Summary

L'exposition du porc du système nerveux central pour l'analyse anatomopathologique: Un manuel pour Décapitation, Crâne d'ouverture et cerveau suppression

Published: April 13, 2017
doi:

Summary

Le but de cet article et vidéo d'instruction est de décrire comment exposer et enlever le cerveau de porc post-mortem et hypophyse dans un état intact, adapté à l'analyse macroscopique et histologique.

Abstract

Les porcs sont devenus de plus en plus populaire dans la recherche en neurosciences translationnelle grand animal comme sur le plan économique et sur le plan éthique substitut possible aux primates non humains. La grande taille du cerveau du porc permet l'utilisation des imageurs du cerveau clinique classique et l'utilisation directe et le contrôle des procédures et de l'équipement neurochirurgicales de la clinique humaine. Une analyse plus poussée macroscopique et histologique, cependant, exige une exposition post-mortem du système nerveux central de porc (CNS) et l'élimination ultérieure du cerveau. Ce n'est pas une tâche facile, comme le porc du système nerveux central est encapsulé par un crâne épais, osseux et de la colonne vertébrale. Le but de cet article et vidéo d'instruction est de décrire comment exposer et enlever le cerveau de porc post-mortem et l'hypophyse dans un état intact, adapté à l'analyse macroscopique et histologique.

Introduction

Des études en neurosciences translationnelles chez les porcs sont devenus de plus en plus populaires au cours des deux dernières décennies. La grande taille du cerveau de porc permet l'utilisation d'imageurs du cerveau clinique classiques et l'utilisation directe et les tests des procédures neurochirurgicales et de l' équipement de la clinique humaine 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. Au cours des 20 dernières années, les porcs, en particulier miniporcs (par exemple, Göttingen minipig), ont été utilisées pour examiner les modalités de traitement neuromodulateurs, comme la transplantation de cellules souches; transfection de vecteur viral; et la stimulation cérébrale profonde dirigée vers la maladie de Parkinson, l' obésité, la dépression, la maladie d' Alzheimer et 2, 6,= "xref"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Cela a été suivi par le développement d'approches chirurgicales stéréotaxiques et de manipuler le système nerveux central minipig 3, 18, 19, 20, 21. Les modifications du SNC instituées ont été évaluées chez des animaux vivants en utilisant l' imagerie du cerveau (PET 10, 13, 22, 24 et 23 MR), cystometry 11, 12, 25, analyse de la marche17, l' évaluation neurologique 9, 17, et examen post – mortem sur la base de l' histologie et analyse stéréologique 14, 15, 17, 26, 27, 31. Cependant, l'analyse post-mortem nécessite l'exposition et l'élimination du cerveau de porc, ce qui est pas une tâche facile, comme un crâne épais, osseux et un dural fibreux couvrant entourent le cerveau de porc.

Le but de cet article et vidéo d'instruction est de décrire comment le cerveau de porc post-mortem et hypophyse peuvent être exposés et éliminés dans un état intact 15-20 min à l'aide des outils chirurgicaux non motorisés. La vidéo pédagogique et illustrations photographiques montrent miniporcs mâles (âge: 6 mois, poids vif: 20-25 kg) utilisés pour une étude anatomique sur l'hypophyse minipig.

Protocol

anesthésie animale et euthanesia a été réalisée conformément aux « Principes de protection des animaux de laboratoire » (publication NIH n ° 86-23, révisé 1985) et approuvé par le Conseil danois pour l'éthique de la recherche animale. 1. Instruments Recueillir les instruments présentés dans la vidéo et figurant dans la table des matières. 2. Décapitation NOTE: L'anesthésie a ?…

Representative Results

Pour éviter que le matériau de tissu de sécher, il est recommandé de stocker le cerveau enlevé et pituitaire dans un bocal rempli de fixatif ou une solution saline isotonique immédiatement après l'analyse macroscopique a été réalisée. Le matériau de tissu peut être stocké dans le fixatif pendant des années, alors que le stockage dans une solution saline isotonique, même dans un réfrigérateur, conduira à la désintégration du tissu avec le temps. <p class="jove…

Discussion

La plupart des études de neuroscience expérimentales sont réalisées en petites espèces d'animaux, comme les souris et les rats, où l'accès au SNC est facilitée par une fine épaisseur dural et skull-. Cependant, chez les animaux expérimentaux plus grands comme les porcs 1, 4, 8, les moutons 32 et les primates non humains, l'épaisseur considérable de ces structures nécessite l'…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs reconnaissent avec gratitude l'aide habile de Mme Trine W. Mikkelsen, Mme Lise M. Fitting, et le personnel Påskehøjgaard. Le Conseil de recherches médicales du Danemark, la Fondation Lundbeck et la Novo Nordisk Fondation a soutenu financièrement l'étude.

Materials

Heavy Scalpel Handle #4 FST (Fine Science Tools) 10008-13 Good for skin incision and soft tissue removal
Non-Sterile Scalpel Blades #23 FST  10023-00
Scalpel Handle #7 FST  10007-12 Optimal for dural incision and precision work
Non-Sterile Scalpel Blades #11 FST  10011-00
Surgical Forceps FST  11024-18 The tip of the surgical forceps ensure a firm grip 
Kerrison Bone Punch Aesculap Neurosurgery FF713R Must be robust, bite size 3-5 mm
Bone Rongeur Aesculap Neurosurgery MD615 Must be robust, bite size 15 x 5 mm
Bone Rongeur Aesculap Neurosurgery FO551R Must be robust, bite size 25 x 15 mm 
Bone Chisel Lawton 67-0335 The size of the chisel head should not exceed 20 mm
Mallet (Hammer) Millarco 5624108 Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm
Micro-Scissor FST  14002-14  
Dissector Aesculap Neurosurgery OL165R
 Göttingen minipigs  Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark
Euthanimal pentobarbital
Ketamine Pfizer
Midazolam  Hameln Pharmaceuticals

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Bjarkam, C. R., Orlowski, D., Tvilling, L., Bech, J., Glud, A. N., Sørensen, J. H. Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal. J. Vis. Exp. (122), e55511, doi:10.3791/55511 (2017).

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