Summary

Combinado de traslado-Box Entrenamiento con electrofisiológico corteza Grabación y estimulación como una herramienta para estudiar la percepción y aprendizaje

Published: October 22, 2015
doi:

Summary

Shuttle-cuadro aprendizaje de evitación está bien establecido en la neurociencia conductual. Este protocolo se describe cómo el aprendizaje en los roedores lanzadera cuadro se puede combinar con microestimulación sitio específico eléctrica cortical (ICMS) y crónica simultánea en grabaciones in vivo como una herramienta para estudiar varios aspectos del aprendizaje y la percepción.

Abstract

El aprendizaje de evitación de traslado de la caja es un método bien establecido en la neurociencia y experimentales configuraciones de comportamiento eran tradicionalmente hechos a medida; el equipo necesario está disponible por varias empresas comerciales. Este protocolo proporciona una descripción detallada de una evitación de lanzadera cuadro paradigma de aprendizaje de dos vías en roedores (jerbos mongoles aquí; Meriones unguiculatus) en combinación con microestimulación sitio específico eléctrica cortical (ICMS) y crónicas electrofisiológicos in vivo grabaciones simultáneas. El protocolo detallado es aplicable a estudiar varios aspectos de comportamiento de aprendizaje y la percepción en diferentes especies de roedores.

ICMS en sitios específicos de los circuitos corticales auditivas como estímulos condicionados aquí se utiliza como una herramienta para probar la relevancia perceptiva de aferentes específica, eferentes y las conexiones intracorticales. Los patrones de activación distintas pueden ser evocados mediante el uso de diferentes arr electrodo de estimulaciónays para, ICMS capa dependiente locales o sitios ICMS distantes. Utilizando el análisis del comportamiento de detección de señales se puede determinar qué estrategia de estimulación es más eficaz para la obtención de una señal detectable y comportamiento sobresaliente. Además, multicanal-grabaciones paralelas utilizando diferentes diseños de electrodos (electrodos de superficie, electrodos de profundidad, etc.) permiten investigar observables neuronales en el transcurso de tiempo de tales procesos de aprendizaje. Se discute cómo los cambios del diseño de comportamiento pueden aumentar la complejidad cognitiva (por ejemplo, la detección, la discriminación, el aprendizaje de inversión).

Introduction

Un objetivo fundamental de la neurociencia conductual es establecer vínculos específicos entre las propiedades neuronales estructurales y funcionales, el aprendizaje y la percepción. La actividad neuronal asociada con la percepción y el aprendizaje puede ser estudiado por registro electrofisiológico de potenciales de acción y potenciales de campo locales en varias estructuras cerebrales en múltiples sitios. Mientras que los registros electrofisiológicos proporcionan asociaciones correlativos entre la actividad neuronal y el comportamiento, microestimulación directa eléctrica cortical (ICMS) durante más de un siglo ha sido el método más directo para las relaciones causales de pruebas de las poblaciones excitados de las neuronas y sus efectos en el comportamiento y la percepción 1 – 3. Muchos estudios han demostrado que los animales son capaces de hacer uso de diversas propiedades espaciales y temporales de los estímulos eléctricos en tareas de percepción en función de la zona de estimulación dentro de, por ejemplo, retinotopic 4, tonotopic 5, o somatotópica 6 regiones de la corteza. Propagación de la actividad evocada eléctricamente en la corteza está determinada principalmente por la disposición de las fibras axonales y su conectividad sináptica distribuido 2 que, en la corteza, es claramente dependiente de la capa 7. La activación polisináptica resultante evocada por ICMS es a partir de ahora mucho más extendida que los efectos directos de la 2,8,9 campo eléctrico. Esto explica por qué los umbrales de efectos perceptivos provocados por microestimulación intracortical pueden ser fuertemente capa dependiente de 8,10,11 y el sitio dependiente 9. Un estudio reciente demostró en detalle que la estimulación de capas superiores rindió más la activación de amplia propagación de circuitos corticocortical en capas principalmente supragranular, mientras que la estimulación de las capas más profundas de la corteza en un resultado, corticoefferent recurrente focal intracolumnar activación. Experimentos de comportamiento paralelo revelado que este último tiene mucho menor thr detección perceptualesholds 8. Por lo tanto, la ventaja de ICMS estímulos específica de sitio como condicionado fue explotada en combinación con registros electrofisiológicos para relacionar causalmente activaciones específicas de circuitos corticales 8 a medidas de comportamiento de aprendizaje y la percepción en la caja de lanzadera.

