Thrombose veineuse profonde induite par stase chez les souris surveillé par échographie de haute fréquence
Summary
Le présent protocole décrit les étapes pour obtenir une thrombose veineuse à l’aide d’un modèle de stase. En outre, nous utilisons une méthode non invasive pour mesurer la formation du thrombus et la résolution au fil du temps.
Abstract
La thrombose veineuse est une affection fréquente qui touche 1 à 2 % de la population, avec une incidence annuelle de 1 à 500. Thrombose veineuse peut mener à la mort par embolie pulmonaire ou de résultats dans le syndrome post-thrombotique, caractérisée par la douleur chronique de jambe, gonflement et ulcérations, ou dans l’hypertension pulmonaire chronique entraînant des chroniques respiratoires compromis. C’est la maladie cardiovasculaire plus répandue après infarctus du myocarde et accident vasculaire cérébral ischémique et constitue un défi clinique pour toutes les disciplines médicales, comme il peut compliquer le cours d’autres maladies comme le cancer, maladie systémique, chirurgie et traumatismes majeurs.
Modèles expérimentaux sont nécessaires pour étudier ces mécanismes. Le modèle de stase induit taille thrombus cohérente et un montant quantifiable de thrombus. Cependant, il faut systématiquement ligaturer les branches latérales de la veine cave inférieure afin d’éviter la variabilité de la taille du thrombus et de toute interprétation des données erronées. Nous avons développé une technique non-invasive pour mesurer la taille du thrombus à l’aide de l’échographie. En utilisant cette technique, nous pouvons imposer des thrombus développement et la résolution au fil du temps chez le même animal. Cette approche limite le nombre de souris nécessaire pour la quantification de la thrombose veineuse conforme au principe de remplacement, réduction et raffinement des animaux en recherche. Nous avons démontré que poids de thrombus et l’analyse histologique des thrombus taille en corrélation avec les mesures obtient avec l’échographie. Par conséquent, la présente étude décrit comment induire une thrombose veineuse profonde chez les souris en utilisant le modèle de stase de veine cave inférieure et sa surveillance en utilisant des ultrasons de haute fréquence.
Introduction
Thromboembolie veineuse (TEV), qui est composé de thrombose veineuse profonde (TVP) et l’embolie pulmonaire, est la troisième cause de décès d’origine cardiovasculaire après infarctus du myocarde et accident vasculaire cérébral. C’est une affection fréquente qui touche 1 à 2 % de la population, avec une incidence annuelle de 1 5001. VTE peut conduire à : 1) décès par embolie pulmonaire ; 2) syndrome post-thrombotique, caractérisé par une douleur chronique de jambe, gonflement et ulcérations ; ou 3) hypertension pulmonaire chronique entraînant importants compromis respiratoire chronique. VTE est une maladie multifactorielle et peut résulter de la stase de la circulation sanguine, dommages aux parois des vaisseaux, et/ou hypercoagulation États en raison d’une rupture de l’équilibre entre la coagulation et les systèmes fibrinolytiques, telle qu’elle a été décrite il y a plus de cent ans par Virchow et est connu comme la triade de la Rudolf Virchow.
Parce que dans la plupart des cas, il est impossible d’obtenir des échantillons humains de thrombose veineuse profonde, les chercheurs ont développé des modèles animaux expérimentaux de thrombose veineuse profonde. Plusieurs animaux dont rat2souris3, lapin4, porc5, chien6et primate non humain,7 ont été utilisés. Les souris peuvent être génétiquement modifiés et sont l’animal le plus souvent utilisé pour étudier la thrombose veineuse profonde. Toutefois, comme chez tous les animaux, DVT spontanée n’est pas observé chez les souris. Ainsi, des modifications physiques ou chimiques de la paroi veineuse sont utilisées pour créer la thrombose chez la souris. Nous avons déjà utilisé le modèle de chlorure ferrique pour thrombose de la veine cave inférieure (VCI) de souris8,9,10. Ce modèle a l’avantage de produire efficacement des thrombi occlusifs quelques minutes et peut être utilisé pour étudier le rôle des médicaments anticoagulants et antiplaquettaires au cours de la thrombose veineuse profonde aiguë. Cependant, c’est une procédure terminale. Ainsi, pour étudier la thrombose veineuse profonde aiguë et chronique, la stase est plus adapté. Dans ce modèle, la formation du thrombus est induite par l’interruption complète de la circulation sanguine dans la VCI, l’un des facteurs dans la triade de Virchow pour le développement de la thrombose veineuse profonde. Ce modèle peut être utilisé pour étudier la formation de la thrombose veineuse profonde et de la résolution, qui est un avantage par rapport à la FeCl3 modèle11.
Nous avons développé une méthode non invasive pour suivre la formation du thrombus et la résolution au fil du temps en utilisant un système de micro-imagerie haute fréquence ultrason12. Nous avons démontré précédemment que mesure de la thrombose veineuse par échographie est favorablement en corrélation avec thrombus obtenus à l’examen anatomo-pathologique. Dans deux études ultérieures, nous avons confirmé que les mesures obtenues par échographie en corrélation avec le poids du thrombus et zone de thrombus quantifié en histochimie9,10. Plus important encore, nous avons montré que les ultrasons haute fréquence peuvent être utilisé pour surveiller la formation d’une thrombose veineuse profonde en souris12. Il peut également servir à quantifier la résolution thrombus de façon non invasive.
Ici, nous allons décrire le protocole permettant la formation de thrombus en utilisant le modèle de souris de thrombose induite par la stase et comment la formation de thrombus peut être surveillée de façon non invasive au fil du temps en utilisant des ultrasons de haute fréquence.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il y a plusieurs étapes cruciales pour la formation du thrombus veineux avec succès en utilisant le modèle de stase. Induction de la thrombose veineuse profonde est plus difficile à des souris âgées en raison de l’accumulation de graisse autour de la veine cave inférieure et l’aorte. Idéalement, les souris subissant cette procédure devraient être 8 – âgés de 10 semaines. Il faut en grand ne pas d’induire des lésions endothéliales dans la VCI au cours de la dissection non tranchante et ligature. En out…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par une subvention de la Fondation canadienne des maladies du coeur et la Morris et Bella Fainman Family Foundation. Les auteurs tiennent à remercier Véronique Michaud pour son aide technique avec le système d’imagerie à ultrasons VEVO770.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
Riferimenti
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