Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.
İskemik inme yetişkin uzun vadeli sakatlık ve ölüm dünya çapında önemli bir nedenidir. Mevcut tedaviler mevcut, sadece doku plazminojen aktivatör (ton) iskemik inme hedeflemek için bir onaylı uyuşturucu tedavi olarak ile sınırlıdır. İskemik inme alanında mevcut araştırma daha iyi geliştirmek ve yeni ilaç hedefleri araştırmak için kontur, patofizyoloji anlamayla ilgili odaklanır. Güvenilir deneysel kontur modelleri potansiyel tedaviler ilerleme için büyük önem taşımaktadır. Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) model klinik ve en sık kullanılan cerrahi modeli iskemik inme kemirgen. Ancak, lezyon cilt gibi bu modeli sonucunu değişkenliği, özellikle farelerde yüksek düzeyleri ile ilişkilidir. Burada açıklanan alternatif MCAO model reperfüzyon ortak karotid arter (CCA) ve fibrinojen-esaslı dolgu macunu ile gemi ve geliştirilmiş onarmak için bir doku panelini kullanma orta serebral arter (MCA) topraklarının artan perfüzyon sağlar refah farelerin dış karotid arter (ECA) ligasyonu kaçınarak. Bu da son derece anatomik olarak değişken farelerde olduğu bilinmektedir Willis daire üzerine güven azaltır. Bu alternatif cerrahi yaklaşım kullanarak geleneksel MCAO yaklaşım ve burada açıklanan alternatif yaklaşım arasında lezyon cilt değişkenliği azaltır temsilcisi verileri görüntüleyin.
Serebral felç bir büyük orta serebral arter ülkesinde odak iskemi nedeni. Doku plazminojen aktivatör (ton) çok sayıda klinik ilaç denemeleri için iskemik inme1,2hedeflenen rağmen kanıtlanmış etkinliği ile kullanılabilir sadece farmakolojik tedavi yöntemidir. Ancak, güvenlik endişeleri ve dar terapötik pencere (< 4.5 h), nedeniyle tüm inme hastalarında sadece % ~ 15 ton almak uygundur ve recanalization gore < %503,4olabilir.
Kontur tekrarlanabilir ve klinik hayvan modelleri yeni ve potansiyel felç tedavi tedaviler gelişimi bilgilendirmek için temel olarak kabul edilir. Ancak, tutarlılık ve değişkenlik hayvan modelleri ile sonuçları ile ilgili endişeleri nedeniyle klinik preklinik çalışmalar çeviri geliştirmek için varolan vivo içinde modelleri geliştirmek önemli kalır. Preklinik deneysel etkinlik klinik kullanım için çeviri potansiyel tedaviler eksikliği kontur araştırma5için devam eden bir konusudur. Çeviri başarısızlık nedenlerini birden fazla olması muhtemeldir ve ilgili olabilir Örneğin, deneme tasarım, tedavi gecikmeler, klinik kontur heterojenite, için ve hayvan modellerin sınırlarını6kullanılır. Kontur araştırma için anahtar bir meydan okuma güvenli ve etkili tedaviler gelişimi kalır.
Orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) intraluminal filaman ekleme tarafından deneysel darbesinin en sık kullanılan vivo içinde kemirgen modelidir. Bu model kan akımı restorasyon sonra insan kontur7‘ de meydana gelen olayları taklit eden bir iskemi indüksiyon sağlar. Ancak, özellikle farelerde, türdeş olmayan lezyon birimleri çeşitli standart sapmalar ile tanımlanan olsa bile uygulanan8,9,10cerrahi kurallarıdır oluşur. Biomodel dağılımı küçük striatal ve büyük striato-kortikal lezyon birimleri11görmek için normaldir. İskemi ikna etmek için filaman genellikle CCA veya kalıcı olarak ve birleştirilmiş12kalması ECA bir kesi eklenir. CCA kalıcı ligasyonu iç karotis arter (ICA) ve daha sonra MCA bölge kan akışına yeniden kurulması engeller. Bu reperfüzyon Willis daire (inek) içinde ikincil arz güvenen olmak neden olur. İnek yapısı bireysel hayvanlarda genellikle vivo içinde kontur araştırma13‘ te kullanılan özellikle C57BL/6 fareler bir zorlanma arasındaki anatomik değişkenlik vardır. Alternatif bir yöntem, ECA, aracılığıyla filaman ekleme CCA, ancak bu yöntem uzlaşma yoluyla devam eden perfüzyon arteryel kaynağı, fareler, hayvanın üzerinde zararlı bir etkisi olduğu gösterilmiştir ECA bölge izin vermez su kuyusu-varlık14.
