Hier presenteren we gedetailleerde instructies over hoe te bouwen en te kalibreren onderzoek kwaliteit ceptometers (licht sensoren die lichtintensiteit te integreren in vele sensoren lineair gearrayd langs een horizontale balk).
Ceptometry is een techniek die wordt gebruikt om de overbrenging van fotosynthetisch actieve straling door een installatie luifel te meten gebruikend veelvoudige lichte sensoren die parallel op een lange staaf worden aangesloten. Ceptometry wordt vaak gebruikt om eigenschappen van luifel structuur en lichte interceptie te concluderen, met name Leaf Area index (LAI) en effectieve plant area index (PAIeff). Wegens de hoge kosten van commercieel beschikbare ceptometers, is het aantal metingen dat kan worden genomen vaak beperkt in ruimte en tijd. Dit beperkt het nut van ceptometry voor het bestuderen van genetische variabiliteit in lichte interceptie, en verzet zich tegen een grondige analyse van, en correctie voor, biases die kan scheef metingen afhankelijk van het tijdstip van de dag. We ontwikkelden continu logging ceptometers (de zogenaamde PARbars) die kunnen worden geproduceerd voor USD $75 per stuk en leveren kwalitatief hoogwaardige gegevens vergelijkbaar met commercieel beschikbare alternatieven. Hier bieden we gedetailleerde instructies over hoe te bouwen en kalibreren PARbars, hoe ze te implementeren in het veld en hoe te schatten PAI van de verzamelde gegevensoverdracht. Wij bieden representatieve resultaten van tarwe luifels en bespreken verdere overwegingen die moeten worden gemaakt bij het gebruik van PARbars.
Ceptometers (lineaire arrays van lichtsensoren) worden gebruikt voor het meten van het aandeel van fotosynthetisch actieve straling (PAR) onderschept door planten luifels. Ceptometers worden op grote schaal gebruikt voor agrarisch gewas onderzoek als gevolg van de relatief eenvoudige aard van de metingen en de eenvoud van de interpretatie van gegevens. Het basisprincipe van ceptometry is dat de overbrenging van licht aan de basis van een installatie luifel (τ) van het geprojecteerde gebied van licht absorberende hierboven materialen afhankelijk is. De metingen van pari boven en onder de luifel kunnen, daarom, worden gebruikt om luifel trekken zoals de index van het blad gebied (LAI) en de efficiënte index van de installatie gebied (PAIeff) te schatten (die stammen, halmen en reproductieve structuren naast bladeren omvat)1 ,2,3. Betrouwbaarheid van PAIeff schattingen afgeleid van τ is verbeterd door het modelleren van de effecten van de bundel Fractie van inkomende par (fb), het blad absorptance (a) en de effectieve luifel extinctiecoëfficiënt (K ); K, op zijn beurt, hangt af van zowel de zonne-Zenith hoek (θ) en de bladhoek verdeling (χ)1,4,5,6. Het is een gangbare praktijk om te corrigeren voor deze effecten. Echter, er zijn andere vooroordelen die niet hebben ontvangen gepaste aandacht in het verleden als gevolg van methodologische en kosten beperkingen.
We hebben onlangs geïdentificeerd significante tijd-afhankelijke bias in momentane ceptometry metingen van de rij gewassen, zoals tarwe en gerst7. Dit bias wordt veroorzaakt door een interactie tussen rij het planten oriëntatie en zonne Zenith hoek. Om dit vooroordeel te overwinnen, kan het onophoudelijk registreren ceptometers in het gebied worden opgezet om dagelijkse cycli van luifel lichte onderschepping te controleren en dan dagelijks gemiddelden van τ en Paieff kan worden berekend. Nochtans, zijn de ononderbroken metingen vaak onhaalbaar wegens de onbetaalbare hoge kosten van commercieel beschikbare ceptometers-vaak verscheidene duizend dollars van de V.S. voor één enkel instrument-en de eis ten aanzien van metingen van vele gebieds percelen. De laatstgenoemde is bijzonder duidelijk in de-omics era waar vele honderden genotypen voor genomische analyses, zoals genoom brede verenigings studies (GWAS) en genomische selectie (GS) worden vereist (voor overzicht zie Huang & Han, 20148). Wij erkenden dat er behoefte was aan kosteneffectieve ceptometers die in grote aantallen geproduceerd zouden kunnen worden en gebruikt worden voor continue metingen over vele genotypen.
