Hoog vet dieet voeding en High Throughput triglyceride test bij Drosophila Melanogaster

We zijn in een tijd waar obesitas, en de bijbehorende economische lasten, is een wereldwijd probleem¹. Twee uit elke drie Amerikanen zijn overgewicht of obesitas met verwante hart pathologieën, de belangrijkste doodsoorzaak in de volwassen bevolking². Nieuwe efficiënte methoden zijn nodig om de genetische en moleculaire componenten betrokken bij de regulering van metabool syndroom met behulp van modelorganismen adequaat te onderzoeken. Om deze reden kiezen wij de fruitvlieg Drosophila model omdat het de meest elementaire biologische processen met zoogdieren, waaronder muizen en mensen^3,4,5,6. Drosophilagenoom is zeer geconserveerde tijdens de evolutie, maar over het algemeen veel kleiner met minder gene duplicatie en metabole complexiteit, waardoor hij ideaal is voor het begrip van de fundamentele mechanismen betrokken bij vele ziekten bij de mens^{4 , 7 , 8}. ook karakteristieke processen uitgevoerd door adipeus weefsel, de darm en pancreas zijn vertegenwoordigd in de vlieg en bemiddelen van regelgevende taken in glucose en lipide metabolisme, bijvoorbeeld, die vergelijkbaar met de mens^9, zijn ^10,11. Bovendien, de fundamentele moleculaire pathways betrokken bij de bestrijding van zwaarlijvigheid, insulineresistentie en diabetes bij de mens zijn functioneel bewaard in Drosophila melanogaster^{12,13,14 , 15 , 16}. als hogere organismen, Drosophila heeft een kloppend hart die tijdens de ontwikkeling wordt gevormd door soortgelijke processen met die van de zoogdieren hart^3,17. Dus, de ontwikkeling van een betrouwbare HFD voeding protocol en hoge doorvoer TAG assay, aangepast voor efficiënte screening doeleinden gebruik van de genetische gereedschapskist van Drosophila, bieden een belangrijk middel te bestuderen en begrijpen van de fundamentele genetische basis onderliggende complexe metabole ziekten.

Het HFD voedsel zelf is gemaakt van een standaard laboratorium vliegen voedsel aangevuld met kokosolie, die meestal uit verzadigde vetzuren bekend bestaat te worden geassocieerd met het metabool syndroom¹⁸. Terwijl inducerende obesitas in modellen, zoogdieren, zoals knaagdieren, maanden^{19,20 duren kan}, verhoogt onze geoptimaliseerde HFD voeding protocol in Drosophila effectief en reproducibly organisch vetgehalte in een kwestie van dagen^12,14. Dit protocol, kunt in combinatie met een hoge doorvoersnelheid TAG assay, u efficiënt mass screening voor de gevolgen van genetische factoren, milieu-invloeden en drugkandidaten te ontdekken van nieuwe modulatoren van vetstofwisseling. Als gevolg hiervan zijn deze protocollen waarschijnlijk relevant zijn voor het begrijpen en/of bestrijding van obesitas en obesitas-geassocieerde menselijke pathologie.

De voeding protocol is veelzijdig en kan worden toegepast om te bestuderen van de metabole en functionele gevolgen van enkele verzadigde of onverzadigde vetzuur. Het gebruik van deze hoge doorvoer TAG assay is niet beperkt tot D. melanogaster, maar kan worden aangepast aan een verscheidenheid van kleine modelorganismen met Cuticula of taai extracellulaire matrices (b.v., andere soorten Drosophila , C. elegans en andere opkomende ongewervelde modelorganismen) voor het meten van vetgehalte onder verschillende ecologische, genetische of fysiologische omstandigheden, in elk stadium van ontwikkeling, volwassenheid of fase van metabole ziekte. De TAG-bepaling is gebaseerd op een colorimetrische meting van een reeks enzymatische reacties dat degraderen de TAGs in vrije vetzuren, glycerol, Glycerol-3-fosfaat en ten slotte H₂O₂ die met 4-aminoantipyrine (4-AAP) en 3,5 reageert- dichloorethaan-2-hydroxybenzene sulfonaat (3,5 DHBS) om een rood gekleurde product dat wordt gemeten met een spectrofotometer 96-Wells te produceren.