Manipulation des épileptiforme Electrocorticograms (ECoGs) et du sommeil chez les rats et les souris par Acupuncture

L'épilepsie est un trouble neurologique commun dans lequel des crises récurrentes se produisent tout au long de la durée de vie d'un patient. La plupart des récurrences d'épilepsie peuvent être bien contrôlés par les médicaments anti-épileptiques (DEA). Toutefois, environ 30% des patients atteints d' épilepsie réfractaire , l' épilepsie développent ^1. causes de l'épilepsie, troubles du sommeil qui peut encore aggraver la récidive. La preuve démontre que l' épilepsie peut soit perturber le sommeil la nuit ou peut provoquer une somnolence diurne excessive ^2,3. Nos études antérieures indiquent en outre que l' épilepsie se produisant à zeitgeber temps (ZT) 0, soit le début de la période de lumière à la lumière: cycle d' obscurité, diminue le sommeil; ceci est médiée par l'hormone de libération de la corticotropine (CRH), un facteur homéostatique. L'épilepsie chez ZT13 (le début de la période d'obscurité) augmente l'expression d'un autre facteur homéostatique, l'interleukine-1 (IL-1), ce qui augmente le sommeil. Sommeil rythmes circadiens sont modifiés lorsque l'épilepsie survient à ZT6, au milieu de lapériode de lumière ^4,5. D'autre part, les problèmes de sommeil aggravent encore la progression et la récurrence de l' épilepsie ^6. Sur la base des éléments de preuve ci-dessus, nous essayons de révéler une méthode thérapeutique optimale pour contrôler simultanément l'épilepsie et prévenir les perturbations du sommeil chez les patients épileptiques. Nous avons déjà constaté que électroacupuncture (EA) avec une fréquence de stimulation de 10 Hz, dans lequel une certaine quantité de courant est délivré dans le acupoint à travers une aiguille en acier inoxydable, électrocorticogramme supprime avec succès (EcoG) activités d' épilepsie et des troubles du sommeil induit par l' ^épilepsie-7 . EA avec une fréquence de stimulation de 100 Hz se détériore davantage les activités d' épilepsie et les troubles du sommeil chez le rat ^8,9. Cette expérience réussie dépend de trois facteurs: d'une part, un modèle animal d'épilepsie possible; en second lieu, un procédé d'enregistrement et d'analyse du sommeil chez les rongeurs; et troisièmement, la performance exacte de l'acupuncture et la précision de la locati acupointons.

L'épilepsie a été classé en deux grands types: épilepsie focale et l'épilepsie généralisée. Nous sommes intéressés à focale épilepsie temporale de lobe (TLE), épilepsie généralisée, état de mal épileptique (SE), et la récurrence de l'épilepsie généralisée spontanée. Par conséquent, les différentes manipulations sont appliquées pour créer des modèles d'épilepsie appropriés pour nos expériences. Pour établir TLE focale, une faible dose de pilocarpine est administré dans le noyau central de l'amygdale gauche (ACÉ). Pour vérifier ce modèle, six électrodes ECoG sont implantées sur le frontal (F1 et F2), pariétal (P1 et P2), et occipital (O1 et O2) lobes dans les deux hémisphères gauche et droit, et deux électrodes de référence (R1 & R2) sont placés sur le cervelet, dans les deux hémisphères. Un montant supplémentaire de guide de microinjection canule est implanté chirurgicalement dans le aCÉ gauche (AP, 2,8 mm de bregma; ML, 4.2 mm, DV, 7,8 mm par rapport à bregma). Les coordonnées sont adaptées de la Paxinos et Watson atlas de rat ^10. Si le TLE focal est induite avec succès, seul l'enregistrement à partir de l'électrode à gauche cortex pariétal (P1), qui est près de la aCÉ gauche, devrait acquérir les ECoGs épileptiformes dominantes, sans ECoGs épileptiformes significatives enregistrées à partir des autres électrodes ECoG. Intrapéritonéale (IP) des injections de pilocarpine dans les rats induisent l'épilepsie et SE généralisés, mais cela peut être fatal. Cinq injections IP de pentylenetetrazol (PTZ) avec un intervalle d'une journée entre chaque injection induisent avec succès l'épilepsie généralisée spontanée chez la souris et assurent également la survie des souris. Deux électrodes de fil ECoG sont implantés dans les frontales et pariétales corticales chez les souris pour recevoir des signaux ECoG et de vérifier l'épilepsie spontanément récurrente.

