Radikal Prostatektomi Sonrası Erektil Disfonksiyon Tedavisinde Yağ Kaynaklı Rejeneratif Hücrelerin İzolasyonu

Protokolde açıklanan tüm yöntemler Danimarka Ulusal Etik Komitesi (No. 37054), Danimarka Sağlık ve İlaç Kurumu (EUDRA-CT numarası 2013-004220-11) ve Danimarka Veri Koruma Ajansı (2008-58-0035) tarafından onaylanmıştır. Çalışma ClinicalTrials.gov’de (NCT02240823) kaydedildi. Çalışma, Odense Üniversitesi Hastanesi’ndeki İyi Klinik Uygulamaları (GCP) birimi tarafından izlenen Helsinki Deklarasyonu’na uygun olarak gerçekleştirilmiştir. ADRC hazırlığı, Odense Üniversitesi Hastanesi’nde insan dokularının ve hücrelerinin taşınması için yetkili bir doku kuruluşunda gerçekleştirilmiştir (Danimarka Sağlık ve İlaç Kurumu, Yetkilendirme no. 29035). 1. Hasta/katılımcı alımı Çalışmaya katılmak, aşağıdaki dahil etme kriterlerini yerine getiren hastaları işe almak. 18 yaşın üzerinde, RP’den önce cinsel olarak aktif olan ve cinsel yolla bulaşan hastalıklarla enfekte olmayan hastaları işe alın, örneğin insan immün yetmezlik virüsü enfeksiyonu, sifiliz veya hepatit. Prostat kanseri nedeniyle yapılan bir RP’den sonra erektil disfonksiyondan muzdarip olduklarından emin olun.NOT: Bu çalışmada, hastalar RP’den 5-18 ay sonra çalışmaya dahil edildi ve cerrahi yöntemden bağımsız olarak dahil edildi: açık / robotik yardımlı veya sinir bozucu / sinir dışı. Prostat spesifik antijenin (PSA) değerinin RP sonrası klinik takipte saptanamadığından emin olun. Hastaların RP’den önce cinsel olarak aktif olduklarından ve RP’den sonra cinsel olarak aktif kalma isteğini ifade ettiklerinden emin olun. Katılmadan önce fosfodiesteraz tip 5 inhibitörü (PDE5 inhibitörü) veya sentetik bir prostaglandin E1 analoğu (PGE1) ile farmakolojik müdahalenin denendiğinden ve yetersiz kabul edildiğinden emin olun. Ayrıca, hastaların karın veya uyluk üzerinde yeterli deri altı yağına sahip olduklarından emin olun. RP sırasında anestezi altında ciddi olaylar varsa veya antikoagülanlarla tedavi edilmişlerse, hastaları denemeden hariç tutun. 2. Liposuction NOT: Liposuction, deri altı bölgesinden yağ veya lipositlerin uzaklaştırıldığı bir operasyondur. Protokolün bu kısmı standart bir liposuction olarak gerçekleştirilir ve prosedür steril koşullar altında bir ameliyathanede gerçekleştirilir. İşlem kapsamında kullanılan tüm aletler steril olmalı ve cerrah kese, steril cerrahi elbise, steril eldiven, cerrahi maske ve şapka giymelidir. Hastayı uyuşturun. İşlem sırasında hastanın genel anestezi altında olduğundan ve bu bölümün bir anestezi uzmanı tarafından yapıldığından emin olun. Karın ve skrotum derisini% 0.5 klorheksidin ile dezenfekte edin (kloreksidin ruhu,% 96 etanol ilaçlı klorheksidin diglukonat% 77 W / W =% 83 v / v). Karın üzerindeki bölgeleri çizmek için cerrahi bir belirteç kullanın, liposuction yapılacaksa. Alan genellikle simfiz ve göbek arasındaki alan olacaktır. Bir neşter ile karın derisinde 6 mm genişliğinde iki kesi yapın (11 numara). Kesileri liposuction’ın yukarı çekilmiş bölgesinden simetrik ve lateral olarak yerleştirin. İnfiltrasyon kanülünün liposuction sırasında insizyonların içine ve dışına kolayca kaydığından emin olmak için insizyonlara petrol jölesi gibi bir miktar yağlayıcı koyun. Ciltteki kesilerden 14 G boyutunda bir infiltrasyon kanülü sürün. Modifiye Kleins solüsyonunu deri yüzeyine paralel işaretli bölgelere deri altından enjekte edin. Çözeltinin o kadar çoğunu enjekte edin ki, hedeflenen doku şişmiş ve sertleşmiş veya tümörlü hale gelir.NOT: Modifiye Kleins çözeltisi, 1.000 mL Ringers laktat ve 1 mg adrenalin (epinefrin (1:1.000.000)) çözeltisinden oluşur. ADRC’ler üzerinde olumsuz bir etkisi olabileceğinden, lokal anesteziyi çözeltiye bağlamayın. Yağ dokusuna 1: 1 oranına karşılık gelen bir miktar modifiye Kleins çözeltisi enjekte edin. Adrenalinin etkisini en üst düzeye çıkarmak ve hasat edilen yağ dokusundaki kan miktarını azaltmak için 10 dakika bekleyin. 