Проточной цитометрии на основе анализа на мониторинге NK клеточных функций

В рамках врожденной иммунной системы естественных киллеров (NK) клетки способствуют первой линии защиты от инфицированных вирусом или злокачественно трансформированных клеток. Система ингибирующих и активирующих рецепторов позволяет им различать между здоровыми и трансформированные клетки без предварительного антигена затравки в отличие от Т-клеток. При столкновении клетки – мишени NK – клетки высвобождают содержание своих цитотоксических гранул (например, Перфорин, гранзимы) в иммунной синапса , чтобы убить свою цель. Кроме того, NK – клетки вырабатывают и выделяют различные виды цитокинов (например, интерфероном гамма: IFN-γ, фактор некроза опухоли-α: TNF-α) и хемокинов (например, макрофагальный воспалительный белок-1β: MIP-1) по клетке – мишени взаимодействие или цитокин стимуляция ^1.

Достаточные функции NK-клеток, такие как цитотоксичность, хемокинов и продукции цитокинов оказывают значительное влияние на судьбы различных дисоблегчает. Больных лейкемией показывают увеличение частоты рецидивов , если они демонстрируют дефектный профиль NK клеток на момент постановки диагноза , состоящий из сокращения производства IFN-gamma и снижением экспрессии активации клеточных рецепторов NK ^2. Раннее восстановление числа клеток NK и функции , включая выработку цитокинов при взаимодействии клетки – мишени связано с уменьшением рецидивов и улучшение выживаемости у пациентов , получающих аллогенной трансплантации стволовых клеток ^3. Кроме того, после начала терапии интерфероном у больных , инфицированных вирусом гепатита С дегрануляция способность периферических клеток NK в начале ответчиков сильнее , чем в неответчиков ^4. Числа NK клеток (> 80 / мкл) на 15 -й день после аутологичной трансплантации стволовых клеток (autoSCT) у пациентов , страдающих от лимфомы или множественной миеломы являются прогностическими улучшенной прогрессии и общей выживаемости ^5. У пациентов с меланомой экспрессия Т-клетки immunoglobulin- и муцин-домен-containinг молекула-3 (ТИМ-3), иммунное-регулирующий белок на клетках NK, коррелирует со стадией заболевания и прогнозом ^6.

Ученые контролировали функции NK-клеток на протяжении последних десятилетий. Первоначальный анализ клеточной цитотоксичности NK против опухолевых клеток без предварительного грунтования была адресована с помощью анализа ^{7 51} Cr-релиз. Совсем недавно ученые разработали нерадиоактивного метод оценки цитотоксичности NK расширенных клеток ^8. Цитокина и хемокина производство было часто оценивали с помощью иммуноферментного анализа (ELISA) методы ^9,10. В последние десятилетия эти методы были дополнены с помощью проточной цитометрии анализов на основе. Применение ингибиторов белка переноса (например, брефелдин А и монензин) и методы проницаемости клеточной мембраны в сочетании с протоколами обычного поверхностного окрашивания позволили ученым изучать хемокинов и производство цитокинов в различной удельной лимфыocyte подмножества (например, T, B или NK – клетки) ^11. Кроме того, различные проточная цитометрия на основе анализы были разработаны для контроля Т и NK-клеток, цитотоксичность. В 2004 году Альтер и др. Описали поверхностную экспрессию лизосом-ассоциированный белок CD107a (ЛАМПА1) на NK – клетках , на клетки – мишени столкновения в качестве маркера дегрануляции цитотоксических гранул ^12. Так как широкий спектр различных люминофоры и цитометров многоканальными доступны в наши дни, это стало возможным одновременно контролировать различные функции клеток NK (цитотоксичность, цитокинами и производства хемокин) в различных подмножеств NK-клеток. Это становится особенно важным в ситуациях , когда размер выборки ограничен, например, в биопсий или образцах крови пациентов , страдающих от лейкопении.

Чтобы проверить глобальные функции NK клеток, различные анализы потока цитометрии на основе могут быть эффективно объединены. Theorell и др. , Стимулированные NK – клетки от АЭМдоноры lthy с опухолевой клеточной линии К562 и анализировали NK – клеток дегрануляцию, изнутри наружу сигнала и хемокинов производства с помощью проточной цитометрии ^13. Недавно подгруппы NK клеток, фенотип и функции у больных опухолей во время autoSCT были проанализированы с помощью проточной цитометрии анализов на основе. Было показано , что NK – клетки были способны degranulate и продуцируют цитокины / хемокины при обнаружении опухолевых клеток в очень ранние моменты времени после того, как autoSCT ^11.

Здесь протокол описан для оценки функции клеток NK при взаимодействии с опухолевыми клетками, включая емкость дегрануляции, хемокинов и продукции цитокинов с помощью проточной цитометрии на основе анализа, что дает возможность контролировать функции NK-клеток в различных подмножеств одновременно.