쥐의 측면 꼬리 정맥에서 혈액을 샘플링
Summary
Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.
Abstract
Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.
Introduction
혈액에서 얻은 바이오 마커는 유용한 진단, 예측을 제공하고, 심혈관 질환 1, 암 과학 2, 정신 질환 (3)를 포함하여 많은 임상 상황에서 조치를 계층화. 또한 기아, 염증, 또는 응력의 존재도 포함하여, 유기체의 "상태"를 평가하는 기초 연구에 사용될 수있다. 그러한 조치는 또는 샘플이 얻어 일의 시간 및 주제 성별 포함 관심 질문에 중요하지 않을 수도 변수에 의해 영향을받을 수있다. 또한 채혈 절차 자체 동안에 유도 된 응력에 의해 영향을받을 수있다. 스트레스 호르몬과 통증의 지각이 빠르게 혈액의 조성을 변경할 수있다.
설치류가 가장 일반적으로 사용되는 실험용 동물이며, 여러 방법은 채혈을 위해 개발되어왔다. 혈액 샘플링의 이상적인 방법은 최소한의 physiologica이 있어야합니다동물에 L에 미치는 영향은 어떤 마취를 필요로하지, 신속하고 반복 샘플링을 허용하고, 다수의 다운 스트림 응용 프로그램에 대한 충분한 혈액량을 제공합니다. 이들 기준을 충족하지 않는 경정맥 또는 꼬리 끝의 절단의 카테터로 혈액을 수집하기위한 인기있는 기술.
이 프로토콜의 목적은, 마취가 필요하지 않고, 최소한의 스트레스 래트에서 사용하기위한 혈액 샘플링 기술을 설명하는 단일 주체 내에서 여러 혈액 수집을 허용하고, 다수의 분석이 수행 될 수 있도록 상대적으로 큰 샘플 부피를 제공한다 하나의 샘플에. 이 방법의 목적은 최소 급성 스트레스 반응에 의해 영향을 받는다 혈액 샘플을 획득하는 것이다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기, 우리가 일반적으로 사용되는 다른 기술에 비해 상당한 장점을 제공하는 쥐에서 혈액 샘플을 얻기위한 빠르고 간단한 절차를 설명합니다. 첫째, 경정맥 또는 안와 부비동에서 샘플링과는 대조적으로, 마취를 필요로하지 않는다. 혈액 샘플은 행동 절차를 둘러싸 수집 때 학습 및 기억 4,5- 방해 할 수 있기 때문에, 마취제 투여는 바람직하지 않다. 둘째, 이러한 복재 또는 등쪽 페달 정맥에서 정맥 천자 컬렉션과 같은 다른 기술에 비해 더 큰 부피의 혈액을 수집하는 능력을 제공한다. 혈액 1.5ml의 최대, 여기에 설명 된 기술을 사용하는 것은 하나의 시점에 쥐로부터 수집 될 수 있고, 용이하게 복수의 분석이 병렬로 실행될 수 있도록 볼륨. 마지막으로,이 절차는 꼬리 끝 절단 또는 안와 후 출혈에 비해 조직 손상에 대한 가능성을 최소화한다. 이 절차의 사용은 동물 W 준수를 용이elfare 법 및 동물 실험 수행 절차의 결과 통증과 고통을 최소화 할 필요가 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 안내서.
또한이 방법으로 연구자들이 새로운 실험 동물을 억제되는 시간을 최소화하기 위해 구속 꼬리 출혈 기술을 실행하는 것이 권장된다. 구속의 개시에서보다 3 분에서 수집 된 혈액은 최적의 결과를 제공합니다.