İnek ikincil arz ve reperfüzyon kurulan MCAO modeli için güvenilmesi kısmen tıkanıklığı takip lezyon cilt değişkenliği için sorumlu olabilir. Biz burada ECA ligasyonu kaçınılması ve CCA kesi onarıldıktan, bir alternatif fare cerrahi böylece reperfüzyon CCA, inek bağımsız aracılığıyla izin açıklayınız. CCA kesi tamiri daha önce de, fareler ile CCA15başarılı bir reperfüzyon neden olduğu gösterilmiştir. Biz bu yaklaşımda fareler11 başarıyla uygulamış olan ve lezyon cilt, deneysel kontur çalışmalarda kullanılan ana sonuç ölçü azaltılmış bir değişkenlik sonuçlanır Protokolü rapor burada.
Bu protokol için reperfüzyon izin vermek için bir doku pad ve dolgu macunu uygulama içerir CCA gemi onarım tarafından takip CCA gemi filaman ekleme ile MCAO taahhüt nasıl gerçekleştirileceğini gösterir.
Bu, klinik iskemik inme7takip olayların taklit etkilenen bölge için reperfüzyon Rodents geçici MCAO filaman indüksiyon en sık kullanılan deneysel kontur modeli, önemlidir. Rapor burada filaman kaynaklı geçici MCAO farelerde geleneksel yöntem için alternatif bir cerrahi yaklaşımdır. Alternatif bir yaklaşım, analjezi tedavi, ECA ligasyonu kaçınma ve CCA kesi onarım, MRI ve histolojik boyama yöntemleri11kullanarak değerlendirirken bir azaltılmış LV değişkenlik sonuçlanır.
MCAO büyük ölçüde ikna etmek için geleneksel yaklaşımlar itimat transeksiyon, ya da en azından ligasyonu, fareler, içme davranışı ve vücut kilo kaybı MCAO14takip bir artış etkiler gösterilmiştir ECA nın. Burada, farelerde, ECA ligasyonu ve analjezi Ayrıca, kaçınma ile tanımlanan protokolü bir azalma vücut kilo kaybı MCAO lezyon cilt üzerinde hiçbir etkisi ile takip önerdi. Analjezi kullanımı önlenebilir veya en azından, deneysel sonuç olası karıştırıcı etkileri nedeniyle deneysel kontur çalışmaların çoğunda rapor değil. Ancak, analjezi tamamen kaçınarak değil her zaman haklı ve hayvan refah gereksinimlerini bilimsel hedefleri başarı ile dengelemek için bir ihtiyaç.
Hayvan boyutu, zorlanma ve filament varyasyonları, boyutu ve türü ek olarak serebrovasküler anatomi farklılıkları tüm kontur sonuçları23,24etkilemek için önerilmektedir. Burada açıklanan alternatif yaklaşım inek üzerinde güven böylece, en azından kısmen, lezyon cilt hayvanlarda arasında görülen değişkenlik azaltarak reperfüzyon sırasında önler. İnek anatomi farelerde, son derece değişken özellikle içinde C57BL / deneysel kontur çalışmalarda sık sık kullanılan6 zorlanma. C57BL/6 farelerin yüzde 90’ını iskemik hasar nedeniyle MCA bölge13, dışında yapıların yetersiz perfüzyon hacmi üzerinde bir etkisi olabilir bir çeşitli posterior iletişim arter (PcomA) açıklık, nedeniyle eksik bir inek var. 25. CCA farelerde, burada gösterildiği gibi tamir, üzerinden CCA iskemik alanına daha önce fareler15‘ te açıklandığı gibi kan yeniden kurulması sonuçlarında akışı. CCA kan akışında değil doğrudan ölçüldü rağmen temsilcisi veriler burada CCA tamiri reperfüzyon, arttığını göstermektedir. Ancak, proksimal ve distal onarım konuma bir nabız gibi atan ve tam duruma gövde boyunca döner CCA sağlanması gemi onarım takip kanla görselleştirmek cerrah mümkündür. Lazer Doppler flowmetry okumalar iskemik çevrenin birlikte bu görsel doğrulama başarılı onarım geminin onaylamak için kullanılabilir. Doku pad uygulamasını ve CCA gemi klipten kaldırılması arasındaki süreyi azaltmak belgili tanımlık zaman doku pad uygulamasını arasında olarak CCA, elde edilen açıklık üzerinde etkisi olabilir ve klip kaldırma-ecek önlemek belgili tanımlık doku yastık o kalarak CCA tarafında pposite. Her ne kadar teknik olarak zor, burada açıklandığı alternatif MCAO yordam bu farelerde MCAO cerrahi indüksiyon gerçekleştirmek için gereken ek herhangi bir beceri gerektirmez.
Geleneksel olarak yüksek değişkenlik sonucu önlemler ile ilişkili, deneysel kontur çalışmalar yeterince güçlü olmak bir eğilim olabilir. Ekonomik ve pratik endişeleri ile birlikte etik ve sosyal yardım gereksinimleri yeterince güçlü olmak çalışmalara katkıda bulunabilir. Sonuç değişkenliği azaltmak ve bu nedenle, bir deney grubu arasında daha tutarlı bir lezyon sonuçlar üreten, daha etkili güç hesaplamaları uygun şekilde desteklenmektedir varlık çalışmalar nihai amacı ile gerçekleştirilebilir.
