Implantation cochléaire chez le cobaye

Toutes les expériences animales ont été approuvées par le Comité local de bien-être animal et le ministère fédéral autrichien des sciences, recherche et économie. 1. préparer le matériel et la configuration requise pour la chirurgie Positionner le microscope chirurgical, la foret, la plaque chauffante et pulse oxymètre pour permettre facile et efficace de manipulation pendant la chirurgie. Vérifiez le bon fonctionnement des dispositifs basés sur le manuel du constructeur. Assurez-vous que la plaque chauffante est fixée à 38 ° C afin de protéger l’animal d’hypothermie au cours de la chirurgie. Mettre sur une cagoule et un masque. Effectuer la désinfection chirurgicale main. Se laver les mains soigneusement avec du savon. Séchez-vous les mains et ensuite utilisez un désinfectant alcoolique pour désinfecter les mains. Mettez des gants en après que les mains soient sèches. Préparer les instruments chirurgicaux stérilisés et l’équipement requis pour l’implantation cochléaire. Voir la Table des matières pour les instruments chirurgicaux et l’équipement utilisé pour l’implantation de CI de cobaye dans le présent protocole. Lorsque des mesures de potentiel d’action composé (PAC) doivent servir, préparer un morceau d’environ 3,5 cm de long de fil d’or isolé téflon en enlevant soigneusement certaines parties de l’isolation des deux extrémités à l’aide d’une pince micro (environ 3 mm d’un bout et 5 mm de l’autre extrémité). Préparer un deuxième morceau de fil d’or (environ 2,5 cm) avec les extrémités non isolées d’environ 5 mm. Place les fils disposés dans l’alcool ou un désinfectant. 2. anesthésie, médicaments et préparation animaux Peser l’animal.NOTE : Les animaux utilisés est femelles cochons d’Inde albinos Dunkin-Hartley. Le poids des animaux utilisés, qui sont environ de 4 à 6 semaines, varie de 300 à 400 g. Préparer les anesthésiques et les médicaments nécessaires pour la chirurgie basée sur le poids de l’animal. Préparation de 0,72 mL du mélange anesthésique, consistant en la kétamine 0,06 mL (100 mg/mL), 0,18 mL médétomidine (1 mg/mL), 0,12 mL de midazolam (5 mg/mL) et 0,36 mL de fentanyl (50 µg/mL) pour une intervention chirurgicale sur un cobaye de 400 g. Voir le tableau 1 pour les doses basées sur le poids des anesthésiques. Injecter le mélange de kétamine, médétomidine, midazolam et de fentanyl par voie sous-cutanée à la grosse garniture dans le cou de l’animal à l’aide d’une aiguille de 27 G. Voir le tableau 1 pour poids basé doses des anesthésiques. Couvrez la cage et laisser l’animal dans un endroit calme pendant 10 min avant de procéder. Lubrifier les yeux de l’animal et gardez-les lubrifié pendant toute la procédure. Se raser la tête de l’animal, en se concentrant sur la région de rétroauriculaires afin de permettre un accès chirurgical suffit à la bulle tympanique. Placez l’animal sur la plaque chauffante en position couchée et assurez-vous que l’animal n’est pas en contact direct avec la plaque chauffante pour éviter les brûlures thermiques. Placez la sonde oxymètre de pouls sur un pied de l’animal. Ensuite, ouvrez délicatement la bouche de l’animal avec un laryngoscope petit et nettoyer que toute la cavité buccale des aliments incombe à l’aide d’une ventouse. Gardez la bouche de l’animal a ouvert avec le laryngoscope. Insérez avec précaution une sonde gastrique dans le œsophage de l’animal et le pousser lentement dans le sens de l’estomac jusqu’à sente une résistance. Surveiller l’O2-saturation de l’animal pour s’assurer que la sonde gastrique n’est pas dans la trachée. Retirez la sonde gastrique s’il y a une diminution de la saturation2 O et essayez à nouveau après que l’animal est complètement oxygéné. Injecter un mélange de sérum physiologique, 5 % de glucose et enrofloxacine dans le coussin de graisse dans le cou de l’animal à l’aide d’une aiguille de 23 G. Utiliser un désinfectant alcoolique pour désinfecter les mains à nouveau. Enfilez des gants propres nouvelles. Préparer le champ chirurgical avec une alternance de scrubs de povidone iode et 70 % d’éthanol et couvrir l’animal. Utilisation autocollantes opaques ou serviette pinces pour s’assurer que seul le champ chirurgical reste découvert au cours de la procédure. Par voie sous-cutanée, injecter 0,1 mL de solution de lidocaïne 2 % dans la zone de l’incision prévue pour l’anesthésie locale suffisante et placez l’animal sur le côté. Re-doser l’animal avec un quart de la dose initiale du mélange anesthésique toutes les 30 minutes après la première injection de maintenir une anesthésie suffisante. 