여기에 설명 된 프로토콜은 주 당 1 내지 4 회 샘플링에 사용되지 않지만 하루 두번보다 더 될 수있다. 반복 된 혈액 수집이 수행 될 수 있지만, 꼬리의베이스로부터 위쪽으로 움직이는 다른 샘플링 위치가 사용되어야하며, 좌우 꼬리 정맥을 샘플링 위치로 교대한다. 설치류의 총 혈액량은 체중 6-7 %로하고, 전체 혈액의 부피 기준 15 % 이상이 2 주 기간 내에 수집 될 수 없습니다. 혈청또는 플라즈마는 수집 된 샘플 부피의 약 40 % -60 %를 포함한다.
몇몇 사소한 변형으로 여기 기술 된 바와 같이 측면 꼬리 정맥을 통해 혈액 샘플링은 또한 마우스에서 수행 될 수있다. 우선, 단지 작은 게이지 (27 G) 카테터를 사용할 수있다. 둘째로, 그것은 마우스 고정화 오히려 랩보다 튜브 제한 수단을 사용하는 것이 권장된다. 턱밑 관다발 (200-500 μL)을 사용하여 정맥 천자의 마우스로부터 수득 될 수있다 혈액의 부피는 안전하게 꼬리 정맥 (200 μL 최대)에서 수집 될 수있는 것보다 더 크다. 턱밑 관다발에서 혈액을 샘플링하는 것은 최소한의 구속을 필요로하고 더 많은 혈액을 얻을 수 있기 때문에,이 마우스에서 샘플링 선호하는 노선이다.
이 절차는 그 최소 침습 자연과 함께 수행 될 수있는 신속성은 또한 급성 스트레스 반응 (6)에 의해 혈액 계 조치 섭동 가능성을 최소화한다.급성 스트레스 반응은 인터루킨과 다른 면역 활성 인자 (7), 시상 하부 – 뇌하수체 – 부신 축 (8)의 호르몬, 교감 신경계 9 호르몬, 그렐린 (10), 내인성 오피오이드 (11), 도파민 등 많은 분자의 순환 수준을 변경, 수 세로토닌 (12). 이러한 분자들에 의해 조절이 분자 또는 다른 휴식 순환 대책이 요구되는 경우, 스트레스 노광 개시 분만큼 작은 내에 트리거 스트레스 반응을 최소화하는 것이 중요하다.
스트레스 반응은 혈액의 성분을 변경할뿐만 아니라 교감 신경계를 통해 드라이브 증가 때문에 혈관의 수축의 혈액 샘플링을위한 기술적 장애물을 나타내지. 이것은 급성 스트레스 반응 장착되어 정상 래트에서 혈류를 증가 얻는 것이 곤란해진다. 따라서, 동물의 고통은 미님해야합니다급속하게 관심 생리 상태를 반영 샘플들을 획득하기 위해화된.
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 기술 지원을 버지니아 도허티와 Junmei 야오 감사합니다. 이 연구는 NIMH (R01 MH084966), 미국 육군 연구 사무실 및 방위 고등 연구 기관에 의해 투자되었다 KAG에 (W911NF-10-1-0059을 부여).
Materials
| Sodium heparin (1000 USP units/ml) | Patternson Veterinary Supply | 25021040010 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | JT Taylor | JT2020-01 | |
| Dermachlor Rinse-Chlorhexadine | Butler Schein | 6356 | Topical antiseptic solution, 2% chlorhexidine gluconate |
| SURFLO Winged Infusion Sets, Terumo, butterfly catheters | VWR Scientific | TESV25BLK | |
| BD Tuberculin 1cc syringes | VWR Scientific | BD309659 | |
| 1.5 ml microcentrifuge tubes | VWR Scientific | 89202-682 | |
| 500 μl microcentrifuge tubes | VWR Scientific | 21150-330 | |
| Scissors, stainless steel, 5" | VWR Scientific | 82027-586 | |
| 500ml plastic beaker | VWR Scientific | 414004-149 | |
| Clean cloth wrap | Butler Schein | 2993 | |
| Velcro tape, .75" width | Monoprice | B004AF9II6 | Hook and loop tape |
| Timer | VWR Scientific | 62344-641 |
Riferimenti
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