El transbordador caja paradigma de dos vías es un aparato de laboratorio bien establecido para estudiar el aprendizaje de evitación 12. Una caja de transporte consta de 2 compartimentos separados por una barrera o puerta. Un estímulo condicionado (CS) que está representado por una señal adecuada como una luz o sonido, se forma contingente seguido por un estímulo no condicionado aversivo (US), como por ejemplo un choque pie sobre un suelo de rejilla metálica. Los sujetos pueden aprender a evitar los EE.UU. por yendo y viniendo de un compartimento de transporte de la caja a la otra en respuesta a la CS. Aprendizaje de traslado-box implica una secuencia de fases de aprendizaje distinguibles 13,14: En primer lugar,los sujetos aprenden a predecir los EE.UU. de la CS por el condicionamiento clásico y escapar de los EE.UU. por el condicionamiento instrumental, como se termina los EE.UU. sobre yendo y viniendo. En una siguiente fase, los sujetos aprenden a evitar los EE.UU. conjunto por yendo y viniendo en respuesta al CS ante nosotros aparición (reacción de evitación). En general, el aprendizaje de traslado caja implica condicionamiento clásico, condicionamiento instrumental, así como el comportamiento dirigido a un objetivo en función de fase de aprendizaje 14.

El procedimiento de traslado de la caja se puede configurar fácilmente y generalmente produce un comportamiento robusto después de algunas sesiones de entrenamiento al día 15 – 17. Además de sencilla condicionamiento de evitación (detección), la caja de transporte se puede utilizar más para estudiar la discriminación de estímulos mediante el empleo de paradigmas Pasa / No Pasa. Aquí, los animales están entrenados para evitar los EE.UU. por una respuesta condicionada (RC) (vaya comportamiento; servicio de transporte en el compartimiento opuesto) en respuesta a una <strong> go-estímulo (CS +) y por el comportamiento de Nogo (alojarse en el compartimiento de corriente; no CR) en respuesta a una Nogo-estímulo (CS-) microstimulation paralelo y registro de la actividad neural con matrices multielectrodo de alta densidad permitir a estudiar. los mecanismos fisiológicos subyacentes aprendizaje exitoso. Varios detalles técnicos que son fundamentales para las combinaciones exitosas de capacitación de transporte-caja, ICMS y electrofisiología en paralelo, se discutirán.

Protocol

Todos los experimentos presentados en este trabajo se llevaron a cabo de acuerdo con los estándares éticos definidos por la ley alemana de protección de los animales de experimentación. Los experimentos fueron aprobados por el comité de ética del estado de Sajonia-Anhalt. 1. encargo multicanal electrodos matrices para Microestimulación y grabación Array microestimulación por encargo Para la entrega de ICMS, preparar electrodos de estimulación en el diseño espac…

Representative Results

En esta sección se muestra un ejemplo representativo de aprendizaje de transporte de la caja en un jerbo de Mongolia. El tema fue entrenado para discriminar el sitio ICMS entre dos electrodos de estimulación implantado 700 micras separados unos de otros en la corteza auditiva (Figuras 1 y 2). Arrays de estimulación se pueden personalizar en diferentes diseños espaciales (Figura 1). Aquí, la discriminación de los dos sitios ICMS se supo a 3 sesiones de entrenamient…

Discussion

Este protocolo describe un método de ICMS específicos del sitio simultáneas y registros electrofisiológicos multi-canal en un animal de aprendizaje mediante el uso de un sistema de lanzadera-box controlado aversivo pie-choque de dos vías. El protocolo hace hincapié en conceptos claves técnicas para dicha combinación, y señala la importancia de la conexión a tierra el animal sólo a través de su electrodo de un terreno común, dejando el gridfloor a un voltaje flotante. Aquí, el aprendizaje auditivo lanzadera…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

El trabajo fue apoyado por becas de la Deustche Forschungsgemeinschaft DFG y Leibniz-Instituto de Neurobiología. Damos las gracias a Maria-Marina Zempeltzi y Kathrin Ohl para la asistencia técnica.

