Summary

Combinado Shuttle-Box Formação com eletrofisiológica Cortex Gravação e Estimulação como Ferramenta para o Estudo de Percepção e Aprendizagem

Published: October 22, 2015
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Summary

Shuttle-box aprendizagem evasão está bem estabelecida em neurociência comportamental. Este protocolo descreve como shuttle-box aprendizagem em roedores pode ser combinado com microstimulation site-specific elétrica intracortical (ICMS) e crônica simultânea em gravações vivo como uma ferramenta para estudar vários aspectos da aprendizagem e percepção.

Abstract

Aprendizagem evasão Shuttle-box é um método bem estabelecido na neurociência e experimentais setups comportamentais foram tradicionalmente feitos sob medida; o equipamento necessário está disponível agora por várias empresas comerciais. Este protocolo fornece uma descrição detalhada de uma de duas vias evitar shuttle-box paradigma de aprendizagem em roedores (gerbilos da Mongólia aqui; Meriones unguiculatus) em combinação com microstimulation site-specific elétrica intracortical (ICMS) e simultâneos crônicas eletrofisiológicos in vivo gravações. O protocolo detalhado é aplicável a estudar vários aspectos do comportamento de aprendizagem ea percepção em diferentes espécies de roedores.

ICMS específicas do local de circuitos corticais auditivas como estímulos condicionados aqui é usado como uma ferramenta para testar a relevância perceptual de aferentes específico, eferentes e conexões intracorticais. Padrões de ativação distintas pode ser evocado, utilizando diferentes arr eletrodo de estimulaçãoays para ICMS, dependente da camada locais ou sites de ICMS distantes. Utilizando análise comportamental detecção do sinal pode ser determinada qual a estratégia de estimulação é mais eficaz para provocar um sinal detectável comportamentalmente e saliente. Além disso, multicanal-gravações paralelas utilizando diversos modelos de eletrodos (eletrodos de superfície, eletrodos de profundidade, etc.) permitem investigar observáveis ​​neuronais ao longo do tempo, destes processos de aprendizagem. Será discutido como as mudanças do projeto comportamental pode aumentar a complexidade cognitiva (por exemplo, detecção, discriminação, aprendizagem reversa).

Introduction

Um objectivo fundamental da neurociência comportamental é estabelecer ligações específicas entre as propriedades estruturais e funcionais neuronais, aprendizagem e percepção. Atividade neural associada com a percepção e aprendizagem pode ser estudada pela gravação eletrofisiológico dos potenciais de ação e potenciais de campo locais em várias estruturas cerebrais em vários locais. Considerando registros eletrofisiológicos fornecer associações correlativas entre a atividade eo comportamento neural, microstimulation elétrica direta intracortical (ICMS) por mais de um século tem sido o método mais direto para as relações causais testes de populações de neurônios excitados e seus efeitos comportamentais e perceptivas 1 – 3. Muitos estudos têm demonstrado que os animais são capazes de fazer uso de várias propriedades espaciais e temporais de estímulos eléctricos em tarefas perceptivas, dependendo do local dentro de estimulação por exemplo retinotópica 4, tonotopic 5, 6 ou somatotópica regiões no córtex. Propagação da actividade eléctrica evocada no córtex é determinada principalmente pela disposição das fibras axonais e a sua conectividade synaptic distribuído 2 que, no córtex, é claramente dependente da camada 7. A ativação resultante polysynaptic evocada pelo ICMS é doravante muito mais difundida do que efeitos diretos do 2,8,9 campo elétrico. Isso explica por que os limiares de efeitos perceptivos induzidos pelo microstimulation intracortical pode ser fortemente camadas dependente 8,10,11 e 9-dependente site. Um estudo recente demonstrou em detalhes que a estimulação de camadas superiores rendeu mais ativação generalizada de circuitos corticocortical em camadas principalmente supragranular, enquanto a estimulação de camadas mais profundas do córtex resultado em um corticoefferent recorrente focal intracolumnar ativação. Experimentos comportamentais paralelas revelou que este último tem muito mais baixo thr detecção perceptualesholds 8. Portanto, a vantagem de site-specific ICMS como estímulos condicionados foi explorada em associação com registros eletrofisiológicos para relacionar causalmente ativações de circuitos corticais específicas 8 a medidas comportamentais de aprendizagem e percepção em shuttle-box.

O bidirecional shuttle-box paradigma é um aparelho de laboratório bem estabelecido para estudar aprendizagem evasão 12. Um shuttle-box é composto por 2 compartimentos separados por um obstáculo ou um pórtico. Um estímulo condicionado (CS) que está representada por um sinal adequado, como uma luz ou de som, é contingente, seguido por um estímulo não condicionado aversivo (EUA), como por exemplo, um choque no pé ao longo de um chão de grade de metal. Os indivíduos podem aprender a evitar os EUA por vaivém de um compartimento shuttle-box para o outro em resposta ao CS. Aprendizagem Shuttle-box envolve uma seqüência de fases de aprendizagem distintas 13,14: Em primeiro lugar,assuntos aprender a prever os EUA a partir do CS por condicionamento clássico e para escapar de os EUA por condicionamento instrumental, como os EUA é encerrado mediante vaivém. Numa fase seguinte, o indivíduo aprende a evitar completamente os EUA por vaivém, em resposta ao CS antes do início dos EUA (reacção de evasão). Geralmente, a aprendizagem shuttle-box envolve o condicionamento clássico, condicionamento instrumental, bem como o comportamento goal-directed dependendo aprendizagem fase 14.

