行動アッセイの染色昆虫：麻酔の配偶行動<em>ショウジョウバエ</em

食品着色料とフライ食品の調製底部にある食品の約20ミリリットル（ 図1）を標準ショウジョウバエバイアルを取る。沸騰水1リットル使用して、食品ミックス以下の配合を使用します寒天10gのデキストロース、85gのトウモロコシ粉60gを、酵母を40gと、とろとろの5分間撹拌した。混合物を75℃に冷却した後、10％nipagenの25ミリリットルを追加します。 食品を冷却し、2滴加える固化した後-食品の最上部に青い食品着色料の（約0.5〜1 ml）を、バイアルの表面全体に広がった（ 図1）。好ましければ、異なる色の染料を使用してください。 染料が食品の最上層で吸収されるように、冷蔵庫に2日間食べ物を残し。これは、成熟期間中にハエを損傷し、過度の湿気を避けることができます。その後、その後、過剰な水分がまだ余分な水分を吸い取るための問題である場合にティッシュペーパーの小片を追加し、それを削除します。 転送は、個別またはグループで食品上に飛ぶ。 注：ハエが食べ物に置かれるの1日以内に腸の染色を得ることができます。また、完全に実験前（食用色素への暴露からは観測されなかった成熟期間中の死亡率の増加）に染め食べ物にハエ成熟。 染めハエが非染めハエと容易に区別することができることを確認してください。染料の濃度が高い、または異なる色素のいずれかを使用して1.4 – 彼らは区別することができない場合は、繰り返しが1.1を繰り返します。 食品ぬりえを使用して2つの男と交尾トライアル子孫を製造するために、女性と男性のハエのペアを含む複数のバイアルを（幼虫の混雑を避けるために世話をするが、雄と雌の小グループが、また適している）を設定。 7日 – メスは卵を産むと、すべての5つの新しいバイアルにハエを移動できるようにします。対象の種に適した温度（22℃Fで保存バイアルまたはD. pseudoobscuraとD. Dのsubobscuraと25°C キイロ ）。 25°C、Dのpseudoobscuraで6時間- -実験的なハエを収集する前に、彼らは処女（ キイロショウジョウバエになり確実にするために、男性と女性を収集する前に設定した時間に収集バイアルからすべてのハエを取り除く、22℃で18時間とD.のsubobscura – 22℃で24時間）。 注：ハエが処女でない場合は、この意志バイアス交配試験15で彼らの行動。 ストアと個別に標準75×20ミリメートルのプラスチックバイアル中の成熟した男性（食品の〜20ミリリットルを含む）。これは、男性は、グループ16内に保持されている場合、いくつかの種で見られる男性の配偶行動とフィットネスにマイナスの影響を避けることができます。 所望の処置（この場合はCO 2麻酔）への男性の半分を公開します。 CO 2マットを使用するか、必要な時間のためにハエを露出するようにタップします。 MALの店舗の半分色の食品の各治療におけるES交配が行われるまで。これは交配試験中に、それらを視覚的に区別できるようになります。 転送するためのハエはアスピレータ17を使用しています。治療と男性の色の状態の両方を識別するために、各バイアルにラベルを付けます。ここでは、4つの処理を使用（麻酔を、無着色= G-NC、麻酔、色= GC、無麻酔、無着色、NG-NC、無麻酔、着色された、NG​​-C）。 10のグループとして成熟する生鮮食品バイアル中に新たに登場し、女性を転送します。 3日間、D.のpseudoobscura – – 5日、D.のsubobscura -ハエが交配年齢（ キイロショウジョウバエに成熟することを許可する。7日18ショップが検討されて種に適した温度D（例えば、22℃で飛ぶ。pseudoobscuraおよびD.のsubobscuraおよびキイロショウジョウバエのために25°C）。 CONT（個々のバイアルにメスを移動交配バイアルに順化のための交配裁判の前に1日）食品の〜20ミリリットルをaining。バイアルを区別することができるように、これらのバイアルにラベルを付けます。ニュートラルラベリング（ すなわち 、1から150）を使用して実験を盲目にするように注意してくださいので、それはすべてのバイアル中にハエの身元を推測することはできません。 注：各バイアルにハエを置き人は、彼らが染色された治療法に注意するよう、各バイアルに入れハエの正体を知っている必要があります。しかし、交配時計観察者が自分の身元を知っているべきではありません。これを行うには、少なくとも2の実験者は1つがセットアップすると1が観察するために、必要とされるであろう。 10との間で交配試験を開始 – 午前12時、または光はハエが（ハエのための「夜明け」）にさらされている明/暗サイクルに乗って来ると一致している時。吸引器を使用して（シングル女性のフライを含む）を各交配バイアルに2つの雄ハエを追加します。 2人の男性が異なる処置（麻酔またはからのものであることを確認してくださいコントロール）と、その一方が互いに区別することを可能にし、雄が染色されている注意すべき腸の染色を有する。 （ – 色の着色または非いずれか）交尾が発生した場合、仲間は男性の状態を記録。 2時間の最後の試験は、想定した場合、女性は交尾しません。 注：2時間は、これらの種に適しているが、他のショウジョウバエは、多かれ少なかれ時間を必要とするかもしれない。 3.独身男性の交尾トライアル独身男性試験のため、2回交換してプロトコル2を繰り返します。 ステップ2.3に着色食品に男性を保持しません。 ステップ2.7では、各バイアルにのみ独身男性を追加します。 ステップ2.8において、嵌合開始し、交配が終了時刻が記録されるべき、時間ハエがバイアルに添加された時間を記録する。これらの値から、交尾成功、遅延、および期間を計算。 4.データ解析 ANAのための適切な統計パッケージを使用して、溶解。データが正常であり、唯一の2つの処理がある場合は、t検定または同等の一般化線形モデル（GLM）を使用します。 2つの雄の実験のために、すべての基本的な統計パッケージで提供され二項の試験または二項GLMを使用しています。 注：サンプル·データでは、すべての分析は、Rバージョン3.0.3 19で行った。 各治療20の待機時間と期間の頻度ヒストグラムをプロットし、そのようなシャピロ·ウィルクとして正規性のためのテストを使用することによって、正常のための交配の待ち時間と相手デュレーションデータを確認してください。それが正常でない場合は、それを変換し、または非パラメトリック同等の統計20を使用する。 注：たとえば、独身男性の実験からのデータは変換が正常と等分散の要件を満たしてログインします。 データを標準化することができる場合、2つの治療法21を使用する場合、使用t検定は、単一の雄型試験における交配の遅延および持続時間の違いを調べた。複数の治療が使用される場合、分散分析（ANOVA）20を試してみてください。データを正規化することができない場合は、同等のノンパラメトリック検定21を試してみてください。 食品着色料や競合する男性20の嵌合成功時にCO 2麻酔のどちらかの効果をテストするための二項のテストを使用してください。データ例の場合のように、複数の治療法が、使用される場合、二項誤差構造21とGLMを使用する。 例データ内の2つの男性の臨床試験では、二項誤差構造を持つGLMSを使用しています。一GLMは応答変数（0 =脱気し、脱気しないようにCO 2を調べた説明variables.One GLM装備応答変数（着色= 0と非着色= 1）種と、気体の状態、およびガス処理として色を調べ= 1）種、色の状態、およびガス処理嵌め込まれている。それぞれのケースで、最大のモデルを作成し、AIC 20に基づいてモデルの簡略化を行う。