्रबंधनीय हैं। इस विधि में महत्वपूर्ण चरणों में से एक माध्यम की मात्रा से संबंधित है जो अंग डालने के बाद कक्ष में रहता है। यह खोजों को जीवित रखने और नीचे की सतह से जुड़े रहने के लिए अनुकूलित किया गया है। एक और महत्वपूर्ण कदम खोजकर्ताओं को कक्ष के तल से जुड़ने की अनुमति देने के लिए आवश्यक इनक्यूबेशन समय से संबंधित है। कुछ माइक्रोलीटर मध्यम के साथ 2 घंटे से इनक्यूबेशन गुना अधिक समय तक खोजकर्ताओं के स्वास्थ्य को प्रभावित कर सकता है। कम इनक्यूबेशन समय, जैसे कि 1 घंटे, का भी उपयोग किया जा सकता है, जब तक कि खोजकर्ताओं को अलग न करने का ध्यान रखा जाता है। एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू पॉली-डी-लाइसिन के अवशेष हैं। पॉली-डी-लाइसिन के धोने के चरणों का सख्ती से पालन किया जाना चाहिए, क्योंकि पॉली-डी-लाइसिन के ब्रोमाइड नमक के अवशेष कोशिकाओं के लिए विषाक्त हो सकते हैं। धोने के चरणों का ठीक से पालन किए जाने के बाद, पॉली-डी-लाइसिन के साथ कोटिंग कक्षों के लिए खोजों के चिकनी आसंजन की सुविधा प्रदान करती है ताकि कक्ष के तल से मजबूती से जुड़े होने से पहले स्थिति को ठीक किया जा सके।
इस विधि की सीमाओं में से एक ईमानदार माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कोशिकाओं की इमेजिंग है। यह उल्टे माइक्रोस्कोप के साथ उन प्रयोगशालाओं के लिए एक महत्वपूर्ण मुद्दा हो सकता है। हटाने योग्य सिलिकॉन कक्षों के साथ ग्लास स्लाइड का उपयोग सीधे और उल्टे माइक्रोस्कोपी के लिए किया जा सकता है; हालांकि, पॉली-डी-लाइसिन के साथ हमारी कोटिंग स्थितियों को पहले परीक्षण करने की आवश्यकता है। एक और सीमा कक्षों का भंडारण है, क्योंकि आवेषण हटाने योग्य नहीं हैं, और ढक्कन के साथ एक कक्ष की कुल ऊंचाई मानक माइक्रोस्कोप स्लाइड की 1 मिमी ऊंचाई की तुलना में लगभग 11 मिमी है। हालांकि, 8-वेल चैंबर16 से पहले सुझाए गए 4-वेल प्लेटों की तुलना में कम जगह का उपयोग करता है।
हम यहां दो माइक्रोस्कोप के साथ प्राप्त छवियों को प्रस्तुत करते हैं। जबकि पॉइंट-स्कैनिंग कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप अपने पतले ऑप्टिकल सेक्शन के कारण ऊतकों की उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवियां प्रदान करता है, स्पिनिंग डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप अच्छे रिज़ॉल्यूशन के साथ एक तेज़ इमेजिंग समय प्रदान करता है। आंतरिक बाल कोशिकाओं (आईएचसी) और बाहरी बाल कोशिकाओं (ओएचसी) के स्टीरियोसिलिया को कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके देखा जाता है। चूंकि आईएचसी के स्टीरियोसिलिया ओएचसी की तुलना में बड़े हैं, इसलिए उन्हें इस काम में बार-बार और अच्छी तरह से कल्पना की गई थी। ओएचसी स्टीरियोसिलिया के लिए, अन्य वैकल्पिक माइक्रोस्कोप विज़ुअलाइज़ेशन में सुधार कर सकते हैं, जैसे कि सुपर-रिज़ॉल्यूशन माइक्रोस्कोपी (एसआरएम)। स्पिनिंग डिस्क माइक्रोस्कोप के साथ प्राप्त खोज छवियां एक गहरी सीखने के दृष्टिकोणका उपयोग करके स्वचालित बाल सेल गिनती के आसान एकीकरण के लिए पर्याप्त हैं। इसके अलावा, जीवित कोशिकाओं और ऊतकों के साथ प्रयोगों के लिए छोटा अधिग्रहण समय महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, यह प्रोटोकॉल नवजात कॉक्लियर खोजों तक सीमित नहीं है। कुछ अनुकूलन के साथ, वेस्टिबुलर अंगों या भ्रूण के ऊतकों जैसे अन्य खोजों को भी सुसंस्कृत किया जा सकता है।
कोशिका व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए इन विट्रो में कॉक्लियर कोशिकाओं, जैसे बाल कोशिकाओं और न्यूरॉन्स का परिमाणीकरण महत्वपूर्ण है और इस प्रकार, क्षतिग्रस्त या खोई हुई कोशिकाओं का प्रतिशत। सिग्नलिंग मार्गों और सेल कार्यों की जांच मृत्यु और अस्तित्व के तंत्र को प्रकट करने में मदद करती है। भ्रूण और नवजात कॉक्लियर ऊतकों की परीक्षाएं कोक्लेया के विकास चरणों की जांच के लिए उपयोगी हैं। इसलिए, यह प्रोटोकॉल आंतरिक कान खोजों के इन विट्रो अध्ययनों को अनुकूलित करने में मदद करेगा, उदाहरण के लिए, ओटोटॉक्सिक मॉडल स्थापित करने, विकास चरणों की जांच करने, सिग्नलिंग मार्गों का मूल्यांकन करने और दवा स्क्रीनिंग अध्ययन करने के लिए।
The authors have nothing to disclose.
