コンシャスげっ歯類における腎機能の経皮評価

プロトコルを開発するために必要な実験は、国の規制に従って実施し、地域の倫理科学委員会（Regierungspräsidiumカールスルーエ）によって承認されました。 FITC-sinistrin注射液の調製ストック溶液を調製し、生理食塩水でFITC-sinistrinを溶解します。ラットでは5mg / 100gでBW FITC-sinistrinが好ましいが、マウスにおいて推奨される用量は、7.5ミリグラム/ 100g体重（BW）です。ラット40ミリグラム/ mlの濃度で調製しながらマウスで、15ミリグラム/ mlのFITC-sinistrinストック溶液の溶液を調製します。 注：FITC-sinistrinストック溶液を予め調製し、遮光し、-20℃で保存することができます。 2.動物の準備いずれの実験ではそれらの導入前に少なくとも1週間のために動物を順応させます。 5 L /分のO 2、5％イソフルランを用いて動物を麻酔</sub> 2分間流します。 動物が適切に遅いと深くなるその呼吸を観察することによって麻酔されていることを確認し、つま先の応答の欠如と不応答性を確認します。 動物が眠っているしたら、2リットル/分のO 2送達速度で2.5％イソフルランの麻酔を軽減し、BWを取ります。 電気シェーバーを使用して、動物の背中の脇腹から毛皮を削除します。 3センチメートル×6センチ寸法を有する両面粘着パッチによって占有される領域よりもわずかに大きい面積を剃ります。 続いて残りの毛皮を除去するために、短期間（2〜3分）のために脱毛クリームを適用します。 クリームが完全に除去されるまでクリーム自体が蛍光することができるよう、徹底的に洗います。 注：それは刺激/浮腫を生成することができますように動物の皮膚に傷をつけないようにしてください。脱毛面積が皮膚に色素沈着を示している場合は、のための非着色スポットまで大きな面積を剃ります装置の光学部品が見出されます。麻酔の露出を最小限にするために、事前に24時間を剃ることをお勧めします。 3.デバイスの準備保護箔と反対の部分を残して透明窓（ 図1）上記の光学部品を位置決め、両面接着パッチの片面に腎機能を測定するために光学素子を配置します。 注意：小さなげっ歯類を操作する場合は、図2に示すように、パッチのサイズを小さくしてください。 図3に示すように、バッテリにマッチサイズの両面接着パッチの一枚を取り付けます。 動物でのデバイスの4固定動物の体重に基づいて、注入の適切な量を計算します。 以前のセクション2.1から2.3に示すように、イソフルランで動物を麻酔。 筒状の弾性ガーゼ包帯oの部分をカットF両面接着パッチの幅よりも長い約1cmを使用します。 明らかに剃った領域を残して、その背中に動物と場所の頭の上に弾性ガーゼ包帯を引き出します。 、代わりにのみ粘着テープを使用してデバイスを固定しますが、デバイス上の不当な圧力に注意してください 。 注意してください 。 デバイス上の対応するポートにバッテリコネクタを差し込むことにより、デバイスにバッテリーを接続します。その後、パッチの片から保護フォイルを取り外し、デバイス（ 図4A）の上面にバッテリーを搭載。電池が正しくデバイスが点滅していることを確認することにより、接続されていることを確認してください。 注：ラットでは、電池はまた、次のデバイス（ 図4B）に、接着パッチ上に直接取り付けることができます。 操作装置とパッチから保護カバーを取り外し、それを保持している動物の背中に毛を剃っ領域上に配置しますそれが正しく固定されるまで、sが縁。 パッチの接着面に付着した筒状の弾性ガーゼの包帯（ 図5）を備えたデバイスをカバーしています。 適切に手足が自由に移動できることを確認して、動物の腹部に筒状包帯を伸ばします。 より優れた固定およびデバイスの保護のため、装置の形状次電池の配線を覆う粘着テープのストリップを適用します。 デバイスに圧力をかけることなく、1〜3分間のバックグラウンドを測定します 5. FITC-sinistrin管理と測定手順必要に応じて、注射またはすべての手順に沿って温度制御された加熱プレートの前に暖かい水を使用して、動物の尾を温めます。 FITC-sinistrin原液の適切な量尾静脈を介して注入します。注入量は、動物BWに依存し、したがって、それぞれの個々の短所のために計算されなければなりませんセクション1.1で上記の所望の投与量及びストック溶液の濃度を、idering。 すべてのFITC-sinistrinソリューションは、静脈内ではなく、皮下に投与されていることを確認してください。 注：別の方法として、FITC-sinistrinは、事前に移植された静脈内カテーテルを用いて投与することができるげっ歯類またはマウスにおける眼窩注射を介して、首のうなじに終了しました。 それは運動アーチファクトを導入するように慎重に、強い動きやデバイス上の任意の圧力を回避し、そのホームケージに動物を返します。 動物が乱されることを避けるために、穏やかな場所にホームケージを置きます。 マウス、2時間ラットを用いて作業している場合、少なくとも1時間の間に測定を行います。その期間中、光学装置は、皮膚を介してFITC-sinistrinが発する蛍光を測定します。 注：記録期間中に動物を単独でホストされる必要があります。さらに、水の供給、ならびに突出このようなワイヤ蓋などの構造は、物体との衝撃に起因する電子機器の損傷や運動アーチファクトを回避するために除去しなければなりません。 6.デバイスの削除記録期間が終了すると、麻酔なしでデバイスを削除。必要な場合は、2分間、5 L / minのO 2供給速度で5％イソフルラン下で簡単に動物を麻酔。 慎重に、その後管状の包帯、第1の粘着テープをやってのけます。 優しく皮膚から両面粘着パッチを切り離し、その通常のホームケージに動物を返します。 データのうち7.読みますデバイスからバッテリーを取り外し、接着剤のパッチを削除。 注：新しい測定が開始されるまでのデータがデバイスに保存されています。バッテリが接続されているときに記憶されたデータは、新しい記録に上書きされます。そのため、データをダウンロードする前に、バッテリーを再接続しないでくださいデバイス。バッテリーの不慮の再接続のために意図された10秒の猶予期間があります。 マイクロUSBケーブルを使ってPCにデバイスを接続し、付属のソフトウェアを使用してデータをダウンロードしてください。出力ファイルは、スプレッドシートプログラムで開くと変更することができる.csvファイルです。 光学デバイスのための特定のソフトウェアとのデータファイルを開き、ソフトウェア・プロトコルを使用して除去動態曲線を生成します。 光学デバイスに付属の説明書に従うことによって曲線を分析します。まもなく、データの評価のために、バックグラウンド信号は、前FITC-sinistrin管理を測定し、それぞれマウスおよびラットでは、通常、ボーラス注射後15分及び45分に発生マーカーの指数排泄相の開始をマーク設定。 注：このソフトウェアは自動的に1-比較例により決定し、R 2値と共にFITC-sinistrin半減期（t 1/2）が表示されますtmentモデル。 T 1/2は、変換係数9,10を用いてGFRを計算するために利用することができます。