200-300 mL yağ dokusunu toplamak için jet infüzyon liposuction kullanarak standart bir liposuction yapın. Bir infüzyon tüpü ve bir nozulun entegre edildiği içi boş künt kanüller kullanın. Liposuction için kanülü bir emme cihazına takın.NOT: Sürekli fan şeklindeki su infüzyonu, yağ dokusunu kanüldeki açıklıktan kolayca emilebilen parçalara gevşetir. Karın üzerindeki kesilerden künt uçlu 3 mm’lik bir şırınga sokun. Lipoaspiratı steril bir ortamda korumak için yağ dokusunu bir lipo-toplayıcıda toplayın. Lipoaspirat su fazından ayrılmaya başlayacaktır. Lipoaspiratı lipo-kollektörden emmek için 50 mL steril şırıngalar kullanın. Şırıngalarda emilen suyun hacmini en aza indirin ve yağ dokusunu steril tutmak için şırıngaların ucundaki bir fişe vidalayın. Lipoaspiratın su fazından ayrılmasını başlatmak için ucu aşağı doğru olan şırıngaları steril bir plastik torbaya yerleştirin. Ayırmaya devam etmek için torbayı steril bir kaba koyun, uçları aşağı bakacak şekilde yerleştirin. Taşıma sırasında steril ortamı güvence altına almak için kabı steril örtü ile örtün.NOT: İzolasyon için kullanılan makinenin kullanım kılavuzuna göre, lipoaspirat, ADRC’lerin izolasyonundan önce maksimum 4 saate kadar saklanabilir, ancak her zaman hemen işleriz. Cilt kesilerini cerrahların tercih ettiği dikiş materyali ile kapatın. Postoperatif ödemi azaltmak için karın çevresine bir kompresyon giysisi, bir karın bağlayıcı yerleştirin. 5 μg adrenalin içeren 20 mL bupivakain 5 mg / mL enjekte ederek bir penis bloğu yapın. 20 mL’lik bir şırınga kullanın ve 1 1/4 inç uzunluğunda 23 G iğne ile uygulayın. Subkutisteki her kadrana 5 mL bupivakain uygulayın. Bupivakaini iki bölgeye enjekte edin, biri ventral, diğeri dorsal olarak yerleştirilir. İğneyi boyunun tamamında, iğneyi yanal olarak sağa doğru işaret eden deri altı dokusuna sokun ve iğne geri çekilirken anesteziyi enjekte edin. İğneyi sola işaret eden enjeksiyonu tekrarlayın.NOT: Hasta artık anestezi uzmanı tarafından genel anesteziden uyandırılabilir. 3. ADRC’lerin izolasyonu NOT: ADRC’lerin izolasyon işlemi, cihazı takip eden kullanım kılavuzunda ayrıntılı olarak açıklandığı gibi gerçekleştirilir (bkz. ADRC’lerin saflaştırılması sırasında lipoaspiratın herhangi bir kirleticiye maruz kalmamasını sağlamak için prosedürün steril koşullar altında yapılması önemlidir. ADRC’lerin izolasyonu için geçen süre, lipoaspiratın hacmine bağlıdır, ancak burada açıklandığı gibi yarı otomatik cihaz kullanılarak tüm prosedür yaklaşık 2.5 saat sürecektir. Tüm sarf malzemelerini ve enzimleri aseptik olarak steril tek kullanımlık cerrahi havlu ile kaplı bir masaya yerleştirin.NOT: Bir prosedür kiti, ADRC’lerin bir hastadan izole edilmesi için gerekli tüm sarf malzemelerini ve enzimleri içerir. Bunun yanı sıra, üç adet 37-39 °C, bir litrelik Laktasyonlu Zil infüzyon torbası, steril giysiler, eldivenler ve havlular ve dezenfeksiyon için etanol ile birlikte mevcut olmalıdır. Tüm sarf malzemesi ve enzim lot numaralarını ve ayrıca sisteme bağlandığında Laktasyonlu Zillerin sıcaklığını not edin. Cihazı etanol ile silin ve üreticinin talimatlarını izleyin Sarf malzemesi setini cihaza yükleyin ve sisteme bir torba Laktasyonlu Zil bağlayın. Lipoaspiratı eklemeden önce bir dizi yarı otomatik testi (sistem kontrolü ve sızıntı testi) gerçekleştirin. 3.1’deki adımlar gerçekleştirilirken lipoaspiratın 50 mL tüplerde durmasına izin verin. Bu, yağın sıvı fazdan ayrılmasını sağlayacaktır. Toplam yağ dokusu miktarını (mL cinsinden) not edin ve yüklenen yağ miktarının cihaz kapasitesi aralığında olmasını sağlamak için bunu kullanın. Cihaz tarafından istendiğinde dokuyu yükleyin. Makine artık fazla sıvıyı boşaltacak ve Laktasyonlu Halkalar ile yıkanmadan önce yüklenen yağ dokusu miktarını tartacaktır. Doku tekrar yıkanıp boşaltıldığında, makine tarafından istendiğinde 37-39 °C Laktasyonlu Zillerle yeni bir infüzyon torbası bağlayın. 