Polysomnographie (PSG) est une méthode complète pour enregistrer les changements physiologiques qui se produisent pendant le sommeil, et il peut objectivement classer le sommeil en différentes étapes du mouvement non-rapide oeil (NREM) et rmouvements oculaires apid (REM) du sommeil. PSG enregistre les paramètres de fonctionnement de l'organisme, y compris les ondes cérébrales (électroencéphalogramme, EEG), les mouvements oculaires (de électrooculogramme, EOG), des tons de muscle squelettique (de électromyogramme, EMG), les rythmes cardiaques (électrocardiogramme, ECG), et les niveaux d'oxygène dans le sang et les paramètres respiratoires. Chez les rats, nous enregistrons ECoGs, EMGs, température corticale, et l'activité locomotrice de classer les états de vigilance en éveil, le sommeil lent et le sommeil paradoxal. analyse du sommeil chez la souris est effectuée en utilisant ECoGs, EMGs, et les résultats de l'activité locomotrice. Les rats sont implantés chirurgicalement avec trois EcoG vis électrodes au frontal, pariétal et corticales cérébelleux controlatéral par la chirurgie stéréotaxique. détermination post-acquisition des états de vigilance (de l'éveil, le sommeil lent et le sommeil paradoxal) est conduite selon les paramètres acquis des ECoGs, EMG, la température du cerveau, et l'activité locomotrice. Les critères détaillés pour catégoriser le comportement de l'animal chez les rats et les souris sont décrites dans til protocole.

Les rats et les souris ont besoin d'être anesthésiés avec une faible dose de Zoletil (25 mg / kg), soit la moitié de la dose d'anesthésique normalement administrés pendant la chirurgie stéréotaxique, avant d'effectuer l'acupuncture manuelle ou EA. Ce dosage permet aux animaux de se réveiller 30 à 35 minutes après l'injection. Soit l'acupuncture manuelle ou EA est effectuée au début de la période d'obscurité, avec un intervalle de temps constant de 30 minutes, et chaque animal est consécutivement traités pendant deux à trois jours. Stimuler les courants EA sont livrés dans un acupoint particulier à travers une aiguille en acier inoxydable qui est inséré dans l'acupoint. Le courant de stimulus est un train d'impulsions carrées biphasique, dans lequel la durée d'impulsion est de 150 ms et l'intensité de stimulation est de 1 mA. Si une aiguille sèche est utilisée pour l'acupuncture manuelle, l'aiguille insérée dans les acupoints est crispa 10 fois toutes les 5 min. La partie difficile de l'acupuncture manuelle ou EA est de localiser les points d'acuponcture chez les rongeurs. Le location des acupoints chez des rats ou des souris est similaire à leur localisation anatomique chez les humains. Par exemple, les acupoints bilatéraux Fengchi sont situés 3 mm de la ligne médiane postérieure sur le cou, entre les deux oreilles, ce qui est similaire à son emplacement anatomique chez les humains ^11. En outre, les points d'acupuncture avec une faible impédance sur la peau peuvent être confirmées. la manipulation de l'acupuncture ou fictive EA Sham est nécessaire pour l'acupuncture ou des expériences EA. Acupuncture Sham ou fictive EA doivent être effectuées à un non-acupoint situé à proximité du acupoint, comme près de l'aisselle ^12.

Pour étudier avec succès les effets de l'acupuncture ou EA sur l'épilepsie et les troubles du sommeil induit par l'épilepsie, les facteurs suivants doivent être en place: un modèle possible épileptique animal, l'analyse précise de ECoGs épileptiformes et la récurrence de l'épilepsie, une méthode pour classer les états de vigilance et la performance précise de l'acupuncture ou EA chez les rongeurs.