神経変性のショウジョウバエモデル アダルト登山行動を分析するための自動化された迅速な反復負走アッセイ
Summary
このステップ バイ ステップのプロトコルは、ハエの数百をホストし、電気モーターで彼らの行動を同期自動マルチ シリンダー システムを用いたショウジョウバエ負の走動作を分析します。試金飛ぶ負走動作同期、デジタル記録および自己設計されていた RflyDetection ソフトウェアを使用して分析しました。
Abstract
神経変性疾患は、運動能力、減らされた寿命、年齢依存性神経変性の進歩的な損失に頻繁に関連付けられます。これらの細胞のメカニズムを理解するには、イベント、および高度な遺伝学的ツールと多様な行動特徴、相互、キイロショウジョウバエ、これらの因果関係、モデルとして使用疾患を評価するため神経変性の表現型。ここでの神経変性に関連する運動障害のための徴候としてショウジョウバエ大人の負の走動作を分析する高スループット方法をについて説明します。自動機設計、ドライブ飛ぶ同期の後で分に秒の経過とともに負の走動作の記録をできるように、初期の電気衝動を使用するために開発。デジタル録画したビデオからの画像の統計データ操作の自己設計されていた RflyDetection ソフトウェアで処理されます。1 つのフライに基づいて手動で制御される負走アッセイとは異なり、この高速、高精度、高スループット プロトコルにより、データ集録からハエの何百ものよりも、同時に事前に効率的なアプローチを提供すること、神経変性疾患に関連付けられている運動の赤字の基になるメカニズムを理解します。
Introduction
さまざまなプロトコルおよび方法は、ショウジョウバエ成人登山行動を分析するために開発されています。かなり骨の折れる、伝統的な分析はほとんど 1 つのフライを入れている個々 のバイアルが含まれます、同期1,2,3,4のハエを叩く手動力を使用します。退屈な時間のかかる、高スループットの大規模研究には不向きで、ハエだけでなく、その他の制限をタップするために使用マニュアルの力の潜在的な変化です。アッセイを改善するために同じ時間5時多数のハエを高スループット分析が可能迅速な反復負走 (リング) アッセイを開発されました。ただし、アッセイはまだ飛ぶアクションを同期に手動で発揮力が必要です。改訂前の測定の時にリングの試金の私達のバージョンには、自動的に飛ぶ同期6を駆動する電気モーターによって制御される複数のフライを含むバイアルをホスティング金属ベースが含まれています。録音時に同期が、記録された後すぐにクライミング場を用いて自己設計されていたソフトウェア。私たちの自動化されたリングの試金、1 つずつ、1 つのフライからのデータ収集に手間と労力のかかるプロセスを排除しより効率的なデータ取得プロセス。さらに、自動リング アッセイは、機構の基になるアルツハイマーを明らかにする研究、パーキンソン病、高効率7,8,9 でのアプローチを検証の数で採用されています。.
この記事では、RNAi ハエを駆動DDC Gal4を使用して自動化されたリングのアッセイを示しています。DDC Gal4はドーパミン作動性 (DA) とセロトニン神経細胞で具体的に表現する Gal4 ライン10神経変性を伴う運動障害に関連付けられているターゲット遺伝子の効果を分析するための素晴らしいツールをこうして表します。さらに、我々 はUA Dicer2UAS-Dicer2;を生成するための RNAi の効率を高めるフライラインを組み込むDDC Gal4ライン ツールします。私たちを使用する選択 RNAi ハエはオーキシリン(aux) RNAi v16182 (auxR16182)、我々 は以前の効果を展示する識別した遺伝子飛ぶ運動8。auxGFPハエもaux過剰発現に及ぼす影響を分析するため用意しています。自動リング試金を使用してフライ負走を測定、結果を提示し、結果から取得で何か影響を議論する方法を紹介します。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここで説明した自動リング アッセイはハエの何百ものフライの負の走動作の高スループット解析を同時にできます。以前アダルト登山を分析するための既存の戦略を含む個々 のバイアルで 1 つのフライの観察と目で飛ぶ位置を検出して手動で。このむしろ退屈なプロセスは、誤読や労働集約的な仕事と同様、データの誤解もあります。私たちの自動化されたリングの試金は単純なクリック?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ブルーミントンの在庫センターとウィーンショウジョウバエRNAi のはえの在庫センターに感謝しますリング装置のためのパテントは、中国科学院上海高等研究所に帰属します。RflyDetection ソフトウェアは、フー ・ ド ・黄にすべきである要求 (著者リスト参照)。この仕事は基本的な研究プログラムの中国国家からの補助金によって支えられた (973 プログラム 2013CB945602)、国家自然科学基金、中国の (31270825 および 31171043)。Ho 研究室メンバーのディスカッションとコメントに感謝いたします。
Materials
| Forma Environmental Chamber | Thermo | 3949 | |
| Carbon dioxide cylinders | FuLian GAS Technology | GB/T6052 | |
| HDR-Camcorder | SONY | HDR-CX220E | |
| Binocular stereomicroscope | Xin Zhen | SMZ-168BL | |
| Electronic scales | MinQiao | SL1002N | |
| Refrigerator | Haier | SC-350 | |
| Agar-agar powder | Sinopharm | 10000561 | |
| Glucose | Sinopharm | 10010518 | |
| Corn meal | Sinopharm | 5464654 | |
| Brown sugar | LiuCaiYuan | 45467936 | |
| Instant dry yeast | AB MAURI | 20886 | |
| AuxR16182 | VDRC | 7187 | |
| UAS-Dicer2 | Bloomington | 24650 | |
| UAS-mCD8GFP | Bloomington | 32185 | |
| DDC-Gal4 | A gift from Fude Huang | ||
| AuxGFP | A gift from Henry Chang |
Riferimenti
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