מוצג כאן פרוטוקול לקביעת בליעה, טרנסלוקציה והפצה של אימידקלופריד בחיטה בתנאים הידרופוניים באמצעות ספקטרומטריית מסות כרומטוגרפיה-טנדם נוזלית (LC-MS-MS). התוצאות הראו כי אימידקלופריד יכול להיספג על ידי חיטה, ואימידקלופריד זוהה הן בשורשי החיטה והן בעלים.
ניאוניקוטינואידים, סוג של קוטלי חרקים, נמצאים בשימוש נרחב בגלל דרכי הפעולה החדשות שלהם, פעילות קוטלת חרקים גבוהה וספיגת שורשים חזקה. אימידקלופריד, קוטל החרקים הנפוץ ביותר בעולם, הוא ניאוניקוטינואידים מייצגים מהדור הראשון ומשמש להדברת יבולים, ירקות ועצי פרי. עם יישום כה רחב של אימידקלופריד, השאריות שלו בגידולים משכו בדיקה הולכת וגוברת. במחקר הנוכחי, 15 שתילי חיטה הונחו בתווך תרבית המכיל 0.5 מ”ג / ליטר או 5 מ”ג / ליטר אימידקלופריד עבור הידרוקולטור. התוכן של imidacloprid בשורשי חיטה ועלים נקבע לאחר 1 יום, 2 ימים, ו 3 ימים של hydroculture כדי לחקור את ההגירה וההפצה של imidacloprid בחיטה. התוצאות הראו כי אימידקלופריד זוהה הן בשורשים והן בעלים של צמח החיטה, ותכולת האימידקלופריד בשורשים הייתה גבוהה מזו שבעלים. יתר על כן, ריכוז האימידקלופריד בחיטה עלה ככל שזמן החשיפה גדל. לאחר 3 ימים של חשיפה, השורשים והעלים של החיטה בקבוצת הטיפול של 0.5 מ”ג/ליטר הכילו 4.55 מ”ג/ק”ג ±-1.45 מ”ג/ק”ג ו-1.30 מ”ג/ק”ג ±-0.08 מ”ג/ק”ג אימידקלופריד, בהתאמה, בעוד שהשורשים והעלים של קבוצת הטיפול 5 מ”ג/ל’ הכילו 42.5 מ”ג/ק”ג ±-0.62 מ”ג/ק”ג ו-8.71 מ”ג/ק”ג ±-0.14 מ”ג/ק”ג אימידקלופריד, בהתאמה. תוצאות המחקר הנוכחי מאפשרות הבנה טובה יותר של שאריות חומרי הדברה בגידולים חקלאיים ומספקות התייחסות לנתונים להערכת סיכונים סביבתיים של חומרי הדברה.
באגרונומיה של ימינו, השימוש בחומרי הדברה חיוני להגדלת תנובת היבול. קוטלי חרקים ניאוניקוטינואידים משנים את האיזון הפוטנציאלי של הממברנה על ידי שליטה בקולטני אצטילכולין ניקוטיניים במערכת העצבים של החרקים, ובכך מעכבים את ההולכה הרגילה של מערכת העצבים המרכזית של החרק, מה שמוביל לשיתוק ומוות של החרקים1. בהשוואה לקוטלי חרקים מסורתיים, לנאוניקוטינואידים יש יתרונות כגון דרכי פעולה חדשניות, פעילות קוטלת חרקים גבוהה וספיגת שורשים חזקה, מה שהופך אותם למוצלחים מאוד בשוק חומרי ההדברה 2,3. היקף המכירות של ניאוניקוטינואידים דווח כ-27% משוק חומרי ההדברה העולמי בשנת 2014. שיעור הגידול השנתי הממוצע של ניאוניקוטינואידים היה 11.4% בין השנים 2005 ל -2010, מתוכם כ -7% נרשמו בסין 4,5,6. מסוף 2016 ועד המחצית הראשונה של 2017, מכירות חומרי ההדברה בסין החלו להתאושש לאחר ירידה, ומחירי חומרי ההדברה המשיכו לעלות, ביניהם קוטלי חרקים ניאוניקוטינואידים הראו עליית מחירים משמעותית7. עד כה פותחו שלושה דורות של קוטלי חרקים ניאוניקוטינואידים, שכל אחד מהם מכיל קבוצות ניקוטין פירידין כלוריד, תיאזוליל, וטטרהידרופורן, בהתאמה8.
Imidacloprid מייצג את הדור הראשון של קוטלי חרקים neonicotinoid, אשר הנוסחה המולקולרית שלה היא C9H10ClN5O2, והוא גביש חסר צבע. אימידקלופריד משמש בעיקר להדברת מזיקים, כגון כנימות, פלנטהופרים, תולעי קמח ותריפס9 וניתן ליישם אותו על גידולים כגון אורז, חיטה, תירס, כותנה וירקות כגון תפוחי אדמה, כמו גם עצי פרי. בשל היישום ארוך הטווח, המשמעותי והמתמשך של חומרי הדברה, הן החרקים המועילים והן האויבים הטבעיים של המזיקים צומצמו במהירות, וחלק מהמזיקים החקלאיים הפכו עמידים לחומרי הדברה, וכתוצאה מכך נוצר מעגל קסמים של שימוש מתמשך והולך בכמויות של חומרי הדברה10. בנוסף, היישום הנרחב של חומרי הדברה הביא להידרדרות באיכות הקרקע, לשאריות מתמשכות של חומרי הדברה בתוצרת חקלאית ולבעיות אקולוגיות אחרות, שלא זו בלבד שהן גורמות נזק משמעותי לסביבה האקולוגית החקלאית11 אלא גם מהוות איום חמור על בריאות האדם12. ריסוס חומרי הדברה פוגע קשות בגדילה ובאיכות של מיקרובי קרקע ובעלי חיים בקרקע13. שימוש בלתי סביר או מופרז בחומרי הדברה גרם לסיכונים ביטחוניים משמעותיים לקרקע ולמים, לבעלי חיים ולצמחים ואף לחיי אדם14. בשנים האחרונות החריפה בעיית שאריות היתר של חומרי הדברה בגידולים חקלאיים עם השימוש הנרחב בחומרי הדברה. כאשר השתמשו באימידקלופריד להגדלת תנובת הירקות, שיעור הספיגה של אימידקלופריד בירקות עלה עם העלייה בכמות ובשאריות של אימידקלופריד15. כיבול מזון עיקרי, הן הייצור והן הבטיחות של חיטה הם קריטיים. לכן, יש להבהיר את מדיניות השאריות וההפצה של חומרי הדברה המשמשים לחיטה.