5 mL Laktasyonlu Halkalarda kollajenaz ve proteaz karışımı içeren ticari olarak temin edilebilen enzimi yeniden oluşturur (270 mL’ye kadar yağ miktarları için bir şişe enzim yeterlidir). Cihazın, yağ dokusu ile teneke kutuya enjekte edilecek enzim miktarını (doku ağırlığına bağlı olarak) gösterdiğinden emin olun. Enjekte edildikten sonra, ajitasyon altında gerçekleştirilen enzimatik sindirim yaklaşık 20 dakika sürecektir. Doku sindiriminden sonra, karıştırıcının durmasına izin verin ve içeriğin iki faza ayrıldığını kontrol edin: üst lipit içeren, sarı faz ve ADRC’leri içeren alt pembe bir tabaka. İkinci katmanın, lipit tabakasını geride bırakırken, sarf malzemesi setinin hücre işleme odasına (cihazın yerleşik santrifüjüne giden) boşaltılmasına izin verin. ADRC’lerin birden fazla santrifüjleme turu sırasında hücre işleme odasında yoğunlaşmasına izin verin. Şimdi Laktasyonlu Halkalarda yeniden oluşturulmuş 10 mL Intravaz (DNaz içerir, bu da son ADRC süspansiyonunda kümelenmeyi önlemeye yardımcı olur) ekleyin. Enzimatik reaksiyon 10 dakika sürer ve ardından ADRC’ler yıkanır.NOT: Bu adım tamamen otomatiktir ve işlem tamamlandığında makine bilgilendirilir. ADRC’lerin izolasyonu tamamlandığında, hücreleri 5 mL Ringer Laktat içinde yeniden askıya alın. Çözeltiyi 5 mL’lik bir şırıngaya aspire edin. ADRC’leri içeren 5 mL şırıngaya 3 yönlü bir stopcock dişi Luer-lock takın ve 4 mL ADRC’yi başka bir 5 mL steril şırıngaya aspire edin. Son 1 mL’yi 1 mL’lik bir şırıngaya aktarın. Bu 1 mL’yi ADRC karakterizasyonu için kullanın, örneğin hücre sayısı, hücre canlılığı, yüzey belirteçlerinin akış sitometrisi ile analizi ve ADRC farklılaşma yeteneği. Steril bir örtü içinde paketlenmeden önce 4 mL’lik ADRC’yi içeren 5 mL şırıngaya 25 G’lik bir iğne koyun. Alıcıya enjeksiyon için ADRC’leri kullanın. Bu durumda, ADRC’lerin çözeltisi ortalama olarak 8.4-32.7 milyon hücre içerecektir. 4. ADRC’lerin corpora cavernosum içine implantasyonu NOT: Bu steril bir prosedürdür. Tüm aletler steril olmalı ve kök hücreleri içeren çözeltiyi corpora cavernosum’a enjekte eden kişi steril eldiven giymelidir. Bu işlem sırasında hasta uyanıktır ve kendi kök hücrelerini alacaktır. ADRC’ler, enjeksiyondan önce hücreleri saymadan enjekte edilir. ADRC’lerin çözeltisini, şırıngayı corpora cavernosum’a enjekte edilene kadar hafifçe eğerek homojen tutun. Penis üzerine bir diyafram örtüsü yerleştirin. Silikon damar halkası kullanarak penisin köküne bir turnike yerleştirin. Döngüyü sıkın ve forseps kavisli bezelye ile sabitleyin. Turniketi penisten kan akışını durduracak kadar sıkı yapın. Penis derisini enjeksiyon bölgesinde (corpora cavernosum’un lateral bölgesi) dezenfekte etmek için iki antiseptik takas kullanın. ADRC’leri içeren çözeltinin 1 mL’sini, iki farklı yerde sağ taraftaki corpora cavernosum’a doğrudan bir açıyla enjekte edin, bu adımı daha sonra sol corpora cavernosum’da tekrarlayın. Enjekte edilen ADRC’lerin toplam hacmi 4 mL’dir. 30 dakika bekleyin ve ardından turnikeyi çıkarın. ADRC’lerin enjeksiyonundan sonra 2 saatlik gözlemden sonra hastayı taburcu edin, böylece anesteziyi takiben hastanın iyi iyileşmesini sağlayın. 5. Postoperatif bakım Hematom gelişimini önlemek için hastaya ilk hafta içinde kan basıncını yükseltebilecek herhangi bir fiziksel performans yapmamasını tavsiye edin. Hastaya karın bağlayıcısını ameliyattan sonraki ilk 14 gün 24 saat ve bundan sonra gündüz 14 gün boyunca takmasını tavsiye edin. Ameliyat sonrası ağrıyı oral asetaminofen (örneğin, parasetamol; 1.000 mg, günde 4 kez) ve oral anti-enflamatuar (örneğin, ibuprofen; günde 3 kez 400 mg) ile tedavi edin.