מיקוד אלפא Synuclein אגרגטים בתוך עורית היקפיים סיבים עצביים על ידי Free-צפה אימונוofלואונסנציה החופשית

ביופסיה העור רכשה חשיבות רבה כמו כלי אבחון ומחקר בתחום של הפרעות נוירולוגיות¹. אכן, אפידרמיס ו דרמיס מכילים שופע סיבי העצב החושי החושים (מיאלואידית ובלתי מיאלואידית), nociceptive קצוות עצביים חינם, קולטני חישה ואינבציה אוטונומי של בלוטות הזיעה, כלי, בלוטות החלב ושרירים הרקטור השרירום ². שתיים.

באמצע המאה ה -20, ההתקנה עבור אימונוהיסטוכימיה של הנוגדן pgp 9.5 מותר הראיות של שימור נרחב של העור באפידרמיס האדם³. Pgp 9.5 הוא carboxyl-טרמינל הידרוקלז מופץ באופן שווה לאורך אקסונים של מערכת העצבים המרכזית וההיקפית (היקפית). הזמינות של הנוגדן הזה מותר לא רק כדי להבהיר את המבנה ואת האנטומיה של היקפית בעור אלא גם יישמה את המחקר של מחלות הקשורות בו^3,4. ביופסיה של העור תרמו להגדרת ישות קלינית חדשה: נוירופתיה סיבים קטנים. קבוצות בינלאומיות מספר הפגינו את הקשר בין אובדן סיבי העצב התוך באפידרמיס ותסמינים/סימנים של נוירופתיה סיבים קטנים⁵ על ידי ניתוח ביופסיה העור סיפק פרוטוקולים סטנדרטיים עבור ממורמטריה עצבים, כמו גם ערכי התייחסות נורמטיבית לשימוש בפרקטיקה הקלינית^6,7,8.

לאחרונה כמות גדולה של ראיות הראו כי מחלות ניווניות, המאופיינת על ידי חלבון מקופל צטברויות במערכת העצבים המרכזית, הם הפתווגיות מולטי מערכת⁹. אכן, PD מאופיין על ידי הצטברות αSyn בתוך תא העצב הדואמנרגיים של החומר, אבל זה הוכח כי αSyn וצורתו הפתולוגית, αSyn זרחתי (P-αSyn), ניתן להבחין גם ברקמות ההיקפית. רירית העיכול¹⁰, בלוטות הרוק¹¹, סיבי העור האוטונומית סביב בלוטות הזיעה והשרירים הפילגניים^12,13,14, להראות פעילות immunoreactivity צורות של מערכת החיסונית של, ב בהתאם להשערה Braak כי שליט אקסיומת כי αSyn פתולוגיה עשויה להתחיל ב היקפית גם מראש, לפני הצטברות שלה במוח¹⁵. עוד, הנוכחות של p-αSyn כבר הפגינו עצבי העור של חולים עם הפרעות התנהגות REM שנחשבים משטרת prodromal^16,17 ובכך העור הפתולוגי αSyn יכול להיחשב היקפי מבטיח מוקדם סימן ההיסטואוולוגי של הסיננופתיה.

האגודה של נוירופתיה סיבים קטנים במשטרה כבר הפגינו בעבר וזה נמצא כי צפיפות סיבים עצביים באפידרמיס משקף התקדמות המחלה^18,19. מכאן, ביופסיה של העור הוא כלי שימושי עבור לימוד נוירוניוון ב PD ולהקמת אבחון histopathological לפני המוות של המחלה. אכן, ביופסיה של העור יש יתרון גדול של להיות הליך נגיש בקלות מינימלית פולשנית, המאפשר ניתוח של רקמת העצבים נוטה הפתולוגיה. לבסוף, האפשרות לחזור על ביופסיה בעור במהלך המעקב של חולים אותו מאפשר ללמוד את הקורלציה האורך עם התקדמות המחלה.

במעבדה שלנו, ניצול דלקת חיסונית כפולה עם pgp 9.5 ואת הקונפורמציה-הנוגדן 5g4 ספציפי, כי מזהה צורות ספציפיות של המחלה של αSyn כולל אגרגטים קטנים^20,21, הצלחנו להראות את ה נוכחות של אגרגטים αSyn בעצבי העור עם יעילות מבטיחה אבחון גבוה¹⁹. Immunofluorescence ניתוח של ביופסיה של העור מחלות קונפורניות בולטת כמו מקור מבטיח של סמנים באמצעות שילוב הן זיהוי של אגרגטים חלבונים ואת המדד של נוירוניוון ב vivo. להלן, אנו ממחישים פרוטוקול קל וצדדי על הטיפול ביופסיה העור וביצוע ללא תשלום הimmunofluorescence כתמים עבור זיהוי אגרגטים. יתר על כן, פרוטוקול זה יכול להיות מותאם למיקוד כל חלבון אחר של ריבית המתבטאת בעור היקפית.

פרוטוקול המחקר שלהלן נעשה שימוש כדי להעריך את כלי האבחון של ניתוח αSyn צבור בהיקפית של PD על ידי העור ביופסיה¹⁹. קריטריוני הכללה עבור המשטרה היו: אבחנה קלינית מובהק על פי הקריטריונים האבחון של בנק המוח בבריטניה, משך המחלה לפחות 3 שנים, אין היסטוריה משפחתית, ואין ליקוי קוגניטיבית גדול או סימפטומים dysautonomic הגדולות בהיסטוריה. קריטריוני הדרה היו ידועים סיבות נוירופתיה (המוגלובין מסוכרר, קריאטינין, ויטמין B12, TSH, החיסוני סרום, HIV, מימן, עגבת, ו borreliosis). כל אחד מהנושאים עבר ל -3 ביופסיות עור בקוטר 3 מ”מ בשלושה אתרים אנטומיים (צוואר ברמה C8 דרמטאלית, ירכיים 10 ס מ מעל הברך, רגל 10 ס”מ מעל קרסולית לרוחב) בצד, אשר הושפע קלינית יותר. באופן כללי, הפרוטוקול הבא הוא על טיפול ביופסיה של העור וביצוע של כתמים וניתוח החיסונית הצפה בחינם. לכן זה יכול להיות מותאם ומשמש לאיתור חלבונים אחרים של עניין רקמת העור.