O procedimento shuttle-box pode ser configurado facilmente e geralmente produz um comportamento robusto após algumas sessões diárias de treinamento 15 – 17. Além de simples evasão condicionado (detecção), shuttle-box pode ser ainda utilizado para estudar a discriminação estímulo empregando paradigmas go / Nogo. Aqui, os animais são treinados para evitar os EUA por uma resposta condicionada (CR) (ir comportamento; shuttle para o compartimento oposto), em resposta a um <forte> ir-estímulo (CS +) e pelo comportamento Nogo (permanecer no compartimento de corrente, sem CR), em resposta a um Nogo-estímulo (CS-) microestimulação paralela e gravação de actividade neural com matrizes multieletrodo de alta densidade permitem estudar. os mecanismos fisiológicos subjacentes aprendizagem bem sucedida. Vários detalhes técnicos que são fundamentais para as combinações bem sucedidas de formação shuttle-box, ICMS e eletrofisiologia Paralelamente, serão discutidos.

Protocol

Todos os experimentos apresentados neste trabalho foram conduzidos de acordo com os padrões éticos definidos pela lei alemã para a protecção dos animais experimentais. Os experimentos foram aprovados pelo comitê de ética do Estado da Saxônia-Anhalt. 1. Custom-made Multicanal Eletrodo Arrays para microestimulação e Gravação Matriz microstimulation Custom-made Para a entrega de ICMS, preparar eletrodos de estimulação no projeto espacial desejado (aqui lateral …

Representative Results

Esta seção ilustra um exemplo representativo da aprendizagem shuttle-box em um gerbilo da Mongólia. O assunto foi treinados para discriminar o sítio ICMS entre dois eléctrodos de estimulação implantado 700 uM afastadas uma da outra no córtex auditivo (Figuras 1 e 2). Matrizes de estimulação pode ser personalizado em diversos modelos espaciais (Figura 1). Aqui, a discriminação dos dois locais de ICMS foi aprendido dentro de 3 sessões de treinamento com a apr…

Discussion

Este protocolo descreve um método de ICMS simultâneas site-specific e registros eletrofisiológicos multi-canal em um animal aprender usando um aversivo pé-choque sistema shuttle-box controlado em dois sentidos. O protocolo enfatiza os principais conceitos técnicos para tal combinação e salienta a importância de fundamentar o animal apenas via sua eletrodo terra comum, deixando o gridfloor a uma tensão flutuante. Aqui, auditiva aprendizagem shuttle-box foi aplicada a gerbilos da Mongólia como reorganizações p…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

O trabalho foi financiado por doações do Deustche Forschungsgemeinschaft DFG eo Instituto Leibniz de Neurobiologia. Agradecemos a Maria-Marina Zempeltzi e Kathrin Ohl para assistência técnica.

Materials

Teflon-insulated stainless steel wire California Fine Wire diam. 50µm w/ isolation
Pin connector system  Molex Holding GmbH 510470200 1.25 mm pitch PicoBlade
TEM grid Quantifoil Science Services EQ225-N27
Dental acrylic Paladur Heraeus Kulzer 64707938
Hand-held drill OmniDrill35 WPI  503599
Ketamine 500mg/10ml Ratiopharm GmbH 7538837
Rompun 2%, 25ml Bayer Vital GmbH 5066.0
Sodium-Chloride 0.9%, 10ml B.Braun AG  PRID00000772
Lubricant KY-Jelly Johnson & Johnson
Shuttle-box E10-E15 Coulbourn Instruments H10-11M-SC
Stimulus generator MCS STG 2000 Multichannel Systems
Plexon Headstage cable 32V-G20 Plexon Inc. HSC/32v-G20
Plexon Headstage  32V-G20 Plexon Inc. HST/32v-G20
PBX preamplifier 32 channels Plexon Inc. 32PBX box
Multichannel Acquisition System Plexon Inc. MAP 32/HLK2
Cryostate CM3050 S Leica Microsystems GmbH
Signal processing Card Ni-Daq National Instruments
Lab StandardTM Stereotaxic Instruments Stoelting Co. 
Audio attenator g.pah g.pah Guger technologies
Cresyl violet acetate Roth GmbH 7651.2
Roticlear  Roth GmbH A538.1
Sodium acetate trihydrate Roth GmbH 6779.1
Potassium hexacyanoferrat(II) trihydrate Roth GmbH 7974.2
Di-sodium hydrogen phospahte dihydrate Merck 1,065,801,000
ICM Impedance Conditioning Module FHC 55-70-0
Animal Temperarture Controler World Precision Instruments ATC2000

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Happel, M. F., Deliano, M., Ohl, F. W. Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning. J. Vis. Exp. (104), e53002, doi:10.3791/53002 (2015).

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