Als een oplossing, we ontworpen gemakkelijk te bouwen, hoge-nauwkeurigheid ceptometers (PARbars) tegen een kostprijs van USD $75 per eenheid en die ongeveer een uur van de arbeid te construeren. PARbars zijn gebouwd met behulp van 50 fotodiodes die gevoelig zijn alleen in de PAR golfband (golflengtes 390 – 700 nm), met zeer weinig gevoeligheid buiten dit bereik, wegnemen het gebruik van dure filters. De fotodiodes zijn parallel verbonden over een lengte van 1 m om een geïntegreerd differentieel spanningssignaal te produceren dat met een datalogger kan worden opgenomen. Het circuit is ingekapseld in epoxy voor waterdichtheid en de sensoren opereren over een groot temperatuurbereik (-40 tot + 80 ° c), waardoor de PARbars worden ingezet in het veld voor langere tijd. Met uitzondering van de fotodiodes en een lage-temperatuur-coëfficiënt weerstand, alle onderdelen die nodig zijn om een PARbar te bouwen kan worden gekocht bij een hardware winkel. Een volledige lijst van benodigde onderdelen en gereedschappen is opgenomen in de tabel van materialen. Hier presenteren we gedetailleerde instructies over hoe te bouwen en te gebruiken PARbars voor de schatting van PAIeff en de huidige representatieve resultaten van tarwe luifels.
De succesvolle implementatie van het protocol dat hier voor de bouw van ceptometers (PARbars) wordt geschetst hangt het meest gevoelig op twee stappen af: 1,5 (het lijmen fotodiodes in plaats) en 1,6 (solderende fotodioden aan de koperdraad). Stap 1,5 is gevoelig voor fouten door het uitlijnen van de fotodiodes ten onrechte met betrekking tot hun intrinsieke polariteit. Voor de fotodiodes die wij gebruikten, en die wij als essentiële specifieke punten adviseren, wordt de polariteit geïdentificeerde op grond van de twee elektro schakelaar lusjes op de diode die duidelijk verschillende grootte heeft. Dus, voor het aanbrengen van Cyanoacrylaat lijm en solderen van de fotodiodes op zijn plaats, is het sterk aangeraden om te controleren of alle diodes worden geplaatst met de grote connector tabbladen geconfronteerd in een richting en de kleine tabbladen geconfronteerd in de andere richting. Stap 1,6 is gevoelig voor falen als gevolg van slechte solderen techniek en de vorming van een koude gesoldeerd kruispunt. Dit kan worden vermeden door het toepassen van dunne soldeer Flux met behulp van een flux pen onmiddellijk vóór het solderen en ervoor te zorgen dat zowel de draad en de fotodiode tabblad worden verwarmd met de soldeer tip (op ongeveer 350-400 oC) voordat solderen zelf wordt toegepast op de Junction. Problemen met elektrische aansluitingen in een PARbar meestal manifesteren in de vorm van een kalibratie helling duidelijk verschillend van die van andere PARbars. Dergelijke problemen kunnen vroeg worden gevangen door het testen van elke elektrische verbinding tijdens de bouw (zoals beschreven in stap 1,6), en opnieuw nadat alle aansluitingen zijn gesoldeerd, maar voordat ze zijn ingekapseld in epoxy (stap 1,9). Een derde potentiële bron van fouten komt voort uit het niet gebruiken van een lage temperatuur-coëfficiënt precisie weerstand, waarvan de weerstand is ongevoelig voor temperatuur; met behulp van een gewone weerstand zal de fout veroorzaken als het verzet, en dus de spanning per eenheid van het licht geabsorbeerd door de diodes, veranderingen met omgevingstemperatuur. De laatste belangrijke bron van fouten is niet uniek voor PARbars, maar geldt voor alle ceptometry metingen: namelijk, de gevolgtrekking van effectieve plant gebied index of Leaf Area index van licht te vangen is afhankelijk van de kenmerken van de luifel structuur (met name mean Leaf absorptance en bladhoek verdeling; a en c in Eqns 1 en 2) die kunnen variëren tijdens de ontwikkeling van de plant en tussen genotypen.