हम पशु देखभाल में उनके समर्थन के लिए बेसल विश्वविद्यालय के बायोमेडिसिन विभाग की पशु सुविधा, माइक्रोस्कोपी कोर सुविधाओं के साथ-साथ बायोमेडिसिन विभाग की सूचना प्रौद्योगिकी सेवा को उनकी तकनीकी सहायता के लिए और स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (एसएनएसएफ) को वित्तीय सहायता के लिए (एमडी-पीएचडी छात्रवृत्ति) के लिए स्वीकार करना चाहते हैं। अनुदान संख्या 323530_191222)।
15 mL High-Clarity Polypropylene Conical Tube 17 x 120 mm style | FALCON | 352096 | |
45° Angled Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm style | FALCON | 352070 | |
Antifade Mounting Medium | VECTASHIELD | H-1000 | |
Alexa Fluor 568 phalloidin | Thermofisher | 2151755 | |
Anti-beta III Tubulin antibody [TUJ-1] | Abcam | ab14545 | |
Antifade Mounting Medium With DAPI | VECTASHIELD | H-1200 | |
Anti-myosin VII rabbit polyclonal | Abcam | ab3481 | |
B-27 Supplement (50x), minus antioxidants | Thermofisher | 10889038 | |
CARBON STEEL surgical blades 23 | Swann Moiton | 210 | |
CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent | Thermofisher | C10723 | |
DMEM/F-12/(1:1)(1x) + GlutaMAX | Thermofisher | 31331028 | |
Double spatulas, one curved end | VWR | RSGA038.150 | |
Ethyl alcohol 70% V/V 1,000 mL | bichsel | 160 0 106 00 | |
Fetal Bovine Serum, certified | Thermofisher | 16000036 | |
Fixative Solution 4% paraformaldehyde prepared in PBS | Thermofisher | 201255309/201255305 | |
High Intensity Cold Halogen Light Source | Intralux® | 5100 | |
Huygens Professional version 21.10 | Scientific Volume Imaging | ||
ibidi µ-Slide 8 well | ibidi | 80826 | |
microscope | LEICA | M80 | |
microscope | LEICA | MS5 | |
MitoSOX™ Red Mitochondrial Superoxide Indicator, for live-cell imaging | Thermofisher | M36008 | |
N2 supplement (100x) | Thermofisher | 17502048 | |
Nikon Eclipse Ti microscope with a Yokogawa CSU-W1 spinning disk confocal unit, and a Photometrics Prime 95B camera. | NIKON | ||
Nikon Eclipse Ti microscope with an A1 point-scanning confocal unit | NIKON | ||
Operating scissors | Fine Science Tools | 14005-16 | |
Operating scissors | Fine Science Tools | 14088-10 | |
Operating tweezers | Fine Science Tools | 11008-15 | |
PBS pH 7.2 (1x), 500mL | Thermofisher | 20012-019 | |
Penicillin | Sigma-Aldrich | P3032 | |
POLY-D-LYSINE HYDROBROMIDE MOL WT GT 30 | Sigma-Aldrich | P7405 | |
Scalpel Handle #4 | Fine Science Tools | 10004-13 | |
Steri 250 Second sterilizer | Simon Keller AG | 031100 | |
Sterilizer, desiccant pellets | Simon Keller AG | 31120 | |
Tissue Culture Dish 60 x 15 mm | FALCON | 353802 | |
Tissue Culture Dish 60 x 15 mm | FALCON | 353004 | |
Trito X-100 | Sigma | T9284 | |
Unconventional myosin-VIIa | Developmental Studies Hybridoma Bank | 138-1s | |
WFI for Cell Culture[-]Antimicrobial, 500 mL | Thermofisher | A12873-01 |