Blutentnahme durch Subclavian-Vein-Punktion in Mäusen
Summary
Hier stellen wir ein Protokoll vor, mit dem Blutproben aus der subklavischen Vene von Mäusen entnommen werden können.
Abstract
Die Maus ist das wichtigste Säugetiermodell für die Untersuchung menschlicher Krankheiten und der menschlichen Gesundheit. Die Blutprobe von Mäusen ist jedoch eine Herausforderung in der Forschungsarbeit. Die Nagelblutentnahme ist eine beliebte Methode, wenn eine kleine Menge Blutprobe benötigt wird. Orbitale Arterie könnte in Betracht gezogen werden, wenn eine große Menge Blut benötigt wird, aber diese Blutentnahme Methode hat ethische Fragen. Früher haben wir die Machbarkeit und Sicherheit der Blutprobenentnahme durch subklavianische Venenpunktion bei Ratten unter Beweis gestellt, und hier untersuchen wir, ob diese Methode bei Mäusen eingesetzt werden kann. Wir berichten, dass diese Methode für die Blutentnahme von Mäusen sicher und praktisch ist. Die Blutentnahme durch die subklavianische Venenpunktion bei Mäusen kann eine praktische Methode in der täglichen Forschung sein.
Introduction
Die Blutentnahme von Mäusen ist in den meisten Forschungslabors unerlässlich. Die konventionellen Ansätze für die Blutentnahme bei Mäusen ist das Schneiden von Schwanzschnitten, wenn weniger als 100 μL Probenarbeit benötigt wird1. Wenn jedoch mehr als 100 μL Blut zu einem nicht endrechtlichen Zeitpunkt benötigt werden, sind Retroorbitale, submandibuläre Blutungen oder submentale Blutentnahme die am häufigsten als Technikenangesehen 2. In einigen Fällen wurde die juguläre Venenkatheterisierung durch einen chirurgischen Schnittals alternative Methode 3übernommen.
Dennoch sind die oben genannten Methoden schädlich für die Mäuse. Nach bestem Wissen und Gewissen wird die Rückschrockmethode wegen des möglichen Risikos von Komplikationen4,5nichtallgemein akzeptiert. Operationsbedingtes Trauma geschieht nicht nur im sichtbaren Bereich6,7,sondernauch tief in der Umlaufbahn6. Außerdem ist submandibuläre Blutentnahmestressig 8 und könnte mit übermäßigen Blutungen2,9verbundensein. Auf der Grundlage unserer bisherigen Forschungen10,11stellenwir hier eine neue Strategie für die Blutentnahme aus subklathischer Ader in Mäusen vor. Die Sicherheit, Machbarkeit und das gewonnene Blutvolumen mit dieser Technik werden vorgestellt und diskutiert.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dieser Bericht stellt eine Erweiterung der bisherigen Forschung über die Blutentnahme durch die subklavische Venenpunktion bei Ratten11dar. Da die Maus das am häufigsten verwendete Forschungstier ist, wäre es wertvoll zu sehen, ob diese Technik auch auf Mäuse angewendet werden kann. Die Herausforderung ergibt sich aus dem relativ kleineren Durchmesser der subklavianischen Ader.
In der vorliegenden Forschung haben wir festgestellt, dass subklavische Punktion bei Mäusen ein praktikabler und zuverlässiger Weg ist, Blut zu sammeln. Im Vergleich zu den herkömmlichen Methoden wie Schwanzvenerschnitt oder orbitale Blutentnahme gibt es keine ethischen Fragen der gegenwärtigen Methode. Alle Tiere überlebten nach diesem Eingriff ohne flüssige Nahrungsergänzungsmittel nach rund 200 μL Blutentnahme, und die Tiere konnten für weitere experimentelle Untersuchungen verwendet werden. Theoretisch konnte die gesamte Probenvolumenextraktion nicht mehr als 10% des gesamten zirkulierenden Blutvolumens jedes Mal erreichen und das Gesamtvolumen eines erwachsenen Tieres beträgt 55 bis 70 mL/kg Körpergewicht5. Für die Mäuse, die bei dieser Forschung eingesetzt werden (21,6-28,3 g), sollte die maximale Volumenextraktion bei etwa 200 μL liegen. Wir haben also die Blutentnahme für jede Maus auf etwa 200 μL festgelegt. Die Unfähigkeit, Blutdruck, Herzfrequenz und andere Stressparameter zu messen, sind die Haupteinschränkungen dieses Berichts.
Eine ausreichende Vollnarkose ist ein weiteres wichtiges Thema, um den Erfolg der Punktion zu garantieren. Die Mäuse sollten während des Punktionsvorgangs ruhig bleiben, um das Risiko einer Verletzung des Gefäßes durch die Nadel zu vermeiden. Wir fanden heraus, dass Pentobarbital-Natrium bei 60 mg/kg für die Vollnarkose die ideale Anästhesietiefe erfüllen kann. Eine Kehrseite dieses Wirkstoffs ist die relativ lange Erholungszeit (durchschnittlich etwa 30 Minuten). In einigen Instituten wird die Iofluran-Inhalation für die kurze Genesungszeit verwendet und sollte als alternative Anästhesie-Wahl15in Betracht gezogen werden.
Der Ort der subklavianischen Ader ist in Abbildung4 dargestellt. Durch die dünne Wand und den niedrigen Druck in der Vene würde sich die vordere und hintere Wand der subklavianischen Vene unter dem Druck einer Nadel aneinander kleiden, während sich die Nadel vorwärts bewegt (Abbildung 5A). Während der Kolben langsam nach hinten gezogen wird, trennen sich die angeschlossenen Wände spontan, und die Nadelspitze könnte unter anhaltendem negativen Druck in die Spritze abfließen (Abbildung 5B). Die Verwendung eines Vakuum-Blutes 16 könnte auch die Blutentnahme begünstigen. Durch den relativ geringen Durchmesser der Mäuse subklavischer Ader kann es auch bei einem erfahrenen Bediener zu Ausfällen kommen. Für einen Anfänger empfehlen wir subclavianische Venenpunktion bei Ratten, wie berichtet11. Nach mehreren erfolgreichen Punktionsversuchen bei Ratten konnte die Erfolgsrate der subklavianischen Venenpunktion bei Mäusen deutlich gesteigert werden. Achten Sie darauf, dass der exakte Punktionsort nur kaudal bis zur Mitte des Clavic-Knochens ist. Die Nadel, die sich nach oben und Schädel zur überlegenen sternalen Fossa bewegt, sind weitere wichtige Punkte, um eine erfolgreiche Punktion zu gewährleisten.
Abschließend möchte ich sagen, dass die subklavianische Venenpunktion eine sichere und wirksame Methode zur Blutentnahme bei Mäusen ist. Neben dem Schneiden von Schwanzvenen und der Retro-Orbital-Plexus-Blutentnahme ist diese Methode machbar, sicher und geeignet für Beobachtungsuntersuchungen an mehreren Zeitpunkten bei Mäusen.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch das Stipendium der National Natural Science Foundation of China Nr. 81670269, Nr. 81500355 und Nr. 81500226 unterstützt.
Materials
| 1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| 75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
| adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
| canvas gloves | for anesthesia | ||
| electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
| epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
| heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
| mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
| needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
| pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
| physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
| stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
| tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C | |
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