Generazione di un modello di tiroidite autoimmune spontanea del topo
Summary
Sono stati stabiliti diversi tipi di modelli animali della tiroidite di Hashimoto, così come la tiroidite autoimmune spontanea nel topo NOD. I mouse H-2h4 sono un modello semplice e affidabile per l’induzione HT. Questo articolo descrive questo approccio e valuta il processo patologico per una migliore comprensione del modello murino SAT.
Abstract
Negli ultimi anni, la tiroidite di Hashimoto (HT) è diventata la malattia autoimmune della tiroide più comune. È caratterizzata da infiltrazione linfocitaria e dalla rilevazione di specifici autoanticorpi sierici. Sebbene il potenziale meccanismo non sia ancora chiaro, il rischio di tiroidite di Hashimoto è correlato a fattori genetici e ambientali. Allo stato attuale, ci sono diversi tipi di modelli di tiroidite autoimmune, tra cui tiroidite autoimmune sperimentale (EAT) e tiroidite autoimmune spontanea (SAT).
L’EAT nei topi è un modello comune per HT, che viene immunizzato con lipopolisaccaride (LPS) combinato con tireoglobulina (Tg) o integrato con adiuvante completo di Freund (CFA). Il modello murino EAT è ampiamente affermato in molti tipi di topi. Tuttavia, la progressione della malattia è più probabilmente associata alla risposta anticorpale Tg, che può variare in diversi esperimenti.
SAT è anche ampiamente usato nello studio di HT nel NOD. Mouse H-2H4. Il CENNO. Il topo H2h4 è un nuovo ceppo ottenuto dall’incrocio del topo diabetico non obeso (NOD) con la B10. A(4R), che è significativamente indotto per HT con o senza alimentazione di iodio. Durante l’induzione, il NOD. Il topo H-2h4 ha un alto livello di TgAb accompagnato da infiltrazione di linfociti nel tessuto follicolare tiroideo. Tuttavia, per questo tipo di modello murino, ci sono pochi studi per valutare in modo completo il processo patologico durante l’induzione dello iodio.
In questo studio viene stabilito un modello murino SAT per la ricerca HT e il processo di cambiamento patologico viene valutato dopo un lungo periodo di induzione dello iodio. Attraverso questo modello, i ricercatori possono comprendere meglio lo sviluppo patologico della HT e selezionare nuovi metodi di trattamento per la HT.
Introduction
La tiroidite di Hashimoto (HT), nota anche come tiroidite linfatica cronica o tiroidite autoimmune, è stata segnalata per la prima volta nel 19121. La HT è caratterizzata da infiltrazione linfocitaria e danni al tessuto follicolare tiroideo. I test di laboratorio si manifestano principalmente come aumento degli anticorpi specifici della tiroide, inclusi gli anticorpi anti-tireoglobulina (TgAb) e gli anticorpi anti-perossidasi tiroidea (TPOAb)2. L’incidenza di HT è nell’intervallo 0,4% -1,5%, rappresentando il 20% -25% di tutte le malattie della tiroide, e questo valore è aumentato negli ultimi anni3. Inoltre, un gran numero di studi ha riportato che la HT è associata all’oncogenesi e alla recidiva del carcinoma papillare della tiroide (PTC)4,5; I potenziali meccanismi sono ancora controversi. La tiroidite autoimmune è anche un fattore importante nell’infertilità femminile6. Pertanto, la patogenesi della HT deve essere chiara, per la quale è essenziale un modello animale stabile e semplice.
Per studiare l’eziologia della HT, sono stati impiegati due tipi principali di modelli murini, tra cui la tiroidite autoimmune sperimentale (EAT) e la tiroidite autoimmune spontanea (SAT) nei presenti studi 7,8. I topi sensibili sono stati immunizzati con antigeni tiroidei specifici (tra cui la tiroide grezza, la tireoglobulina purificata [TG], la perossidasi tiroidea [TPO], l’ectodominio TPO ricombinante e peptidi TPO selezionati) per stabilire il modello murino EAT. Inoltre, gli adiuvanti, tra cui lipopolisaccaride (LPS), adiuvante completo di Freund (CFA) e altri adiuvanti insoliti, vengono utilizzati anche durante l’immunizzazione per abbattere la tolleranza immunitaria 9,10,11,12,13,14,15,16,17.
