一過性受容体電位バニロイド型 1 Ultrapotent アゴニストと純粋な小さな繊維の神経疾患のマウスモデルを確立します。
Summary
本研究は、純粋な小さな繊維エナンチオ (RTX) ニューロパシーの実験モデルを確立します。RTX のユニークな線量 (50 μ g/kg) が患者の特性を模した小さな繊維神経障害モデルを開発するため最適な神経因性疼痛の基礎となる受容分子の意義を調査を助けることができます。
Abstract
糖尿病 (DM) や化学療法剤の神経毒性の影響を経験している患者は、変性と小さな繊維の神経障害と呼ばれる小径感覚ニューロンの損傷による感覚障害を開発があります。小さな繊維の神経障害の存在の動物モデルは両方の大と小口径の感覚線維に影響し、負傷した小径感覚線維の効果を適切に評価するには複雑すぎる、神経病理学をこうして作成します。したがって、これらの問題の検討を十分に純粋な小さな繊維の神経障害の実験モデルを開発する必要があります。このプロトコルは、具体的にはエナンチオ (RTX) 一過性受容体電位バニロイドを通じて型の 1 (TRPV1)、単回投与の ultrapotent アゴニストと細径感覚神経に影響を与える小さな繊維の神経障害の実験的モデルを記述します。腹腔内投与、RTX 神経障害と呼ばれます。この RTX 神経の病的な症状を示し, 表皮内神経線維 (IENF) 変性、具体的には外傷を含む小さな繊維神経症患者の臨床的特徴を模倣行動の異常小径ニューロンと熱消と機械的アロディニアの誘導。このプロトコルは、RTX の 3 つの線量をテストした (200、50、および 10 μ g/kg、それぞれ)、結論 RTX の重要な線量 (50 μ g/kg) の典型的な小さな繊維の神経障害症状の開発に必要なし、する変更された染色手順を準備IENF 変性神経相馬損傷を調査します。修正手順は、高速、体系的、かつ経済的です。神経因性疼痛の行動評価は、細径感覚神経の機能を明らかにするため重要です。実験齧歯動物で機械しきい値の評価は特に挑戦的なこのプロトコルを記述するこのタイプの齧歯動物の評価に適しているカスタマイズされた金属製のメッシュ。要約すると、RTX 神経障害は分子の重要性と神経因性疼痛治療薬の開発のための基礎となる介入を評価する新しいと簡単に確立された実験的モデルです。
Introduction
IENFs の変性によって明らかである神経因性疼痛を含む小さな繊維の神経障害は、DM などは化学療法のエージェント1,2、神経毒性影響の結果としての条件の様々 な種類の共通 3,4,5。IENFs は後根神経節 (DRG) にある小径ニューロンの末梢の端末を並行 IENF 変性6の場合に影響を受けます。たとえば、神経突起の変えられた上流遺伝子転写は転写因子 3 (atf3 作動)6,7をアクティブにするのアップレギュレーションによって実証されています。さらに、皮膚生検、IENFs 神経支配の評価は小さな繊維神経障害5,8,9の診断に有用。従来、皮膚生検で IENFs のプロファイルに依存しているタンパク質遺伝子産物の免疫組織化学的デモ 9.5 (PGP 9.5)1,10,11。一緒に取られて、後根神経節と IENFs の病理組織学的プロファイルは機能条件の基になる小さな繊維神経障害を反映し、小径ニューロンに神経障害のこのタイプの機能的な結果の指標となることがあります。
以前は、いくつかの実験的モデルが圧縮または断裂14,15による化学療法による末梢神経障害12,13と神経損傷の場合 IENF 変性の問題を解決しました,16. これらの実験モデルにも大口径の神経が影響を受けるそれは、したがって、, 小さな繊維の神経障害; で影響を受ける大径神経の貢献を除外することはできません例えば、有害な撤退によってこれらの障害の検討は、機能運動神経線維17,18,19に依存します。したがって、純粋な小さな繊維神経障害モデルの確立と体系的に神経突起の小径ニューロンの周辺皮膚神経病理学的状態の調査は必要かつ不可欠です。
RTX はカプサイシン アナログと一過性受容体電位バニロイド受容体に 1 (TRPV1) 受容処理20,21,22を媒介する強力なアゴニスト。最近、周辺の RTX 治療安心神経因性の痛み23,24,25 RTX の intraganglionic 注射誘発 DRG ニューロン22の不可逆的な損失。周辺の RTX 投与の効果は用量依存性20,26,27、過渡的脱感作や IENFs の変性につながった。興味深いことに, 体系的な高用量 RTX 治療は神経因性疼痛28, 小さな繊維の神経障害の症状につながった。治療モードと RTX の用量が異なる病理学的効果と神経の反応を生成することが示唆します。ウィットには、周辺の管理ローカル効果29痛み情報伝達を防いだし、神経因性動作6を開発した神経突起が影響を受けます。総称して、RTX 率効果であり、体系的に周辺の IENFs と中央の神経突起などの末梢神経に影響を与える可能性 RTX の特定の投与量があるかどうか問題を提起したことが判明しました。もしそうなら、RTX は特に小径ニューロンに影響を与えるし、診療所の小さな繊維の神経障害を模倣の潜在的なエージェントであるかもしれない。たとえば、クリニックの DM は代謝性疾患と小さな繊維の神経障害の主な特徴は、末梢神経の病理を含む複雑な問題です。DM 関連の小さな繊維の神経障害のメカニズムは、本剤の末梢神経に影響を与えることができない代謝障害の貢献を除外でした。したがって、DM 関連の小さな繊維の神経障害では、体系的な代謝性疾患の影響を除外することができる純粋な動物モデルが必要です。このプロトコルでは、RTX IENF 変性と小径ニューロンの損傷などを含む変更された免疫染色解析によって示されるように、典型的な小さな繊維神経障害モデルを開発するための作業量について説明します。
Protocol
Representative Results
Discussion
診療所の小さな繊維の神経障害の効果的な治療は、機能回復と患者の生活の質を促進するため必要です。現在、ターゲットに小径神経細胞傷害の分子機構の包括的な理解の不足のために小さな繊維神経障害による感覚障害治療ガイドの欠如があります。神経障害の以前のモデルに通常両方大と小口径の感覚神経が影響を受ける例えば、化学療法による末梢神経障害12,</sup…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、省の科学と技術 (106-2320-B-037-024)、高雄医科大学 (KMU M106028、KMU S105034) トップ大学助成金 (TP105PR15)、台湾、高雄医学大学の目的からの補助金によって支えられました。
Materials
| Chemical reagent | |||
| Resiniferatoxin | Sigma | R8756 | |
| Tween 80 | Sigma | P1754 | |
| 3,3’-diaminobenzidine | Sigma | D8001 | |
| avidin-biotin complex | Vector | PK-6100 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Primary Antisera | |||
| Peripherin | Chemicon | MAB-1527 | |
| ATF3 | Santa Cruz | SC-188 | |
| PGP9.5 | UltraClone | RA95101 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Secondary Antisera | |||
| Biotinylated goat anti-rabbit IgG | Vector | BA-1000 | |
| Texas Red-conjugated goat anti-mouse | Jackson ImmunoResearch | 115-075-146 | |
| Isothiocyanate (FITC)-conjugated donkey anti-rabbit | Jackson ImmunoResearch | 711-095-152 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Hot plate | IITC | Model 39 | |
| von Frey filament | Somedic Sales AB | 10-600-0001 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material | |||
| Shandon coverplate | Thermo scientific | 72110017 | |
| Slide rack | Thermo scientific | 73310017 |
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