Inriktning alpha Synuclein aggregat i kutan perifer nerv fibrer av fritt flytande immunofluorescens assay

Hudbiopsi har fått en stor betydelse som diagnostiska och forsknings verktyg inom området neurologiska sjukdomar¹. I själva verket innehåller epidermis och dermis rikliga somatiska sensoriska nerv fibrer (myeliniserade och unmyelinated), nociceptiva fria nerv ändar, sensoriska receptorer och autonom innervation av svett körtlar, fartyg, talgkörtlar och muskel arrector pilorum ^{och 2}.

I mitten av 20- talet, den setup för immunhistokemi av PGP 9.5 anti kropp tillät bevis på en omfattande innervation av mänskliga epidermis däggdjur hud³. PGP 9.5 är en carboxyl-Terminal hydrolas jämnt fördelad längs axoner av både centrala och perifera nerv systemet (PNS). Tillgängligheten av denna anti kropp tillät inte bara att klargöra morfologi och anatomi PNS i huden utan också genomfört studiet av sjukdomar i samband med det^3,4. Hudbiopsi bidrog till att definiera en ny klinisk enhet: den lilla fiber neuropati. Flera internationella grupper visade sambandet mellan förlusten av intraepidermal nerv fibrer och symtom/tecken på små fiber neuropati⁵ av hudbiopsi analys och förutsatt standardiserade protokoll för nervmorphometry samt normativa referensvärden som skall användas i den kliniska praxisen^6,7,8.

Nyligen en stor mängd bevis har visat att neurodegenerativa sjukdomar, som kännetecknas av felvikt protein ackumulationer i centrala nerv systemet, är flera system patologier⁹. I själva verket kännetecknas PD av αSyn ackumulering i dopaminerga neuron i substantia nigra, men det har visats att αsyn och dess patologisk form, fosforylerade αsyn (P-αsyn), kunde upptäckas också i perifera vävnader. Gastrointestinalt slem hinna¹⁰, saliv körtlar¹¹, hud autonoma fibrer som omger svett körtlar och pilomotor muskler^12,13,¹⁴, Visa immunoreaktivitet mot patogena former av αsyn, i enlighet med Braak hypotes som spännande postulat att αsyn patologi kan börja i PNS i god tid, innan dess ackumulering i hjärnan¹⁵. Vidare har förekomsten av p-αsyn påvisats i hud nerver hos patienter med rem-beteende störningar som anses prodromala PD^16,17 på så sätt kan hudpatologiskt αsyn anses vara en lovande tidig perifer histopatologisk markör för synucleinopati.

Föreningen av små fiber neuropati i PD har visats tidigare och det har kon stater ATS att intraepidermal nerv fibrer densitet återspeglar sjukdomsprogression^18,19. Därför är hudbiopsi ett användbart verktyg för att studera neurodegeneration i PD och för att etablera en pre-mortem histopatologisk diagnos av sjukdomen. I själva verket har hudbiopsi en stor fördel av att vara en lättillgänglig och minimalt invasiva förfarande, vilket gör att analysen av nervvävnad benägna att patologin. Slutligen, möjligheten att upprepa hudbiopsi i samband med uppföljning av samma patienter gör det möjligt att studera den längsgående korrelation med sjukdomsprogression.

I vårt laboratorium, utnyttja en dubbel immuno-färgning med PGP 9.5 och kon formation specifika monoklonala 5g4 anti kropp, som erkänner sjukdomsspecifika former av αsyn inklusive små aggregat^20,21, kunde vi Visa den förekomst av αSyn aggregat i hudens nerver med en lovande hög diagnostisk verknings grad¹⁹. Immunofluorescens analys av hudbiopsi i överensstämningssjukdomar framstår som en lovande källa till bio markörer genom att kombinera både upptäckten av protein aggregat och måttet på neurodegeneration in vivo. Härefter illustrerar vi ett enkelt och mångsidigt protokoll om hantering av hudbiopsi och utförande av fritt flytande immunofluorescens-färgning för detektion av αSyn-aggregat. Dessutom kan detta protokoll anpassas för att inrikta sig på alla andra intresse proteiner som uttrycks i hud-PNS.

Följande studie protokoll har använts för att utvärdera diagnos nyttan av aggregerad αSyn-analys i PNS för PD med hudbiopsi¹⁹. Inklusionskriterier för PD var: en definitiv klinisk diagnos enligt den brittiska Brain Bank diagnostiska kriterier, sjukdoms tid minst 3 år, ingen släkt historia, och ingen större kognitiv svikt eller stora dysautonomiska symptom i historien. Uteslutnings kriterier var kända orsaker till neuropati (glycated hemoglobin, kreatinin, vitamin B12, TSH, serum immunofixation, HIV, HCV, syfilis, och borrelios). Varje ämne genomgick 3 mm-diameter hudbiopsier på tre anatomiska platser (hals på C8 dermatomal nivå, lår 10 cm ovanför knäet, benet 10 cm över laterala fotled olus) på sidan, som var kliniskt mer drabbade. I allmänhet är följande protokoll om hantering av hudbiopsi och utföra fritt flytande immunofluorescens färgning och analys. Därför kan det anpassas och användas för att upptäcka andra proteiner av intresse för hud vävnad.