3. cochléaire Implantation Effectuer une environ 2-3 cm incision de la peau 3-5 mm postérieure à la pinna à l’aide d’un scalpel. Utilisez une cautérisation bipolaire lorsque cela est nécessaire pour minimiser les saignements.Remarque : Profondeur anesthésique doit être confirmé par l’absence de pédale retrait avant la première incision. Ce test doit être répété chaque 15-20 minutes pour contrôler la profondeur anesthésique tout au long de la procédure. Découpez soigneusement les muscles dans la région de rétroauriculaires après avoir palpé la bulla auditif à l’aide d’un scalpel 15 ou les ciseaux chirurgicaux.NOTE : Palper la bulla auditif comme une proéminence sous les muscles. Disséquer les muscles de la bulle tympanique en poussant doucement de côté en utilisant un raspatory ou un coton-tige. Utiliser un enrouleur pour exposer toute la longueur de l’incision et ont librement accès à la bulle tympanique. Utilisez la pointe d’un scalpel 15 pour percer un trou dans la bulle tympanique. Avec précaution, faites tourner le scalpel jusqu’à ce que l’os sont perforée pour permettre l’inspection des structures de l’oreille moyenne. Agrandir la bullostomy selon les besoins pour s’assurer que le tour basal de la cochlée et le créneau de la fenêtre ronde peut être visualisé correctement. Positionner la tête de l’animal en position fléchie afin d’accéder à ces structures. Recouvrir la surface de la bullostomy avec un petit morceau d’une compresse pour empêcher le sang et le liquide extracellulaire d’exécuter l’oreille moyenne.Remarque : La position fléchie du chef peut obstruer les voies respiratoires de l’animal. Par conséquent, la saturation en oxygène de l’animal doit être vérifié fréquemment. Placez l’animal en position couchée. Exposer le sommet de l’animal en effectuant une incision rectangulaire et en enlevant la peau. Disséquer le périoste et nettoyer l’os de n’importe quel autre type de tissu ou de sang à l’aide d’un scalpel. Lorsque les mesures de la PAC doivent servir, terminer la préparation du fil or 3,5 cm teflon isolés en formant un petit crochet avec une micro pince à l’extrémité du fil, qui a été isolé de 3 mm. Quand les mesures de la PAC sont destinées, guider l’extrémité du fil or, qui a été non isolée de 5 mm, par voie sous-cutanée au sommet grâce à un cathéter veineux périphérique à l’aide d’une pince micro en 18 G. Utiliser une autre pince micro avec l’autre main pour guider l’extrémité recourbée du fil soigneusement en à l’oreille moyenne. Quand les mesures de la PAC sont destinées, infléchir la tête de l’animal afin de visualiser la zone de la niche de la fenêtre ronde par le biais de la bullostomy. Utilisez l’autre main pour accrocher le fil d’or à la protubérance osseuse de la niche de la fenêtre ronde en utilisant une pince micro. Maintenir la légère tension sur le fil d’or et fixez-le au bord crânial de la bullostomy avec 10-15 µL de colle tissu à l’aide d’une seringue de 1 mL avec une aiguille de 27 G. Éviter le déplacement de la colle dans l’oreille moyenne. Voir la Figure 1 pour une image peropératoire de la zone de fenêtre ronde avec le fil d’or sur place. Quand les mesures de la PAC sont destinées, connectez l’extrémité non isolée du fil or pour l’équipement utilisé pour mesurer des potentiels auditifs et d’effectuer des mesures de base CAP. Voir des Honeder et coll., 2016, pour obtenir une description détaillée des mesures CAP régulièrement effectués dans notre laboratoire. 