正常温度の<em>エクスビボ</em>腎臓の保全のための腎臓の灌流は移植前の移植片

注：試験プロトコールの概略を図1に示されています。 図1.試験プロトコル。正常体温ex vivoで腎臓灌流のこの研究プロトコルは、ブタのモデルに基づいています。外科的移植腎の血管の切開およびヒスチジン – トリプトファン – ケトグルタル酸（HTK）500mlで洗浄した後、移植片を取り出すことができます。 3時間冷蔵（SCS）の後、腎臓移植片は、指定された移植まで数時間のためにex vivoで （NEVKP）正常体温灌流します。 すべての動物は医学研究と「国立衛生研究所によって公開 ''実験動物の管理のためのガイド」、ナショナル協会によって定式化 '' '実験動物管理の原則」に準拠して人道的なケアを受けオンタリオ、カナダ。トロント一般研究所の動物管理委員会は、すべての研究を承認しました。 1.動物このプロトコルで – （33キロ27）男性のヨークシャー豚を使用してください。 2.オルガン検索術前の手順家は少なくとも1週間のための研究施設での男性のヨークシャーブタは彼らのストレスレベルを減少させることができます。麻酔導入前に6時間の最小値のための豚を高速です。 ケタミン（25 mgの/ kg）を、アトロピン（0.04ミリグラム/ kg）を、およびミダゾラム（0.15ミリグラム/ kg）を筋肉内注射により豚の麻酔を開始します。その後、手術室（OR）に住宅設備から動物を輸送します。 ORテーブルに仰臥位で豚を配置します。それが自然にイソフルランの5％と酸素の2 Lを呼吸させます。緩和後、喉頭鏡で声帯を露出させ、挿管によって引き起こされる痙攣を防止するために、2％リドカインでそれらをスプレー。 AF空気を5ml – 6.5ミリメートル管を有するター挿管は、3とカフをブロックします。 注：カプノメトリは気管チューブの正確な位置を明らかにしています。 2.5％のイソフルランガスを下げます。 16呼吸/分、10回換気量 – – 15ミリリットル/ kg体重14に人工呼吸器を設定します。密接に豚を監視します。心拍数および酸素飽和度は、パルスオキシメトリによって記録されます。 無菌条件下で、8.5神父を紹介セルジンガー法13内頸静脈に×10センチカテーテル。したがって、静脈血管を穿刺するために針を使用しています。ワイヤーを導入した後、カテーテルを用いて針を交換してください。ワイヤーを除去し、皮膚にカテーテルを固定します。手術全体の時間当たり乳酸リンゲル溶液200mlを管理します。 外科手術手術野の消毒や報道の後、恥骨結合に剣状突起から正中切開を行います。露出を改善するために、と外科的アプローチを拡張左横切開。タオルで大小の腸を覆い、右の腎臓への最適なアクセスのために左側にそれらを配置します。 腹部大動脈から下大静脈（IVC）を分離。大動脈の背面から大動脈の枝を結紮。 バックへの完全な大動脈解離の後、腎枝に頭蓋大動脈の周りに結紮糸を渡します。さらに、腸骨分岐の頭蓋2合字を配置します。左腎動脈の周りにネクタイを配置します。 その付​​着組織から右腎を解放します。腎静脈、動脈、および尿管を解剖。 絞りを開いて、心臓にキロドナー重量1,000 IUのヘパリンを投与します。 DCDモデルでは、心停止を誘導するために全身ヘパリン化した後、心臓内3分のKCl 40 mvalを注入。心停止は暖かい虚血の出発点として評価されています。 一方、血液の採取のために、CPDAバッグのラインを接続（クエン酸、リン酸、ブドウ糖、Adenosine）左上頸静脈に導入カテーテルに。ソフトスピン（ブレーキなし1,500 XG）を実行します。無菌状態（安全キャビネットクラスII）下でプラズマと軟膜を削除し、輸血用赤血球を保存します。 腸骨分岐上記臓器フラッシュラインを大動脈にカニューレを挿入。大動脈と左腎動脈での合字を接続します。 100センチメートルのH 2 Oの圧力でヒスチジン-トリプトファン-ケトグルタル酸（HTK）溶液を用いて腎臓をフラッシュ胸部の静脈をクランプし、頸静脈カテーテルを介して血液を採取。腎臓の最適なフラッシュを確保するために腎静脈下の腹部の静脈をカットします。 右腎を完全にフラッシュした後、大動脈のセグメントに移植片を取り出します。腎静脈をカットし、長い尿管を残します。 灌流のための腎臓移植​​片のバック表の準備付着組織から腎臓を解放します。タイAと大動脈の頭蓋部分を閉じますND 1/4 "×3/8"減速と下部にカニューレを挿入。大動脈からのより小さな動脈枝を縛ります。 直接1/4 "×3/8"減速と腎静脈にカニューレを挿入。 8神父と尿管を挿管チューブを供給します。 