Sonuç olarak, deneysel kontur takip lezyon cilt daha az değişkenlik farelerde, bu alternatif CCA onarım yordamı sonuçlanır ve ne zaman uygun bir tedavi etkisi test etmek için gerekli sağlar daha küçük deneysel grupları hesaplamalar güç kullanılır.
The authors have nothing to disclose.
Bu eser değiştirme, arıtma ve azaltma hayvanlar araştırma (NC3Rs; için Ulusal Merkezi tarafından finanse edildi CG için NC/M000117/1). Yazarlar bölümü, biyomedikal hizmetler, University of Leicester, personel deneysel hayvan ve Maria Viskaduraki onların bakımı için istatistiksel onu tavsiye için teşekkür ederiz. Temsilcisi sonuçları izniyle hastalık modelleri & mekanizmaları11adapte olmuşlardır.
0.7mm flexible single fibre optic probe | Moor Instruments, UK | P10d | Use with master probe code: VP10M200ST |
7-0 silicone coated monofilament | Doccol, USA | 701956PKRe | Item dependent on animal size and weight – use manufacteurer guidelines. Product code here was used for representative results shown in article. |
9.4T Preclinical MRI system | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | MY11520101 | Equipped with gradient and RF coils suitable for mouse brain imaging |
Animal monitoring and gating equipment | SA Instruments, Stony Brook, New York, USA | 22124005 | MRI compatible temperature and respiration monitoring |
Bupivacaine | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 512345 | Marcaine |
C57BL/6 Mice | Charles River, Oxford, UK | B6JSIMA49D | |
Carprofen | Norbrook Laboratories | 143658 | Carprieve 5% w/v Small animal solution for injection |
Chlorhexidine 4% hand cleanser solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | MOLN10008780 | HibiScrub Antimicrobial hand cleanser, Molnlycke Health Care |
Cotton buds | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 213512 | Any plastic body, cotton bud tip are suitable once made sterile by autoclaving. |
Dissecting stereoscope | Carl Zeiss | OPMI99 | Resident piece of equipment. Any binocular dissecting stereoscope capable of x1-x5 magnification will be suitable. |
dissolvable 6-0 sutures | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 9544 | Absorbable Sutures Ethicon Coated Vicryl 6/0 (Ethicon code: W9981) |
Donut probe holder | Moor Instruments, UK | PHDO | Probe holder for mouse, required to be used with single fibre optic probe when used with laser doppler flowmtry machine. |
dumont #5 forceps | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 500342 | |
Fibrinogen and thrombin sealant | Baxter, Berkshire, UK | 1502243 | TISSEEL Ready to use solutions for Sealant 2ml |
Gel food | Datesand group, Manchester, UK | 72065022 | Diet Gel Recovery |
Image display and measuring software package | 3D Slicer | https://www.slicer.org/ | Version 4.0 |
Image display and measuring software package | NIH, Maryland, USA | https://imagej.nih.gov/ij/index.html | NIH/ImageJ |
LDF monitor | Moor Instruments, UK | moorVMS-LDF | |
micro vannas scissors | InterFocus Ltd, Linton, UK | 15000-08 | Other microvannas spring scissors can be used as an alternative, although fine tips are required. |
Microvascular clip | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 15911 | 10 G Vessel Clip |
microvascular clip holders | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 14189 | |
MRI acquisition and analysis software | Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA | VnmrJ Version 4.2 | Revision A |
no. 15 scalpel | Scientific Laboratory Supplies, Nottingham, UK | INS4678 | Sterile No15 Scalpel – manufactuer number P305. Other suppliers are available. |
Non-disolvable 6-0 suture | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | W529 | Ethicon Mersilk Sutures |
Ocular lubricant | National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK | 847288 | Lacrilube (5100G13) |
Optical matching gel | Moor Instruments, UK | PMG | |
Pulse Oximetry Reader | Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA | MouseOx | MouseOx – rat & mouse pulse oximeter & physiological monitor Use with mouse thigh sensor. |
Rehydration gel | Datesand group, Manchester, UK | 70015022 | HydroGel |
Small hair clippers | vetproductsuk.com | HS61 | Contura Cordless trimmer/clippers |
Sterile 0.9 % NaCl Solution | VWR International Ltd, Lutterworth, UK |
LOCA3528286 | SODIUM CHLORIDE 0.9% W/V INTRAVENOUS INFUSION BP 500 ML IN ECOFLAC½ PLUS |
sterile petri dish | VWR International Ltd, Lutterworth, UK | 5168021 | 50mm sterile petri dish. Any brand is suitable. Minimum 50mm diameter is required. |
Topical tissue adhesive | World Precision Instruments, Hertfordshire, UK | 503763 | GLUture topical Tissue Adhesive |
Waterproof superglue | Loctite | Loctite Superglue Precision Max | Available at most hardware shops. |
White paper chip | Datesand group, Manchester, UK | CS1BPB | Pure-O'Cel |