Er zijn twee belangrijke gebieden waarop het hier beschreven protocol kan worden gewijzigd of aangepast. Ten eerste, de PARbars die we hier presenteren zijn speciaal ontworpen voor gebruik in de rij gewassen, zoals tarwe en gerst, maar het ontwerp kan gemakkelijk worden aangepast voor andere toepassingen. Bijvoorbeeld, zou een shunt weerstand met grotere weerstand kunnen worden gebruikt om aanwinst (mV output per eenheid pari) bij lagere pari waaiers te verbeteren. Voor veelzijdigheid, een lage-temperatuur coëfficiënt precisie potentiometer (variabele weerstand) kan worden gebruikt om de PARbar gevoeligheid bereik te wijzigen als nodig is of om kleine aanpassingen te maken om te winnen, zodat elk van de vele PARbars hebben identieke kalibratie hellingen. Ten tweede, de fotodiodes kunnen ook individueel worden gebruikt als Quantum sensoren, waardoor de gebruiker te vangen ruimtelijke en temporele variatie binnen individuele Luifels voor een veel lagere kosten dan mogelijk met behulp van commercieel verkrijgbare Quantum sensoren. Dit kan bijzonder waardevol zijn gezien de groeiende belangstelling voor dynamische fotosynthese onder fluctuerende lichtomstandigheden12. Ten derde, hoewel we gebruik gemaakt van een conventionele (en dure) datalogger voor de gegevens die in deze studie, is er ruimte voor dataloggers in plaats daarvan worden gebouwd met behulp van off-the-shelf componenten, waardoor de oprichting van een gecombineerde ceptometry en datalogger systeem op een beperkt budget. De populariteit van zogenaamde Maker platforms, zoals Arduino en framboos Pi, biedt grote belofte op dit gebied aan; Wij stellen voor de open-source Arduino op basis van Cave Pearl project13 als een starter voor verdere ontwikkeling. Cave Pearl dataloggers werden ontworpen voor het milieumonitoring van de grot ecosystemen, dus robuustheid en een laag vermogen vraag waren belangrijke overwegingen in hun ontwerp. Soortgelijke overwegingen zijn relevant voor de uitvoering van de plant fenotype werk. Cave Pearl datalogger componenten zijn goedkoop (minder dan USD $50 per eenheid) en klein, waardoor ze direct kunnen worden opgenomen in PARbars.
Toepassing van de hier beschreven PARbars gezichten drie belangrijke beperkingen. Ten eerste, de gevolgtrekking van de plant gebied index of blad gebied index van gemeten licht vangen wordt belemmerd door een sterke tijd-afhankelijke biases, met name in de rij gewassen7. Dit kan worden overwonnen door het maken van herhaalde of continue metingen over een dag. Ten tweede, goedkope fotodiodes hebben geen spectrale output die precies evenredig is aan foton flux (de variabele van de grootste belangstelling voor fotosynthese onderzoek). Dit kan bias veroorzaken wanneer de lichte kwaliteit zeer door een luifel verandert, hoewel de vorige ramingen van de resulterende fout erop wijzen dat het op de orde van een paar percenten7is. Ten derde, PARbars kan geen onderscheid maken tussen de directe straal en diffuse componenten van inkomende PAR boven de luifel. Zoals diffuse straling dieper doordringt in de luifel dan direct zonlicht14, zal de overbrenging worden verhoogd en Paieff zal worden onderschat als de diffuse Fractie van de totale straling stijgt. Wanneer alle straling diffuus is, is PAIeff direct evenredig met de logaritme van 1/τ in plaats van de relatie getoond in vergelijking 115. Cruse et al. (2015) 16 merkte op dat momenteel beschikbare commerciële instrumenten die kunnen meten directe en diffuse par zijn duur en vereisen regelmatig onderhoud, zodat ze ontwierp een eenvoudig en goedkoop apparaat om dit probleem aan te pakken. Hun systeem bestaat uit een Quantum sensor die routinematig wordt gearceerd door een gemotoriseerde, bewegende shadowband en zorgt voor continue meting van de totale, directe en diffuse PAR. De sensor gebruikt in de Cruse et al. 16 het systeem zou met de zelfde fotodiode kunnen worden vervangen die in PARbars wordt gebruikt om kosten verder te verminderen en kan gemakkelijk in de bestaande PARbar opstelling worden opgenomen. Deze metingen kunnen worden geïntegreerd in de gegevensverwerkings pijplijn en zouden de betrouwbaarheid van de ramingen van PAIeffverder vergroten.
Het grote voordeel van PARbars ten opzichte van bestaande commerciële ceptometers is hun lage kosten, waardoor het haalbaar is om ze te produceren in grote aantallen. Onlangs is er een groeiende belangstelling voor nieuwe high-throughput plant fenotype technologieën voor de schatting van de luifel eigenschappen (voor de herziening zie Yang et al., 201717). Hoewel deze methoden zijn veelbelovend in dat ze produceren enorme hoeveelheden gegevens ze zijn meestal zeer indirect en vereisen validatie tegen conventionele technieken. PARbars kan dienen als een kosteneffectieve, op de grond gebaseerde validatie tool voor deze nieuwe technieken.