Il modello SAT è un modello importante per studiare lo sviluppo spontaneo della tiroidite autoimmune, che si basa sul NOD. Topi H-2h4. Il CENNO. Il topo H-2h4 è un nuovo ceppo ottenuto dall’incrocio di NOD e B10. Topi A(4R), seguiti da più backcross a NOD, con il gene di suscettibilità alla tiroidite autoimmune IAk18,19. ANNUIRE. I topi H-2h4 non sviluppano il diabete, ma hanno un’alta incidenza di tiroidite autoimmune e sindrome di Sjogren (SS)19. Gli studi hanno scoperto che la molecola di adesione intracellulare-1 (ICAM-1) è altamente espressa nel tessuto tiroideo di NOD. Topi H-2h4 a 3-4 settimane di età. Inoltre, con l’aumento dell’assunzione di iodio, l’immunogenicità della molecola di tireoglobulina è potenziata, che regola ulteriormente l’espressione di ICAM-1, che svolge un ruolo importante nel processo di infiltrazione dei monociti21. Questo modello simula il processo autoimmune verificando la relazione tra dose di iodio e gravità della malattia. Il metodo stabilito è stabile, con un’alta probabilità di successo. Il modello SAT è stato applicato per indurre tiroidite autoimmune per molti anni e continua ad essere un metodo efficace per studiare la patogenesi della tiroidite autoimmune. Tuttavia, l’attuale metodo di costruzione del modello EAT è più complicato e costoso; Diversi laboratori utilizzano diversi metodi di immunizzazione e siti di iniezione. Inoltre, topi con diversi background genetici hanno diversi tassi di induzione, che necessitano di ulteriori studi per rivelare il potente meccanismo.
Tuttavia, lo sviluppo della tiroidite nel modello SAT è associato allo ioduro di sodio, al dimorfismo sessuale e alle condizioni di allevamento. Per rivelare la procedura appropriata di tiroidite autoimmune nel modello SAT, questo articolo ha descritto il metodo di induzione della tiroidite autoimmune in diverse condizioni. Inoltre, consente lo studio della patogenesi e del progresso immunologico della tiroidite autoimmune in diversi stadi di questa malattia.
Protocol
Representative Results
Discussion
La HT si verifica a causa di un disturbo del sistema autoimmune causato da linfociti che si infiltrano nella ghiandola tiroidea, compromettendo ulteriormente la funzione tiroidea, mentre producono anticorpi specifici della tiroide. I livelli sierici di TSH, TgAb e TPOAb nei pazienti con HT sono significativamente elevati27. Allo stato attuale, due tipi principali di modelli murini sono ampiamente utilizzati per studiare l’eziologia della tiroidite autoimmune: EAT e SAT29. I…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli anticorpi monoclonali di topo contro il TPO umano (usati come controlli positivi) sono stati forniti dal Dr. P. Carayon e dal Dr. J. Ruf (Marsiglia, Francia). Gli autori ringraziano tutti i partecipanti a questo studio e i membri del nostro team di ricerca. Questo lavoro è stato in parte sostenuto da sovvenzioni del Fondo di sostegno post-dottorato dell’ospedale della Cina occidentale, dell’Università del Sichuan, Cina (2020HXBH057) e del Programma di supporto scientifico e tecnologico della provincia del Sichuan (progetto n. 2021YFS0166)
Materials
| Butorphanol tartrate | Supelco | L-044 | |
| Dexmedetomidine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 145108-58-3 | |
| Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) well | Sigma-Aldrich | M9410-1CS | |
| Ethanol | macklin | 64-17-5 | |
| Freund’s Adjuvant, Complete | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Freund’s Adjuvant, Incomplete | Sigma-Aldrich | F5506 | |
| Goat anti-Mouse IgG | invitrogen | SA5-10275 | |
| Midazolam solution | Supelco | M-908 | |
| Mouse/rat thyroxine (T4) ELISA | Calbiotech | DKO045 | |
| Paraformaldehyde | macklin | 30525-89-4 | |
| Propidium iodide | Sigma-Aldrich | P4864 | |
| Sodium Iodine | Sigma-Aldrich | 7681-82-5 | |
| Thyroglobulin | Sigma-Aldrich | T1126 | |
| Thyroglobulin ELISA Kit | Thermo Scientific | EHTGX5 | |
| TSH ELISA | Calbiotech | DKO200 | |
| Xylene | macklin | 1330-20-7 |
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