בשנים האחרונות פותחו שיטות רבות למיצוי שאריות אימידקלופריד ממים, אדמה וצמחים. שיטת QuEChERS (מהירה, קלה, זולה, יעילה, מוקשחת ובטוחה) היא שיטה חדשה המשלבת טכנולוגיית מיקרו-מיצוי בשלב מוצק וטכנולוגיית מיצוי שלב מוצק מפוזר וכוללת שימוש באצטוניטריל כממס מיצוי והסרת זיהומים ומים מעורבים בדגימה באמצעות NaCl ו- MgSO4 נטול מים, בהתאמה16. שיטת QuEChERS דורשת מינימום כלי זכוכית וכוללת שלבים ניסיוניים פשוטים, מה שהופך אותה לאחת משיטות מיצוי חומרי ההדברה הפופולריות ביותר17. עבור זיהוי של imidacloprid, מגבלת גילוי נמוכה כמו 1 × 10-9 גרם18 הושגה עם כרומטוגרפיה נוזלית (LC), ו 1 × 10-11 גרם 19 הושג עם כרומטוגרפיית גז (GC). בשל הרזולוציה הגבוהה והרגישות שלהם, LC-MS ו- GC-MS הראו מגבלות זיהוי imidacloprid נמוכות עוד יותר של 1 × 10-13 ל- 1 × 10-14 גרם20,21; טכניקות אלה, אם כן, מתאימות היטב לניתוח של עקבות imidacloprid שאריות.
במחקר הנוכחי, אימידקלופריד נבחר כמזהם המטרה, וחיטה נבחרה כיבול הניסוי לחקר התפלגות שאריות אימידקלופריד בחיטה. פרוטוקול זה מפרט שיטה לניתוח מקיף של העשרה והעברה של חומר ההדברה אימידקלופריד בחיטה על ידי בחינת קליטה ואחסון של אימידקלופריד בחלקים שונים של צמחי חיטה הגדלים בתנאים הידרופוניים. המחקר הנוכחי נועד לספק בסיס תיאורטי להערכת סיכונים של שאריות חומרי הדברה בחיטה, להנחות את היישום הרציונלי של חומרי הדברה בפעילות הייצור החקלאי כדי להפחית את שאריות חומרי ההדברה ולשפר את בטיחות ייצור היבול.
בשנים האחרונות דווחו לעתים קרובות שיטות לטיפול מקדים ואיתור שאריות של חומר ההדברה אימידקלופריד. Badawy et al.23 השתמשו בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים כדי לקבוע את התוכן של אימידקלופריד בפרי עגבניות שגדל בתנאי חממה ודיווחו על ליניאריות טובה עבור אימידקלופריד בטווח 0.0125-0.15…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס ‘42277039).
Acetonitrile | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | 01-06-1995 | Suitable for HPLC, gradient grade, >99.9% |
Analytical balance | Sartorius Lab Instruments Co.Ltd. | GL124-1SCN | |
Artificial climate incubator | Shanghai Badian Instrument Equipment Co. Ltd. | HK320 | |
Centrifuge | Eppendorf China Co. Ltd. | Centrifuge5804 | |
Disposable syringe | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Z116866 | Capacity 5 mL, graduated 0.2 mL, non-sterile |
Formic acid | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Y0001970 | European pharmacopoeia reference standard |
Graphitized carbon black (GCB) | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | V900058 | 45 μm |
H2O2 | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | 31642 | 30% (w/w) |
Hoagland’s Basal Salt Mixture | Shanghai Yu Bo Biotech Co. Ltd. | NS1011 | Anhydrous, reagent grade |
Hydroponic equipment | Jiangsu Rongcheng Agricultural Science and Technology Development Co.Ltd. | SDZ04BD | |
Hypersil BDS C18 column | Thermo Fisher Scientific (China) Co. Ltd. | 28103-102130 | |
Imidacloprid | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | Y0002028 | European pharmacopoeia reference standard |
MgSO4 | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co. Ltd. | 208094 | Anhydrous, reagent grade, >97% |
NaCl | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | S9888 | Reagent grade, 99% |
pH meter | Shanghai Thunder Magnetic Instrument Factory | PHSJ-3F | |
Phytotron box | Harbin Donglian Electronic Technology Co. Ltd. | HPG-280B | |
Pipettes | Eppendorf China Co. Ltd. | Research plus | |
Syringe filter | Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co.Ltd. | SLGV033N | Nylon, 0.22 µm pore size, 33 mm, non-sterile |
Ultra performance liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry | Thermo Fisher Scientific (China) Co. Ltd. | UltiMate 3000 | |
TSQ Quantum Access MAX | |||
Vortex mixer | Shanghai Yetuo Technology Co. Ltd. | Vortex-2 | |
Wheat seed | LuKe seed industry | Jimai 20 |