Ateş, Drosophila modeli yetişkin tırmanma davranışı çözümlemek için bir otomatik hızlı yinelemeli negatif Geotaxis tahlil
Summary
Bu adım adım protokolü Drosophila negatif geotaxis davranışı sinekler yüzlerce ev sahipliği yapan ve eylemlerinin bir elektrik motoru ile eşitler otomatik çoklu silindir sistemi kullanarak çözümler. Eşitleme sinek negatif geotaxis davranış, dijital kaydedilen ve analiz kendi kendine tasarlanmış RflyDetection yazılım kullanarak denetlesinler.
Abstract
Nörodejeneratif hastalıklar sık ilerici kaybı hareket yeteneği, düşük yaşam süresi ve yaş bağımlı ateş ile ilişkilidir. Bu hücresel mekanizmasını anlamak için olaylar ve onların nedensel birbirleriyle ilişkisi, Drosophila melanogaster, Gelişmiş genetik araçlar ve çeşitli davranış özellikleri ile hastalık modelleri değerlendirmek için kullanılır nörodejeneratif fenotipleri. Burada Drosophila yetişkin negatif geotaxis davranış, ateş ile ilişkili olası motor kusurları için bir göstergesi olarak analiz etmek için bir yüksek-den geçerek yöntemi açıklanmaktadır. Otomatik bir makine tasarlanmış ve daha sonra saniye dakika için bir ders üzerinde negatif geotaxis davranış kayıt sağlayan bir ilk elektrik dürtü kullanarak sürücü sinek eşitleme için geliştirilmiştir. Dijital olarak kaydedilmiş video görüntüleri daha sonra istatistiksel veri işleme için kendi kendine tasarlanmış RflyDetection yazılımı ile işlenir. Tek anında göre el ile kontrollü negatif geotaxis tahlil farklı, bu kesin, hızlı ve yüksek üretilen iş iletişim kuralı veri toplama devamını sağlar sinekler yüzlerce aynı anda, ilerlemek için verimli bir yaklaşım sağlamak bizim Lokomotor açıkları ateş ile ilişkili temel mekanizması anlama.
Introduction
İletişim kuralları ve yöntemleri çeşitli Drosophila yetişkin tırmanma davranışı çözümlemek için geliştirilmiştir. Oldukça zahmetli, geleneksel analiz çoğunlukla bir tek sinek bireysel bir şişe koyarak içerir ve sinekler eşitleme1,2,3için,4aşağı dokunun için el ile bir güç kullanır. Bu sıkıcı ve zaman alıcı, büyük yüksek üretilen iş çalışmaları için uygun olmayan ve sinekler gibi diğer sınırlamalar dokunun eskiden el ile kuvvet potansiyel farklılıklar vardır. Tahlil geliştirmek için hızlı yinelemeli negatif Geotaxis (yüzük) tahlil hangi aynı saat5‘ te üzerinden çok sayıda yüksek üretilen iş analiz sağlar geliştirilmiştir. Ancak, tahlil hala sinek eylem eşitlemek için el ile uygulamakla bir kuvvet gerektirir. Bizim sürümü önceki tahlil revize yüzük tahlil, birden çok sinek içeren şişeleri sinek eşitleme6sürücü için bir elektrik motoru ile otomatik olarak kontrol hosting bir metal Bankası içerir. Kayıt üzerine hemen eşitleme sonra kaydedildikten sonra tırmanma anında kendini tasarlanmış bir yazılım kullanılarak analiz. Bizim otomatik yüzük tahlil bir tek sinek, teker teker, üzerinden veri toplama sıkıcı ve emek yoğun işlem ortadan ve daha verimli olması verileri edinme işlemi etkin. Buna ek olarak, otomatik yüzük tahlil mekanizması temel Alzheimer aydınlatmak için çalışmalar ve Parkinson Hastaligi, yüksek verim7,8,9 yaklaşımla doğrulama bir sayısında istihdam .