12 Placez l’animal en position couchée. Percer 2 trous de 1 mm avant la suture lambda à l’aide d’une bavure de 1 mm sans causer de dommages à la dure-mère. Implanter des 2 vis inox 2mm dans le crâne.Remarque : Les vis servent de points de fixation pour le connecteur de l’électrode. Adapter la distance entre les vis en ce qui concerne la taille du connecteur. Utilisez un cathéter veineux périphérique 18 G pour guider l’électrode du connecteur vers la bulle tympanique dans une couche de tissu au plus près le crâne que possible. Mélanger la poudre de ciment dentaire avec le fluide pour la poudre de ciment dentaire à l’aide d’une spatule selon le manuel du constructeur. Placer 0,5 – 0,7 mL de ciment dentaire semi-fluide entre les vis à l’aide d’une spatule. Positionner le connecteur de l’électrode entre les vis. Maintenir le connecteur en position jusqu’à ce que le ciment dentaire est durci. Assurez-vous que les vis sont entourées par le ciment pour permettre une fixation stable du connecteur. Placez l’animal sur le côté. Percer avec précaution le cochleostomy 1 mm de la niche de la fenêtre ronde avec une bavure de diamant de 0,5 mm à une vitesse de rotation de 5000 tours / minute. Introduire doucement l’électrode aux scala de timbales jusqu’à une profondeur de 4 mm. Retirer l’électrode et répétez l’insertion. Voir la Figure 2 de l’électrode utilisée pour l’implantation cochléaire de cobaye. En utilisant une aiguille droite, sceller la zone de cochleostomy avec un petit morceau de muscle. Fixer l’électrode au bord crânial de la bullostomy avec 10 µL de colle tissu à l’aide d’une seringue de 1 mL avec une aiguille de 27 G. Préparer le ciment dentaire, tel que mentionné dans 3.14. Refermer soigneusement le bullostomy avec environ 0,3 mL de ciment dentaire à l’aide d’une spatule. Refermer l’incision de rétroauriculaires à l’aide de sutures résorbables 5-0. Mettre l’animal en position couchée. Lorsque les mesures de la PAC doivent servir, saisir le bord postérieur de l’incision rectangulaire au sommet de l’animal à l’aide d’une pince de tissu. Utilisez des ciseaux avec l’autre main pour faire un tunnel sous cutané d’environ 2 cm de long dans le cou de l’animal. Quand les mesures de la PAC sont destinées, l’implant le fil d’or de 2,5 cm par voie sous-cutanée dans le cou de l’animal à l’aide d’une pince. Souder le bout court non isolé sur la broche désigné du connecteur sur le sommet de l’animal. Quand les mesures de la PAC sont destinées, souder à l’électrode de niche de la fenêtre ronde (fil d’or) sur la goupille appropriée du connecteur sur le sommet de l’animal. Appliquer un montant supplémentaire de ciment dentaire sur le dessus du connecteur pour couvrir entièrement les goupilles isolées et l’électrode. Quand les mesures de la PAC sont destinées, effectuer des mesures postopératoires selon le protocole de recherche. 4. postopératoire soins Appliquer Atipamézole et flumazénil par voie sous-cutanée après la chirurgie et les mesures afin de s’opposer à l’anesthésie. Appliquer une solution saline physiologique comme fluide substitution pour soutenir la reprise de l’animal de la chirurgie. Mettre l’animal sous une lampe chauffante jusqu’à ce qu’il a pleinement récupéré de l’anesthésie et commence à bouger dans la cage. Éviter l’hyperthermie ou brûler en plaçant la lampe chauffante environ 50 cm de l’animal. Assurez-vous que la température du corps de l’animal est toujours entre 37,5 ° C et 39 ° C. Vérifier l’animal pour les symptômes d’une lésion vestibulaire comme nystagmus, encerclant ou renversement. 13 , 14 Appliquer la buprénorphine pour l’analgésie deux fois par jour pour deux plusieurs jours après la chirurgie.Remarque : Avant la première application de buprénorphine post-opératoire s’assurer que l’animal a complètement récupéré et a la respiration stable. Application de ce médicament alors que l’animal est encore sous anesthésie peut entraîner une dépression respiratoire. Peser l’animal au cours de la première 3 jours après la chirurgie pour détecter la perte de poids possible comme marqueur de détresse pendant ce temps.NOTE : Perte de poids d’environ 10 % au cours de la première chirurgie après 3 jours peut être prévue et devrait être considéré comme commune. Cette perte de poids est temporaire et va récupérer en quelques jours.