NEVKP開始まで氷上に腎臓を配置します。 3.正常体温エクスビボ腎臓灌流（NEVKP） 灌流回路の作製灌流回路は、新生児心肺バイパス装置（ 図2）で構成されています。 灌流回路の図2の模式図は、回路は、新生児心肺バイパス技術で構成されています。灌流溶液は、静脈リザーバ内に回収されます。遠心ポンプは、酸素富化し、37℃に加温する人工肺内へ溶液を推進します。 PAの後腎臓に腎動脈を通って、80 mmHgの – 動脈バブルフィルターをssing、灌流液は、60の圧力で駆動されます。静脈流出（0から3 mmHgの）は、静脈リザーバーに戻って灌流液をリードしています。注射器および注入ポンプは、追加の化合物との供給を確保します。尿を灌流を通じて収集されます。灌流回路特性を連続的に記録されています。毎時静脈および動脈血ガス試料、及び腎臓損傷マーカーが分析されます。 腎臓灌流装置にカスタムメイド灌流回路を接続します。 静脈リザーバと人工肺にチューブを接続します。人工肺の動脈流出に動脈ラインのチューブを接続し、そのホルダにバブルフィルタを配置します。パージラインを接続します。静脈リザーバの入口に静脈ラインのチューブを接続します。 灌流時の評価のために、動脈コンセントに温度プローブを接続し、流量計とBUを接続bble動脈ラインチューブにセンサー、圧力ラインを接続します。レベルセンサを接続します。 静脈および動脈サンプルポートへの静脈と動脈サンプルラインを接続します。 スタンドに臓器室を置き、下穴を通って静脈および動脈チューブをご紹介します。しっかりとテーブルとチャンバーにチューブを固定します。 ローラーポンプに吸引チューブを挿入し、流体を収集するために、チャンバー内に一端を配置します。 95％O 2/5％CO 2および人工肺を含むガスタンクに酸素チューブを接続します。人工肺と臓器チャンバーに加熱ユニットチューブを接続します。 静脈および動脈流出ラインを閉じるには、チューブのクランプを使用してください。静脈リザーバーの流出に別のチューブクランプを適用します。 灌流液の調製、追加料金、および回路をプライミングで製造尿を交換するために、1つの輸液ポンプを使用して乳酸リンゲル。 静脈リザーバーに栄養（グルコース0.5ミリリットル/時、アミノ酸0.5ミリリットル/時）とインスリン（5 IU /時）を管理するために、1つのシリンジポンプを使用してください。直接動脈ラインに血管拡張剤（ベラパミル、0.25ミリグラム/時間）を注入する第2のシリンジポンプを使用しています。 灌流液と静脈リザーバーを埋めます。したがって、リンゲル乳酸（175ミリリットル）、静脈リザーバにスティーン溶液（200ml）で、DRO（26 ml）を、ヘパリン（千IU）、pHを調整するための重炭酸ナトリウム、およびグルコン酸カルシウムを注ぎます。最後に、洗浄した赤血球（125ミリリットル）を追加します。 人工心肺（HLM）に切り替えます。圧力、温度、レベル、および気泡センサパネルをアクティブにします。潅流全体のデータを記録するデータ管理システム（DMS）をアクティブにします。 37℃に灌流液および臓器チャンバーを暖めるために加熱ユニットをアクティブにします。 O 2供給を開きます。 静脈リザーバの背後にチューブクランプを開き、centrifugを解放完全に空気からアルポンプヘッド。 1000rpmで遠心ポンプを起動し、溶液が回路全体に推進することができます。動脈フィルタをバイパスチューブをクランプし、動脈フィルタから空気を放出します。 圧力ラインをゼロ。注射器および注入ポンプを起動します。 腎臓移植灌流氷から腎臓を取り出し、臓器チャンバーに寝具に腎臓を配置。採尿器に尿カテーテルを配置します。静脈および動脈管は空気の自由であることを確認した後、チューブにコネクタを差し込みます。 動脈および静脈チューブライン間のショートカットを閉じます。遠心ポンプの速度を調節することにより、75 mmHgでの動脈圧を設定します。 レコード圧力、動脈の流量、温度、およびDMSと連続気泡の存在。灌流を通して慎重に値を確認します。灌流の間に、チャンバー内に漏れた血液はコレですバック静脈リザーバに吸引チューブを介して、CTED。 生成された尿の量を記録します。毎時静脈血および尿サンプルを収集します。静脈および動脈血液ガスサンプルおよびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）、および乳酸分析を取ることによって灌流を監視します。 灌流の終了時に、冷たいHTKで移植片を洗い流す、腎動脈と静脈からチューブを外し、移植まで滅菌臓器袋に氷の上に保管します。