Materials

Teflon-insulated stainless steel wire California Fine Wire diam. 50µm w/ isolation
Pin connector system  Molex Holding GmbH 510470200 1.25 mm pitch PicoBlade
TEM grid Quantifoil Science Services EQ225-N27
Dental acrylic Paladur Heraeus Kulzer 64707938
Hand-held drill OmniDrill35 WPI  503599
Ketamine 500mg/10ml Ratiopharm GmbH 7538837
Rompun 2%, 25ml Bayer Vital GmbH 5066.0
Sodium-Chloride 0.9%, 10ml B.Braun AG  PRID00000772
Lubricant KY-Jelly Johnson & Johnson
Shuttle-box E10-E15 Coulbourn Instruments H10-11M-SC
Stimulus generator MCS STG 2000 Multichannel Systems
Plexon Headstage cable 32V-G20 Plexon Inc. HSC/32v-G20
Plexon Headstage  32V-G20 Plexon Inc. HST/32v-G20
PBX preamplifier 32 channels Plexon Inc. 32PBX box
Multichannel Acquisition System Plexon Inc. MAP 32/HLK2
Cryostate CM3050 S Leica Microsystems GmbH
Signal processing Card Ni-Daq National Instruments
Lab StandardTM Stereotaxic Instruments Stoelting Co. 
Audio attenator g.pah g.pah Guger technologies
Cresyl violet acetate Roth GmbH 7651.2
Roticlear  Roth GmbH A538.1
Sodium acetate trihydrate Roth GmbH 6779.1
Potassium hexacyanoferrat(II) trihydrate Roth GmbH 7974.2
Di-sodium hydrogen phospahte dihydrate Merck 1,065,801,000
ICM Impedance Conditioning Module FHC 55-70-0
Animal Temperarture Controler World Precision Instruments ATC2000