Bu makalede, RNAi sinekler tahrik DDC-Gal4 kullanarak otomatik yüzük tahlil göstermektedir. DDC-Gal4 özellikle dopaminerjik (DA) ve serotonerjik nöron, ifade bir Gal4 böylece ateş10eşlik eden Lokomotor açıkları ile ilişkili hedef gen etkileri analiz etmek için harika bir araç gösteren çizgidir. Buna ek olarak, biz UAS-Dicer2, UAS-Dicer2 oluşturmak için RNAi verimliliği artırır bir sinek çizgi dahil; DDC-Gal4 aracı satır. Kullanmak için seçtiğimiz RNAi sinekler olduğunu auxilin (aux) RNAi v16182 (auxR16182), biz daha önce üzerinde bir etkisi sergilemek belirledik bir gen sinek Lokomotor aktivite8. auxGFP uçar Ayrıca aux overexpression üzerine etkilerini çözümlemek için hazırlanır. Biz otomatik yüzük tahlil sinek negatif geotaxis ölçmek, sonuçları sunmak ve sonuçları elde herhangi bir etkileri görüşmek için nasıl kullanılacağını gösterir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada açıklanan otomatik yüzük tahlil aynı anda yüzlerce sinekler sinek negatif geotaxis davranışının yüksek üretilen iş çözümleme sağlar. Daha önce bir tek sinek bireysel bir şişe içinde gözlemleri yetişkin tırmanma analiz etmek için mevcut stratejileri içerir ve sinek konumu el ile göz tarafından algılanır. Bu oldukça sıkıcı oluşum bazen yanlış okuyup veya veri, hem de emek yoğun iş yanlış yorumlanmasına yol açabilir. Bizim otomatik yüzük tahlil basit bir tıklama ile başl…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz Bloomington stok merkezi ve Viyana Drosophila RNAi Merkezi sinek hisse senetleri için teşekkür ederim. Yüzük cihazları için patent için Shanghai gelişmiş Araştırma Enstitüsü, Çin Bilimler Akademisi ait. RflyDetection yazılım Fu-de Huang yapılmalıdır için İstekler (yazar listeye bakın). Bu eser Ulusal temel araştırma programı, Çin’den hibe tarafından desteklenmiştir (973 Program 2013CB945602) ve Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31270825 ve 31171043). Ho laboratuvar üyeleri tartışma ve Yorumlar için teşekkür ediyoruz.
Materials
| Forma Environmental Chamber | Thermo | 3949 | |
| Carbon dioxide cylinders | FuLian GAS Technology | GB/T6052 | |
| HDR-Camcorder | SONY | HDR-CX220E | |
| Binocular stereomicroscope | Xin Zhen | SMZ-168BL | |
| Electronic scales | MinQiao | SL1002N | |
| Refrigerator | Haier | SC-350 | |
| Agar-agar powder | Sinopharm | 10000561 | |
| Glucose | Sinopharm | 10010518 | |
| Corn meal | Sinopharm | 5464654 | |
| Brown sugar | LiuCaiYuan | 45467936 | |
| Instant dry yeast | AB MAURI | 20886 | |
| AuxR16182 | VDRC | 7187 | |
| UAS-Dicer2 | Bloomington | 24650 | |
| UAS-mCD8GFP | Bloomington | 32185 | |
| DDC-Gal4 | A gift from Fude Huang | ||
| AuxGFP | A gift from Henry Chang |
Riferimenti
- Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration. J Vis Exp. (49), (2011).
- Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. J Vis Exp. (61), (2012).
- Madabattula, S. T., et al. Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders. J Vis Exp. (100), e52741 (2015).
- Podratz, J. L., et al. An automated climbing apparatus to measure chemotherapy-induced neurotoxicity in Drosophila melanogaster. Fly (Austin). 7 (3), 187-192 (2013).
- Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).
- Liu, H., et al. Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila. Neurosci Bull. 31 (5), 541-549 (2015).
- Shen, Y., et al. SH2B1 is Involved in the Accumulation of Amyloid-beta42 in Alzheimer’s Disease. J Alzheimers Dis. 55 (2), 835-847 (2017).
- Song, L., et al. Auxilin Underlies Progressive Locomotor Deficits and Dopaminergic Neuron Loss in a Drosophila Model of Parkinson’s Disease. Cell Rep. 18 (5), 1132-1143 (2017).
- Zhang, X., et al. Downregulation of RBO-PI4KIIIα Facilitates Aβ42 Secretion and Ameliorates Neural Deficits in Aβ42-Expressing Drosophila. J Neurosci. 37 (19), 4928-4941 (2017).
- Riemensperger, T., et al. A single dopamine pathway underlies progressive locomotor deficits in a Drosophila model of Parkinson disease. Cell Rep. 5 (4), 952-960 (2013).