De lage productiekosten van PARbars maken hen ook een haalbare optie voor ononderbroken metingen in het gebied. Dit kan nuttig zijn om verschillende redenen. Continue metingen kunnen bijvoorbeeld worden gebruikt om rij-oriëntatie-biases te karakteriseren om tijdspecifieke correctiefuncties te ontwikkelen voor momentane metingen (voor meer informatie zie Salter et al. 20187). Continue ceptometry kan ook vastleggen korte schommelingen in de luifel licht vast te leggen in de tijd (sunflecks en shadeflecks) veroorzaakt door wolken passeren overhead, beweging van de luifel, enz. Fotosynthese is bekend dat zeer gevoelig zijn voor kleine veranderingen in de omgevingsomstandigheden en ‘ dynamische ‘ veranderingen in de fotosynthese worden nu gedacht dat het belangrijk in het rijden gewasopbrengst (voor de herziening Zie Murchie et al., 201812). PARbars geïnstalleerd in het veld met een voldoende korte logging interval kan worden gebruikt om deze korte schommelingen vast te leggen en een beter begrip van de dynamische aard van de plant luifels te bieden.
The authors have nothing to disclose.
De auteurs willen bedanken Dr Richard Richards en Dr shek Hossain op CSIRO, landbouw, en voedsel voor de toegang tot en het beheer van het veld percelen gebruikt voor dit onderzoek. Dit onderzoek werd ondersteund door de internationale tarwe yield partnerschap, door middel van een subsidie die door de korrels onderzoek en ontwikkeling Corporation (US00082). TNB werd gesteund door de Australische Raad voor onderzoek (DP150103863 en LP130100183) en de National Science Foundation (Award #1557906). Dit werk werd gesteund door het nationale Instituut van USDA van voedsel en landbouw, de projecten 1016439 en 1001480 van het broedsel.
1.5 Ω low temperature coefficient precision resistor | TE Connectivity Ltd., Schaffhausen, Switzerland. | UPW25 series | Could be made using multiple larger resistors in parallel but they need to have low temperature coefficient (i.e. ± 3 ppm/°C). URL for commercial source: https://bit.ly/2DFuPpm |
Acrylic diffuser | Plastix Australia Pty. Ltd., Arncliffe, NSW, Australia. | 445 – Opal White | 1200 mm length x 30 mm width x 4.5 mm thick. URL for commercial source: https://bit.ly/2Bq0fyc |
Aluminum U-bar | Capral Ltd., Bundamba, QLD, Australia. | EK9160 | 1220 mm length x 35 mm width x 25 mm depth. URL for commercial source: https://bit.ly/2PPfJou |
Bare solid core copper wire | Non-specific part | ||
Bolts | Non-specific part | ||
Clamps | Non-specific part | ||
Clear epoxy potting resin | Solid Solutions, East Bentleigh, VIC, Australia. | 651 – Universal Epoxy Potting Resin | Clear epoxy resin for electrical applications. URL for commercial source: https://bit.ly/2qY0pHa |
Cyanoacrylate glue | Non-specific part | ||
Datalogger | Campbell Scientific, Logan, Utah, USA. | CR5000 | Other dataloggers that record differential voltages could be used. URL for commercial source: https://bit.ly/2U7Io5H |
Drill or drill press | Non-specific part | ||
Glue lined heat shrink | Non-specific part | ||
Heat gun | Non-specific part | ||
LED torch | Non-specific part | ||
Masking tape | Non-specific part | ||
Photodiodes (50) | Everlight Americas Inc., Carrollton, Texas, USA. | EAALSDSY6444A | It is important that this specific component is used due to spectral response. URL for commercial source: https://bit.ly/2FzVnuH |
Polyurethane foam filler | Non-specific part | ||
Quantum sensor | LI-COR, Lincoln, Nebraska, USA. | LI-190R | For calibration of PARbars only. URL for commercial source: https://bit.ly/2HEfKbh |
Screwdrivers | Non-specific part | ||
Silicone sealant | Non-specific part | ||
Solder | Non-specific part | ||
Solder flux pen | Non-specific part | ||
Soldering iron | Non-specific part | ||
Spirit/bubble level | Non-specific part | ||
Tap and die set | Non-specific part | ||
Two-core cable | Non-specific part | ||
Voltmeter | Non-specific part | ||
Waterproof connectors | Core Electronics, Adamstown, NSW, Australia. | ADA743 | 2 core waterproof connector. DC power connectors work well. URL for commercial source: https://bit.ly/2Brcrik |