Riferimenti

  1. Cohen, M. R., Newsome, W. T. What electrical microstimulation has revealed about the neural basis of cognition. Current Opinion in Neurobiology. 14 (2), 169-177 (2004).
  2. Histed, M. H., Bonin, V., Reid, R. C. Direct activation of sparse, distributed populations of cortical neurons by electrical microstimulation. Neuron. 63 (4), 508-522 (2009).
  3. Histed, M. H., Ni, A. M., Maunsell, J. H. R. Insights into cortical mechanisms of behavior from microstimulation experiments. Progress in Neurobiology. 103, 115-130 (2013).
  4. Bradley, D. C., et al. Visuotopic mapping through a multichannel stimulating implant in primate V1. Journal of Neurophysiology. 93, 1659-1670 (2005).
  5. Scheich, H., Breindl, A. An Animal Model of Auditory Cortex Prostheses. Audiology and Neurootology. 7 (3), 191-194 (2002).
  6. Romo, R., Hernández, A., Zainos, A., Salinas, E. Somatosensory discrimination based on cortical microstimulation. Nature. 392, 387-390 (1998).
  7. Douglas, R. J., Martin, K. A. C. Recurrent neuronal circuits in the neocortex. Current Biology. 17 (13), 496-500 (2004).
  8. Happel, M. F. K., Deliano, M., Handschuh, J., Ohl, F. W. Dopamine-modulated recurrent corticoefferent feedback in primary sensory cortex promotes detection of behaviorally relevant stimuli. The Journal of Neuroscience. 34 (4), 1234-1247 (2014).
  9. Deliano, M., Scheich, H., Ohl, F. W. Auditory cortical activity after intracortical microstimulation and its role for sensory processing and learning. The Journal of Neuroscience. 29 (50), 15898-15909 (2009).
  10. DeYoe, E. A., Lewine, J. D., Doty, R. W. Laminar variation in threshold for detection of electrical excitation of striate cortex by macaques. Journal of Neurophysiology. 94 (5), 3443-3450 (2005).
  11. Tehovnik, E. J., Slocum, W. M., Schiller, P. H. Delaying visually guided saccades by microstimulation of macaque V1: spatial properties of delay fields. The European Journal of Neuroscience. 22 (10), 2635-2643 (2005).
  12. Wetzel, W., Wagner, T., Ohl, F. W., Scheich, H. Categorical discrimination of direction in frequency-modulated tones by Mongolian gerbils. Behavioural Brain Research. 91, 29-39 (1998).
  13. Cain, C. K., LeDoux, J. E. Escape from fear: a detailed behavioral analysis of two atypical responses reinforced by CS termination. Journal of Experimental Psychology. Animal behavior processes. 33, 451-463 (2007).
  14. Stark, H., Rothe, T., Deliano, M., Scheich, H. Dynamics of cortical theta activity correlates with stages of auditory avoidance strategy formation in a shuttle-box. Neuroscienze. 151, 467-475 (2008).
  15. Ohl, F. W., Wetzel, W., Wagner, T., Rech, A., Scheich, H. Bilateral ablation of auditory cortex in Mongolian gerbil affects discrimination of frequency modulated tones but not of pure tones. Learning & Memory. 6 (4), 347-362 (1999).
  16. Kurt, S., Ehret, G. Auditory discrimination learning and knowledge transfer in mice depends on task difficulty. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (18), 8481-8485 (2010).
  17. Happel, M. F. K., et al. Enhanced cognitive flexibility in reversal learning induced by removal of the extracellular matrix in auditory cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2800-2805 (2014).
  18. Thomas, H., Tillein, J., Heil, P., Scheich, H. Functional organization of auditory cortex in the mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). I. Electrophysiological mapping of frequency representation and distinction of fields. The European journal of neuroscience. 5, 882-897 (1993).
  19. Budinger, E., Heil, P., Scheich, H. Functional organization of auditory cortex in the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). III. Anatomical subdivisions and corticocortical connections. European Journal of Neuroscience. 12, 2425-2451 (2000).
  20. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nature Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  21. Ohl, F. W., Scheich, H., Freeman, W. J. Change in pattern of ongoing cortical activity with auditory category learning. Nature. 412 (6848), 733-736 (2001).
  22. Scheich, H., et al. Behavioral semantics of learning and crossmodal processing in auditory cortex: the semantic processor concept. Hearing Research. 271 (1-2), 3-15 (2011).
  23. Happel, M. F. K., Jeschke, M., Ohl, F. W. Spectral integration in primary auditory cortex attributable to temporally precise convergence of thalamocortical and intracortical input. The Journal of Neuroscience. 30 (33), 11114-11127 (2010).
  24. Ranck, J. B. Which elements are excited in electrical stimulation of mammalian central nervous system: a review. Brain Research. 98, 417-440 (1975).
  25. Clark, K. L., Armstrong, K. M., Moore, T. Probing neural circuitry and function with electrical microstimulation. Proceedings. Biological sciences / The Royal Society. 278 (1709), 1121-1130 (2011).
  26. Ilango, A., Shumake, J., Wetzel, W., Scheich, H., Ohl, F. W. Electrical stimulation of lateral habenula during learning: frequency-dependent effects on acquisition but not retrieval of a two-way active avoidance response. PloS one. 8 (6), e65684 (2013).
  27. Weible, A. P., McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Cortical involvement in acquisition and extinction of trace eyeblink conditioning. Behavioral Neuroscience. 114, 1058-1067 (2000).
  28. Rothe, T., Deliano, M., Scheich, H., Stark, H. Segregation of task-relevant conditioned stimuli from background stimuli by associative learning. Brain Research. 1297, 143-159 (2009).

Play Video

Citazione di questo articolo
Happel, M. F., Deliano, M., Ohl, F. W. Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning. J. Vis. Exp. (104), e53002, doi:10.3791/53002 (2015).

View Video