Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi
Summary
Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.
Abstract
Choroidal neovaskülarizasyon (KNV) lazer kaynaklı yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) ıslak şeklinde taklit etmek için köklü bir modeldir. Bu protokol için amacımız neovasküler süreçleri, ama oldukça multimodal boyuna elde edilebilir güçlü bilgi odaklanmak tetiklemek için değil, sadece teknik konuları lazer kaynaklı lezyonlar oluşturma üzerinden okuyucu rehberlik etmek içinde vivo takip süresi görüntüleme.
Lazer kaynaklı fare KNV modeli bir diyot lazer yönetim tarafından oluşturuldu. Multimodal vivo içinde görüntüleme teknikleri KNV indüksiyon, ilerleme ve gerileme izlemek için kullanılmıştır. İlk, spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) gerçekleştirilen hemen Bruch’ın membran bir mola doğrulamak için lasering sonra. Floresein anjiyografi (FA) kullanarak sonraki vivo içinde görüntüleme Bruch’ın membran choroidal düzeyinde alınan seri görüntüleri üzerinden başarılı hasarı doğruladı. KNV yayılması ve regresyon lasering sonra gün 5, 10 ve 14 boyuna takip SD-Ekim ve SK kullanılarak gerçekleştirildi. Basit ve güvenilir sızan KNV leasions SK görüntülerden, sınıflandırma sunulur. Otomatik bölümleme için KNV sitelerdeki retina kalınlığı ölçümü için el ile kalibre uygulama ile birlikte toplam retina kalınlık ölçüm yapılmasına izin ödem varlığı tarafsız değerlendirilmesi. Son olarak, histolojik KNV doğrulanması isolectin GS-IB4 choroidal flatmounts boyama kullanılarak gerçekleştirilir. Boyama thresholded ve isolectin-pozitif alan ImageJ ile hesaplanır.
Bu iletişim kuralı gibi hızlı, multimodal sağlar yüksek üretilen iş gibi tarama KNV patoloji gerektiren tedavi çalışmaları ve güvenilir KNV patoloji ve retina ödem sınıflandırılması özellikle yararlıdır. Buna ek olarak, yüksek çözünürlük SD-Ekim subretinal veya intraretinal sıvı birikimi gibi diğer patolojik işaretlerinden kayıt sağlayan. Ancak, bu yöntem bir olasılık el ile gerçekleştirilecek olan KNV cilt analizi SD-Ekim görüntüleri, otomatikleştirmek için sağlamaz.
Introduction
Başarılı ilk insan KNV Rodents patoloji taklit girişimi neredeyse otuz yıl önce uzun-Evans fareler1Kripton lazer ile gösterilmiştir. Bundan sonra bir Kripton lazer Bruch’ın membran en popüler fare gerginliği, C57BL/6J2,3,4kırmak için kullanıldı. KNV indüksiyon başarı oranını SK ve histolojik lekeleri ile doğrulandı. EKM gibi noninvaziv görüntüleme yöntemleri, hızlı bir gelişme alanı kemirgen Preklinik modellerin büyüme destekledi. Aynı göz içinde birden çok kez noktalarda retina morfolojik değişiklikler önemli ölçüde izleme olanağı hayvan kullanımı azaltma için katkıda bulunur ve deneysel çalışmalarda verimliliği artırır. KNV lezyonların histolojik değerlendirme oldukça basittir ve anormal damar büyüme lazer yönetim, resim alma ve alan/hacim tahmini bir görüntü analiz yazılımı kullanarak site etrafında etiketleme gerektirir. Buna ek olarak, daha karmaşık analizleri KNV patoloji ve onun yorumunu vivo içinde görüntüleme yöntemleri tanıtmak.
Burada SK, SD-Ekim, kullanarak sınıf indüksiyon, ilerleme ve gerileme KNV nispeten hızlı ve basit bir yöntem mevcut ve fare otomatik bölümleme yöntem lazer kaynaklı KNV modeli.
Protocol
Representative Results
Discussion
Multimodal görüntüleme KNV patoloji değerlendirme için değerli araçlar sunar. Burada SK, oluşan bir görüntüleme Protokolü sunulan SD-Ekim ve KNV patoloji hızlı, tekrarlanabilir ve güvenilir değerlendirilmesi için otomatik bölümleme. Lazer yönetim doğrulandı sonra Bruch’ın membran bir mola. Buna ek olarak, SD-Ekim bu aşamada da sonuçları yorumu yıkmak olası intraretinal ve subretinal kanama hemen görselleştirme izin. Retina sızıntıları floresein sinyal SK görüntülerden göre kademeli. …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar için mükemmel teknik ve videographic destek Yuliya Naumchuk (Chicago Loyola Üniversitesi) ve Agne Žiniauskaitė (Experimentica Ltd) teşekkür etmek istiyorum. Dr. Kaja’nın araştırma programı Dr John P. ve Therese E. Mulcahy donatılmış profesörlük Oftalmoloji, Chicago Loyola Üniversitesi tarafından desteklenir.
Materials
| Medetomidine (commercial name Domitor) | Orion | Vnr 01 56 02 | Anesthesia |
| Ketamine | Intervet | Vnr 51 14 85 | Anesthesia |
| 0,9% NaCl | B Braun | 357 0340 | Anesthesia |
| Xylazine (commercial name Rompun vet) | Bayer | vnr 14 89 99 | Anesthesia |
| Tropicamide | Santen | Vnr 04 12 36 | Mydriatic agent |
| Viscotears | Alcon | Vnr 44 54 81 | Lubricant |
| Systane | Alcon | - | Lubricant |
| 5% Fluorescein sodium salt | Sigma Aldrich | F6377-100G | Fluoresent agent |
| Atipamezole (commercial name Antisedane) | Orion | Vnr 47 19 53 | Anesthesia |
Riferimenti
- Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat. Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).
- Tobe, T., et al. Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).
- Seo, M. S., et al. Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor. Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).
- Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
- Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization. J Vis Exp. (106), e53502 (2015).
- Giani, A., et al. In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).
- Gong, Y., et al. Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice. PloS One. 10, e0132643 (2015).
- Sheets, K. G., et al. Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse. Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).
- Hoerster, R., et al. In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).
- Sulaiman, R. S., et al. A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization. J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).
